血清膠質纖維酸性蛋白對腦膠質瘤的診斷及判斷預后的價值

李 偉 袁 方 劉丙麗 張冠群 劉 君 朱 亮 王江波 劉志廣

血清膠質纖維酸性蛋白對腦膠質瘤的診斷及判斷預后的價值

李 偉 袁 方 劉丙麗 張冠群 劉 君 朱 亮 王江波 劉志廣

目的 檢測膠質瘤患者膠質纖維酸性蛋白(GFAP)，分析其與腦膠質瘤診斷及轉歸的關系。方法 選取膠質瘤患者60例作為實驗組，顱內良性腫瘤患者40例作為對照組，ELISA法檢測入組患者血清GFAP含量，免疫組織化學法法檢測膠質瘤組織、癌旁組織、對照組腦組織中GFAP表達，分析膠質瘤患者GFAP表達與其臨床病理特征的相關性。結果 腦膠質瘤組GFAP含量為(0.05±0.04) ng/ml，較良性腫瘤組降低，差異有統計學意義(P<0.05)；膠質瘤組織中出現7例GFAP陽性表達(++)，陽性率11.7%，較癌旁組織、良性腫瘤組織的低，差異有統計學意義(P<0.05)；腦膠質瘤組GFAP表達水平與膠質瘤病理類型、原發灶數目及大小、其他臟器轉移、放療、化療有關(P<0.05)，與年齡、性別、PS評分無關(P>0.05)；病理類型、原發灶數目及大小、遠處轉移、放療、化療均是獨立危險因素(P<0.05)。結論

腦膠質瘤；血清膠質纖維酸性蛋白；臨床病理特征

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:719～721)

腦膠質瘤是最常見的惡性顱內原發性腫瘤，目前其診斷主要依賴影像學檢查，即使是最先進的MRI 檢查也不能完全確診，尤其是那些影像學表現不典型的病例[1]。研究者們致力于尋找更為準確有效的標志物來診斷膠質瘤及判斷預后。膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是星形細胞胞質內的特異性中間絲結構蛋白[2]，研究提示，GFAP在維持星形細胞形態、決定細胞分化和細胞功能方面具有特別的作用[3]。本研究選取在我院住院的腦膠質瘤患者，檢測其GFAP的表達變化，分析其與腦膠質瘤診斷及轉歸的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年1月在我院住院的腦膠質瘤患者60例作為實驗對象，其中，男性22 例，女性18 例，年齡30～70歲，平均年齡(43.22±6.24) 歲。均經細胞學或組織病理學確認為腦膠質瘤，并接受手術治療。其中，星形細胞瘤22例，室管膜瘤18例，少突膠質細胞瘤12例，膠質母細胞瘤8例。選擇同時期在我院住院的顱內良性腫瘤患者40例作為對照組，其中，男性19 例，女性21 例，年齡30～68歲，平均年齡(44.12±3.44) 歲。包括垂體瘤13 例，腦膜瘤11 例，神經鞘瘤8 例，中樞神經細胞瘤2 例，膽脂瘤2 例，海綿狀血管瘤4 例。入組患者在年齡、性別等方面無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑及器材 Na2EDTA抗凝劑；GFAP ELISA試劑盒；GFAP封閉液+一抗，兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒；離心機(上海飛鴿)；顯微鏡(日本Olympus)；酶標儀(英國TECNA)；脫水機(日本TIYODA)；切片機(德國Leica)；計算機圖像分析系統(美國惠普)。

1.2.2 ELISA法檢測入組患者血液中GFAP含量 入組患者抽取空腹靜脈血，1 500 r/min離心10 min后吸取上清，保存于低溫冰箱中。計算板孔數；試劑盒常溫放置30 min；標準品稀釋；每個濃度均設5個復孔，加樣；配液；洗滌；顯色；終止；酶標儀以450 nm的波長處測量吸光值；繪制線性回歸方程，計算樣品濃度。

1.2.3 IHC法檢測組織中GFAP的表達 福爾馬林液固定、脫水、透明；包埋、切片；熱修復；過氧化氫阻斷；正常山羊血清封閉；加一抗50 μl靜置1 h；加二抗50 μl 靜置10 min；顯色、終止；復染、分化；封片。

判斷標準：GFAP陽性結果判定以細胞核不染色，胞膜或胞質出現棕黃色顆粒為陽性，陰性(-)：染色細胞數≤10%；弱陽性(+)：11%～25%；陽性(++)：26%～50%；強陽性(+++)：>50%。

1.3 統計學分析

應用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，計數資料用χ2檢驗，計量資料用方差分析，以(均數±標準差)表示，多因素用Logistic回歸模型，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ELISA法檢測入組患者血清中GFAP含量

抽取入組患者外周靜脈血，檢測血清GFAP含量，結果發現，腦膠質瘤組GFAP為(0.05±0.04) ng/ml，較良性腫瘤組降低，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 IHC法檢測入組患者組織中GFAP表達

對入組患者組織中GFAP的表達進行檢測，結果發現，膠質瘤組織中出現7例陽性表達(++)，陽性率為11.7%，較癌旁組織、良性腫瘤組織降低，差異有統計學意義(P<0.05)；具體結果見表1。

表1 IHC法檢測入組患者組織中GFAP表達情況/例

注：*為與癌旁組織比較，P<0.05；#為與良性腫瘤組織比較，P<0.05。

2.3 GFAP表達與腦膠質瘤臨床病理特征的相關性

GFAP表達與膠質瘤病理類型、原發灶數目及大小、其他臟器轉移、放療、化療有關(P<0.05)，與年齡、性別、PS評分無關(P>0.05)；具體結果見表2。

表2 GFAP表達與腦膠質瘤臨床病理特征的相關性(例，%)

2.4 GFAP表達與膠質瘤臨床病理特征的多因素分析

多因素分析結果顯示：病理類型、原發灶數目及大小、遠處轉移、放療、化療均是獨立危險因素，具體結果見表3。

表3 GFAP表達與膠質瘤臨床病理特征的多因素分析

3 討論

目前，改善腦膠質瘤患者預后的主要治療方法即手術切除，但腦膠質瘤患者缺乏典型的早期臨床表現，影像學檢查在早期無法確診，常常貽誤最佳的治療時機[4]。因此，尋找能夠協助診斷及判斷預后的新指標至關重要。膠質纖維酸性蛋白(GFAP)是1種分子量為50～52 kD的酸性蛋白，屬細胞骨骼蛋白，是星形細胞的標志蛋白，在星形細胞中有豐富的、唯一的表達[5]。在缺血損傷時，刺激成熟星形細胞合成GFAP，GFAP 主要用于標記損傷后膠質活動。在正常情況下GFAP 受星形膠質細胞的動力調節[6]。本研究選取在我院住院的腦膠質瘤患者，檢測其GFAP的表達變化，分析其與腦膠質瘤診斷及轉歸的關系。

在本研究中，選取我院腦膠質瘤及良性顱腦腫瘤患者，檢測患者血清GFAP含量發現，腦膠質瘤組GFAP較良性腫瘤組降低。進一步對腦膠質瘤組織、癌旁組織及對照組腦組織中GFAP表達檢測發現，膠質瘤組織中GFAP陽性率11.7%，較癌旁組織、良性腫瘤組織降低。這表明，在腦膠質瘤血清及組織中均存在GFAP的表達下降。既往實驗發現，GFAP 基因敲除小鼠的星形細胞高表達祖細胞標志物nestin，且這種細胞中間絲形成減少，生長時飽和密度增高[7]，提示GFAP 表達的喪失能使細胞呈現惡性表型,并使膠質瘤進展更迅速。

本研究對腦膠質瘤組GFAP表達與臨床病理特征的關系分析發現，GFAP表達與膠質瘤的病理類型、原發灶數目及大小、其他臟器轉移、放療、化療有關，與年齡、性別、PS評分無關；病理類型、原發灶數目及大小、遠處轉移、放療、化療均是獨立危險因素。許多研究者利用GFAP 免疫組織化學技術對大量腦腫瘤進行觀察表明膠質瘤的惡性程度與GFAP 表達呈顯著負相關，即分化越差，GFAP表達越少甚至完全不表達，認為GFAP 可以作為該類腫瘤惡性程度及預后判定的一項良好的標志物[8]。將GFAP 基因導入不表達GFAP 的髓母細胞瘤瘤細胞中，細胞生長受抑，形態顯著改變并向星形細胞分化，GFAP 重新獲得表達，表達程度與腫瘤的增殖、分化呈明顯負相關[9]。瘤細胞對抗癌藥物的敏感性提高[10]。

綜上所述，腦膠質瘤患者存在GFAP的表達降低，其表達水平與腦膠質瘤的病理類型、原發灶數目及大小、其他臟器轉移、放療、化療有關。星形細胞瘤，原發灶數目少，病灶小，無遠處轉移，接受放化療等抗腫瘤治療者，GFAP水平升高。GFAP可能作為腦膠質瘤患者早期診斷及判斷預后的新指標。

[1] 陳梅花,陳貴珍, 賈萬鈞.Ki67、GFAP 在人腦惡性膠質瘤病理分級中的意義〔J〕.中國醫藥導報,2014,18(11):31-34.

[2] Restrepo A,Smith CA,Agnihotri S,et al.Epigenetic regulation of glial fibrillary acidic protein by DNA methylation in human malignant gliomas〔J〕.Neuro Oncol,2011,13(1):42-50.

[3] 覃 川，楊秀江，晏 怡.腦膠質瘤患者血清膠質纖維酸性蛋白濃度及臨床價值〔J〕.第三軍醫大學學報,2012,21(34):2214-2215.

[4] 姜振富,李 梅,韋 鴻,等.腦膠質瘤中Ki-67、Kras 和Braf蛋白的表達及臨床意義〔J〕.現代腫瘤醫學,2013,21(3):507-510.

[5] Peraud A,Mondal S,Hawkins C,et al.Expression of fascin,an actin-bundling protein,in astrocytomas of varying grades〔J〕.Brain Tumor Pathol,2003,20(2):53-58.

[6] Gerth AMJ,Deighton RF,McCulloch Jl,et al.Proteomic st- udies in low -grade gliomas：what have they informed about pathophysiology?〔J〕.Diffuse Low-grade Gliomas in Adults,2013,2:117-136.

[7] 張正保,覃 川,晏 怡.血清胰島素生長因子-1和膠質纖維酸性蛋白在腦膠質瘤分級及預后評估中的臨床價值〔J〕.華西醫學,2013,28(1):11-13.

[8] Yusubalieva GM,Baklaushev VP,Gurina OI,et al.Immunochemical analysis of glial fi brillary acidic protein as a tool to assess astroglial reaction in experimental C6 glioma〔J〕.Bull Exp Biol Med,2010,149(1):125-130.

[9] Middeldorp J,Hol EM.GFAP in health and disease〔J〕.ProgNeurobiol,2011,93(3):421-443.

[10] Ferguson SD.Malignant gliomas:diagnosis and treatment〔J〕.Dis Mon,2011,57(10):558-569.

(編輯：吳小紅)

Value of GFAP in the Diagnosis and Prediction of Clinical Outcome of Glioma

LIWei,YUANFang,LIUBingli,etal.

XuzhouCentralHospital,Xuzhou,221009

Objective To study glial fibers acidic protein (GFAP) in glioma,to analyze its relationship with the diagnosis and outcome of glioma.Methods 60 patients with glioma were selected as experimental objects,40 patients with intracranial benign tumor was the control group, ELISA method was used to detect the contents of serum GFAP,immune histochemical method was used to detect GFAP expression in glioma tissues,tissue adjacent to carcinoma,and brain tissues of the control group.Relevance of GFAP expression of glioma and clinical pathological features were analyzed.Results The expression of GFAP in glioma group was (0.05±0.04) ng/ml,which was lower than that in benign tumor group (P<0.05).There were 7 cases of GFAP positive expression in glioma tissues,(P<0.05).The expression of GFAP in the glioma group was significantly correlated with the pathological type,the number and size of the primary tumor in the glioma group,and the difference was statistically significant (P<0.05) (P<0.05),which was independent of age,sex and PS score (P>0.05).Pathological type,number and size of primary tumor,distant metastasis,radiotherapy and chemotherapy were independent risk factors (P<0.05).Conclusion Expression of GFAP in glioma patients reduced,and GFAP expression level are related with pathological type,number and size of original site of glioma,transfer of other organs,radiotherapy and chemotherapy.

Glioma;Serum acidic protein glial fibers;Clinical pathological features

江蘇省徐州市科技項目(編號:KC14SH029)

221009 江蘇省徐州市中心醫院

劉志廣

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.007

R739.41

A

1001-5930(2017)05-0719-03

2016-07-08

2017-03-12)

腦膠質瘤患者存在GFAP的表達降低，其表達水平與腦膠質瘤的病理類型、原發灶數目及大小、其他臟器轉移、放療、化療有關。