可溶性細胞間粘附分子-1及血管內皮生長因子在糖尿病合并多發性骨髓瘤患者血清中的表達水平

岳文婧

可溶性細胞間粘附分子-1及血管內皮生長因子在糖尿病合并多發性骨髓瘤患者血清中的表達水平

岳文婧

目的 探討可溶性細胞間粘附分子-1(sICAM-1)及血管內皮生長因子(VEGF)在糖尿病合并多發性骨髓瘤(MM)患者血清中的表達水平及其關系。方法 隨機選擇60例MM患者(實驗組)以及40例健康體檢者(對照組)為研究對象,觀察和對比不同臨床分期和不同腫瘤量MM患者血清sICAM-1及VEGF的表達水平。結果 健康對照組的sICAM-1、VEGF的表達水平分別為(287±81)μg/L、(113±78)mg/L，實驗組患者血清中sICAM-1及VEGF的表達水平則分別為(375±100)μg/L、(614±205)mg/L，與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。sICAM-1及VEGF表達水平隨著MM腫瘤量的增加和臨床分期增高而上升(P<0.05)。MM患者血清中sICAM-1濃度與VEGF濃度呈正相關。結論 sICAM-1及VEGF在MM患者血清中均呈現出高表達情況，且在不同時期MM患者中均有不同程度的增高。因此VEGF及sICAM-1的濃度或許可作為監測MM患者病情的指標之一。

可溶性細胞間粘附分子-1；血管內皮生長因子；糖尿病合并多發性骨髓瘤

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:725～727)

糖尿病合并多發性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是惡性漿細胞病中最為常見的一種類型[1-3]。多發性骨髓瘤特征是單克隆漿細胞惡性增殖并且分泌大量單克隆免疫球蛋白，易引起廣泛骨質破壞、反復感染等一系列臨床表現并導致了不良后果[4-6]。血管內皮生長因子(VEGF)參與刺激內皮細胞增生，增強血管滲透，是一種影響血管通透性的因子[7]。為提高對糖尿病合并多發性骨髓瘤(MM)診斷和治療水平，本研究分析不同臨床分期患者血清中可溶性細胞間粘附分子-1(sICAM-1)及血管內皮生長因子(VEGF)的表達水平以及兩者在實驗中所表現的相關性，探究其在MM診斷及治療中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇MM患者60例，其中男性32例，女性28例，年齡20～70歲，平均(50.2±3.2)歲；再根據腫瘤量分組：低腫瘤量18例，中腫瘤量21例，高腫瘤量21例；按照臨床分期分組，Ⅰ期15例，Ⅱ期23例，Ⅲ期22例。健康體檢者40例，其中男性21例，女性19例，年齡20～69歲，平均年齡(49.2±2.3)歲，該組均無糖尿病、高血脂、肺、腎疾病等情況。各組性別、年齡等基本情況均無統計學意義。

1.2 方法

受試者清晨空腹狀態下抽靜脈血5 ml于試管中，在室溫下靜置30 min，然后以3 500轉/分鐘，(離心半徑為6 cm)離心15 min分離血液，將分離的血清置于-80 ℃保存，待測。

VEGF測定:運用雙抗體夾心ABC-ELISA法。取適量的實驗組和對照組的VEGF單抗包被于酶標板上，VEGF和抗體結合，從而形成免疫復合物鏈接在板上。加入OPD，當出現黃色時，加入終止液硫酸，顏色變深，在492 nm處測OD值，由于VEGF與OD的值成正比，可通過繪制標準曲線求得VEGF濃度。其中具體的操作步驟如下：(1)建立標準曲線：取8個標準孔，向每孔中加入樣品稀釋液90 μl,將第1個孔加入標準品90 μl，混合均勻，后用加樣器取出95 μl,將其加入第2個孔中，如此反復操作，直到第7孔時，去除90 μl棄去。第8孔為空白對照組。(2)加樣：向每個待測樣品孔中加入90 μl待測樣品。(3)將反應板置于37 ℃下2 h。(4)洗板：用洗滌液將反應板洗滌4次，向濾紙上印干。(5)向每孔中加入第一抗體工作液40 μl。(6)將反應板置于37 ℃下1 h。(7)洗板：用洗滌液將反應板洗滌4次，向濾紙上印干。(8)向每孔中加入酶標記抗體工作液90 μl。(9)將反應板置于37 ℃下1 h。(10)洗板：用洗滌液將反應板洗滌4次，向濾紙上印干。(11)向每孔中加入底物工作液90 μl,將其置于37 ℃暗處反應7 h。(12)向每孔中加入一滴終止液將其混合均勻。(13)在492 nm處測吸光值。

同樣sICAM-1也采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 健康對照組與實驗組患者血清中sICAM-1和VEGF表達水平的比較

健康對照組血清sICAM-1和VEGF顯著低于MM組患者，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 實驗組與對照組血清中sICAM-1和VEGF表達水平 比較

2.2 MM患者血清中sICAM-1及VEGF比較

sICAM-1及VEGF在血清中的表達水平隨著腫瘤量增加和臨床分期增高而上升，兩者具有正相關性(P<0.05)，見表2。

表2 MM患者血清中sICAM-1及VEGF比較

3 討論

多發性骨髓瘤是惡性漿細胞病中最常見的一種類型，其伴隨著單克隆抗體產生為特征的一種克隆性血液病。sICAM-1是細胞表面粘附分子中的重要一員，是一種單鏈糖蛋白，其主要存在于血管內皮細胞的表面。這些粘附分子會因為炎癥、腫瘤自身免疫疾病等的出現而在血液中濃度升高。血清中sICAM-1參與細胞的識別和粘附，在介導免疫和炎癥反應中有重要意義。本研究顯示，MM患者血清的sICAM-1水平顯著高于正常對照組。在多數情況下，sICAM-1基本不表達或很少表達，然而當機體處于炎性細胞分子攻擊或其它因素刺激后，sICAM-1則表達于多種細胞表面，從而促炎癥的產生與發展[8-9]。該研究中發現MM患者血清的sICAM-1的含量隨著患者腫瘤量的增加而增加。血管內皮細胞生長因子是一種特異性極強的作用于內表皮細胞的細胞因子，有強大的促血管形成能力和增加血管通透性作用。MM患者的骨髓瘤細胞分泌OAF、淋巴細胞毒素等激活破骨細胞，可使骨質疏松，導致局部腫塊[10]。這一過程離不開血管生成因子的調控，特別是VEGF在當中起著至關重要的作用。血管內皮細胞生長因子是一種具有肝素結合活性的二聚體糖蛋白，可以促進血管發生，內皮細胞的增殖，從而維持血管的正常狀態和完整的結構。人VEGF基因其mRNA可形成5種同分異構體。研究發現，在多發性骨髓瘤細胞中，第一，由于缺氧可誘導VEGF基因的轉錄，使得VEGFmRNA的穩定性增強，促進VEGF的表達；第二，B細胞衍生的細胞因子對T細胞、巨噬細胞等的分泌作用是Tnf-α、IL-6等活化，誘導VEGF表達并使其與特異性受體結合；第三，MM患者中，其血管生成因子和血管抑制因子之間的穩態遭到破壞，從而影響了機體對MC的免疫應答效應，使得血液中VEGF含量升高[11-12]。血管內皮細胞上一種叫囊泡小體的細胞器與基膜作用形成一些有利于大分子物質通過的結構，VEGF就是通過調節這些結構的開啟來增加血管通透性的。血管內皮細胞生長因子在腫瘤研究中被首次發現。它能夠使小靜脈對大分子物質的通透性增加，使得胸水增加。MM患者血液中VEGF高于生理濃度，從而促進腎小球毛細血管的內表皮細胞的增殖和分裂，同時促進了內皮細胞中膠原酶等血管活性物質的釋放增強了血管的通透性，從而形成蛋白尿或微蛋白尿。

本研究顯示，MM患者組血清中sICAM-1以及VEGF均顯著高于健康對照組，具有統計學差異(P<0.05)。已有研究表明，體內有某些因素作用于腫瘤細胞，使其產生過量的sICAM-1，從而導致MM患者血清中sICAM-1表達水平上升。血清中sICAM-1以及VEGF的含量與不同MM患者的臨床分期有關，并且MM患者腫瘤量越多，病情就越嚴重，相應的血清中sICAM-1以及VEGF的表達水平就越高。從研究數據可以看出，MM患者血清中VEGF和sICAM-1存在正相關關系,有統計學意義(P<0.05)，說明有可能其中一種因子為另一種因子的產生起到了促進作用。

綜上所述，MM患者血清中VEGF和sICAM-1的表達水平可以作為MM患者病情診斷和療效判斷的依據。

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(編輯：甘 艷)

Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1 Vascular Endothelial Growth FactorExpression Levels in Serum and Diabetic Patients with Multiple Myeloma Patients

YUEWenjing.

TheFirstPeople'sHospitalofHuizhou,Huizhou,516003

Objective To investigate the soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in diabetic patients with multiple myeloma(MM)relationship between the expression of serum levels.Methods 60 cases of MM patients(experimental group)and 40 healthy volunteers(control group)were randomly selected for the study,different clinical stages and different tumor volume MM serum expression levels of sICAM-1 and VEGF were observed and compared.Results sICAM-1,the expression levels of VEGF in the control group were(287±81) μg/L,(113±78) mg/L,the expression levels of the experimental group sICAM-1 and VEGF,respectively up(375±100) μg/L,(614±205) mg/L,and the control group were significantly different(P<0.05).sICAM 1-concentration and the concentration of VEGF was positively correlated with the serum.Conclusion sICAM-1 and VEGF in the serum of patients with MM in both showed high expression,and have increased in different degrees in different periods in MM patients.Therefore,VEGF and sICAM-1 concentration or as an indicator of the condition of patients with MM license.For patients with clinical manifestations and progression of MM patients has extremely important reference value.

Soluble intercellular adhesion molecule-1;Vascular endothelial growth factor;Diabetic patients with multiple myeloma

廣東省惠州市科技計劃項目(編號：2015Y053)

516003 廣東省惠州市第一人民醫院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.009

R733.3

A

1001-5930(2017)05-0725-03

2016-07-20

2016-12-08)