常慧紅,張路生,王小夢,巴秀成
(山東省濱州市植保站,山東濱州 256600)
瓜類果斑病寄主范圍測定
常慧紅,張路生,王小夢,巴秀成
(山東省濱州市植保站,山東濱州 256600)
瓜類果斑病嚴重危害了瓜類產業的健康發展。本文介紹了通過田間接種多種作物葉片和室內菌懸液浸泡不同葫蘆科作物種子兩種方式進行寄主范圍測定。結果表明,西瓜、甜瓜、苦瓜等葫蘆科作物都是該病菌的寄主,傷口及種子帶菌均可使寄主作物染病。
瓜類果斑病;人工接菌;寄主范圍
瓜類果斑病(Acidovorax avenae subsp.citrulli),又稱細菌性果腐病,是一種嚴重的細菌性病害,是瓜類作物生產中的重要病害[1,2]。該病在20世紀80年代后期在美國爆發而受到廣泛關注,自此,在世界范圍內開始傳播[3]。引起該病的病菌為嗜酸菌屬燕麥種西瓜亞種,具有高度破壞性,是一種常見的瓜類果實采后腐爛的病原菌[4,5]。該病可以通過多種途徑傳播,可侵染植株、果實及種子,使幼苗患病,出現褐色壞死斑;帶菌果實在采后貯藏運輸過程中感染健康果實,使果實表面出現水漬狀斑點,進而導致整個果實腐爛,嚴重影響瓜類產量[6];還可以通過種子遠距離傳播。果斑病具有發病迅速、爆發性強、傳播速度快等特點,感染會給瓜類產量帶來巨大的損失,成為影響我國瓜類生產的主要病害之一[7]。該病高溫多雨潮濕的年份發病較重,一般田塊發病率在45%~75%,嚴重時高達100%,該病的發生嚴重危害了瓜類產業的健康可持續發展[8]。目前,瓜類果斑病在國內部分省區發生危害,主要有海南、陜西、河北、山西、吉林、沈陽、內蒙古、新疆[9]。本文介紹通過田間接種多種作物葉片和室內菌懸液浸泡不同葫蘆科作物種子兩種方式進行寄主范圍測定。
1.1 材料
1.1.1 病原菌
采用瓜類果斑病的標準菌株,山東省植保總站提供。
1.1.2 供試植物
選用西瓜、甜瓜、黃瓜、南瓜、絲瓜、西葫蘆、苦瓜、白菜、豇豆、番茄、辣椒這11種作物作為田間接菌作物,所選品種為濱州市農戶田間地頭主栽品種。選用西瓜、甜瓜、黃瓜、南瓜、苦瓜5種葫蘆科作物作為室內菌懸液浸種試驗,品種及來源見表1。
1.2 方法
1.2.1 田間接種方法
先用4%次氯酸鈉浸種15min,清水沖洗后播種在無菌土中,待出苗后植株3~5葉期,分別采用注射和針刺兩種方法接種,接種所用菌株是在NA培養基上生長48h,然后用無菌水配制成的1×108cfu/mL菌懸液。每株接種5片葉,4次重復。設置清水對照組。接種后外罩塑料袋保濕2d,2d后開始觀察記錄不同作物的癥狀表現,7d后觀察記錄發病情況,計算發病率和病情指數,研究明確病原菌的寄主范圍[10]。
1.2.2 分級標準及計算公式[11]
病斑面積占葉片面積的比例來判斷植株的發病級別,分級標準見表2,然后計算發病率和病情指數,公式見式(1)和式(2)。

1.2.3 室內菌懸液浸種試驗
用無菌水配制成1×108cfu/mL菌懸液,將不同葫蘆科種子浸泡在菌懸液中,震蕩浸泡24h,催芽并使種子帶菌,取出后用無菌水沖洗3~4次,洗去表面菌懸液,無菌水浸泡5種葫蘆科種子為對照,每種種子菌懸液重復處理4次,每次重復30粒種子,進行培養皿之間發芽試驗[12]。將種子均勻放在帶有濕潤吸水紙的滅菌培養皿內,每個培養皿內放置3粒種子,種子上面再覆蓋另一張濕潤吸水紙保濕,28℃內保濕培養,每天觀察發病情況,14d記錄不同種子的發病情況,計算病株率。
2.1 田間接種
2.1.1 田間接種后的癥狀
(1)西瓜癥狀
4d后出現明顯癥狀,病斑直徑0.1mm左右,病斑中間呈暗褐色,周圍有明顯的黃色暈圈。葉片上病斑密集,葉背面病斑呈灰白色,病健交界處明顯,擴展后病斑呈水漬狀,有黃色暈圈,嚴重時病斑融合呈一大斑,黃褐色至黑褐色,病斑沿葉脈進行擴展,后期整個葉片干枯死亡。
(2)甜瓜癥狀
7d后癥狀明顯,病斑沿葉片主脈明顯擴展,葉脈附近葉片顏色變淺,褪綠,病斑呈黃褐色,中間顏色淺,病斑外有黃色暈圈,較嚴重的可見葉片穿孔、開裂。發病速度較慢。
(3)苦瓜癥狀
4d后出現明顯病斑,直徑0.1~0.2mm左右,葉片正面出現暗褐色病斑,病斑明顯擴展,具黃色暈圈,葉背面顏色褪綠,隨后病斑進一步擴大,沿主脈擴展,受葉脈限制,形成多角形或長條形病斑,暗褐色,周圍有黃色暈圈,葉片背面灰白色,后期病斑不融合。

表1 室內菌懸液浸種試驗供試植物

表2 植株發病級數判斷標準
(4)南瓜癥狀
注射4d后出現壞死斑,黃褐色至深褐色,具黃色暈圈,后期病斑穿孔,開裂。
(5)絲瓜癥狀
4d后表現發病癥狀,針刺孔附近出現褪綠斑,顏色變黃,病斑周圍具有明顯黃色暈圈,隨后病斑進一步擴大,具明顯黃色暈圈,較嚴重的可見病斑融合,形成穿孔,葉背面病斑呈水漬狀,中間灰白色。
(6)黃瓜癥狀
病斑顏色較淺,呈白色至灰白色,葉背面癥狀與正面相似,擴展范圍較小,與其他瓜類的癥狀有區別。
(7)西葫蘆癥狀
注射后出現褐色枯死斑,周圍有淺黃色暈圈,葉背面顏色較淺,褪綠;針刺接種處發病明顯,但癥狀較輕。
(8)番茄、辣椒、白菜、豇豆癥狀
接種后上述作物未發現病斑,也未在葉片中分離到病原物。
2.1.2 田間寄主作物發病情況
表3顯示的是11種作物的發病情況調查結果。由表3可知,瓜類果斑病對西瓜、甜瓜、苦瓜的致病力最強,發病率均達到100%,病情指數分別為49.44、38.89、45.56;對南瓜、西葫蘆、絲瓜、黃瓜的致病力也較強,但病斑擴展速度不同;對番茄、白菜、辣椒、豇豆沒有致病力。
2.2 室內菌懸液浸種作物測定
不同葫蘆科作物浸種后發芽時期表現不同,培養2d后甜瓜種子最先發芽,平均發芽率為12.2%。培養7d后,5種作物均發芽,發病癥狀基本相同,具體表現為子葉發病,出現深綠色小點,凹陷,根莖部發病較少,發病輕,部分莖基部、根微變黃色,還未表現典型發病癥狀。培養14d后,不同作物發病癥狀及侵染部位存在區別。西瓜、甜瓜發病最重,部分西瓜、甜瓜種子開裂后即死亡,根系、子葉還未長出。另部分西瓜、甜瓜受侵染后,部分植株根部發病較重,表現為根系不發達,須根少,且部分根系顏色變為黃褐色;部分甜瓜苗莖部發病較重,莖褪綠凹陷,后開裂腐爛,植株死亡;5種作物葉片發病表現癥狀基本相同,初為水浸狀褪綠病斑,后病斑擴大,部分連片,部分病斑周圍出現菌膿。由表4可知,甜瓜病株率最高,為93.33%;其次為西瓜,病株率為90.83%;黃瓜病株率最低,為41.67%。

表3 瓜類果斑病的田間寄主范圍測定結果

表4 瓜類果斑病的室內寄主范圍測定結果
通過田間人工接種和室內菌懸液浸種試驗表明,瓜類果斑病作為一種較危險的病害,對多種作物特別是瓜類具有較強的致病能力,種子帶菌及植株傷口侵入均能導致瓜類作物致病,對西瓜、甜瓜、苦瓜等造成較大的損失。田間接種試驗中,番茄、白菜、辣椒、豇豆未表現發病癥狀,說明未對其有致病力。室內菌懸液浸種試驗中,5種葫蘆科作物均表現發病癥狀,可見,種子帶菌是其傳播途徑之一,生產過程中應注意種子的處理。總之,瓜類果斑病可以通過多種途徑傳播,危害多種作物,在生產中應引起足夠的重視,防止其擴展蔓延。
[1]Bahar O,Burdman S.Bacterial fruit blotch∶a threat tothe cucurbit industry[J].IsraelJournalofPlantSciences,2010,58(1)∶19-31.
[2]Himananto O,Thummabenjapone P,Luxananil P,et al.Detection of Acidovorax avenae subsp citrulli in plant samples using enzyme-linked immunosorbent assay[J].Journal of ISSAAS,2009, 15(1)∶160-161.
[3]Schaad N W,Postnikova E,Sechler A,et al.Reclassification of subspectes ofAcidovoraxavenae as A.avenae(Manns,1905)emend., A.cattleyae(Pavarino,1911)comb.nov.,A.cirulli(Schaad et al.,1978) comb.nov.,and proposal of A.oryzae sp.nov [J].Systematic and Applied Micobiology,2008,31∶434-446.
[4]馬雅敏,吳萍,孫小武,等.瓜類細菌性果斑病菌種子檢疫性消毒方法的篩選[J].湖南農業科學,2013,(9)∶91-94.
[5]陳海燕,陳綿才,秦雙,等.海南甜瓜細菌性果斑病田間藥效試驗[J].長江蔬菜,2012,(2)∶62-64.
[6]董明明,張甜甜,魏梅生,等.利用GICA-PCR快速檢測瓜類細菌性果斑病菌[J].植物檢疫,2011,(1)∶36-38.
[7]牛慶偉,孔秋生,黃遠,等.不同藥劑處理對西瓜細菌性果斑病帶菌種子的影響[J].長江蔬菜,2012,(22)∶79-82.
[8]王婧,畢陽,朱艷,等.巢式PCR快速檢測西瓜細菌性果斑病菌[J].中國農業科學,2014,47(2)∶284-291.
[9]方中達.植病研究方法[M].北京∶中國農業出版社,1998.
[10]宋順華,吳萍,孟淑春,等.種子處理對西瓜細菌性果斑病的防治效果[J].中國瓜菜,2013,26(3)∶5-9.
[11]牛慶偉,孔秋生,黃遠,等.不同藥劑處理對西瓜細菌性果斑病帶菌種子的影響[J].長江蔬菜,2013,(22)∶79-82.
[12]李艷嫦,孔靜月,吳九玲,等.西瓜細菌性果斑病菌在不同場所存活期的檢測[J].華中農業大學學報,2012,(3)∶332-336.
Host Range Determination of Melon Fruit Blotch
CHANG Hui-hong,ZHANG Lu-sheng,WANG Xiao-meng,BA Xiu-cheng
(Binzhou Plant Protection Station of Shandong Province,Binzhou 256600,China)
Melon fruit spot disease seriously endanger the healthy development of the melon industry.In the paper,the author carry out the host range test through two ways,including field inoculation many blades and indoor bacterial suspension with different cucurbit seeds.The results showed that the watermelon,muskmelon,bitter gourd and other cucurbit crops were the host pathogen,wound and seed could make the host infected.
Melon fruit spot disease;artificial host
S436.42 S436.429
A
1008-1038(2017)04-0075-04
2017-02-19
常慧紅(1978—),女,農藝師,從事農作物病蟲害綜合防治工作