星斑川鰈無水保活運(yùn)輸技術(shù)研究

徐中平

摘 要：該文研究了星斑川鰈無水保活運(yùn)輸技術(shù)方法及在無水保活處理中的應(yīng)激反應(yīng)。結(jié)果表明，星斑川鰈在低溫麻醉狀態(tài)下空氣暴露處理65 h存活率為100%，處理84 h存活率達(dá)90%；血清皮質(zhì)醇濃度在0～35 h和48～65 h時(shí)間段分別升高2～3倍和20-24倍，顯示星斑川鰈的應(yīng)激反應(yīng)程度隨脅迫進(jìn)程呈現(xiàn)為階梯狀特點(diǎn)；血糖濃度變化趨勢(shì)基本與血清皮質(zhì)醇水平變化相對(duì)應(yīng)。以上結(jié)果顯示，星斑川鰈進(jìn)行無水保活運(yùn)輸在該實(shí)驗(yàn)條件下可安全跨時(shí)35 h，且有可能跨時(shí)65 h，并保持100%存活。

關(guān)鍵詞：星斑川鰈 無水保活 空氣暴露 皮質(zhì)醇

中圖分類號(hào)：S917.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2017）02（a）-0075-02

魚類無水保活運(yùn)輸具有顯著降低運(yùn)輸成本，避免設(shè)備腐蝕，加快運(yùn)輸速度，縮減運(yùn)輸用時(shí)等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)也是人們努力突破的運(yùn)輸方式。星斑川鰈（Platichthys stellatus）屬鰈形目、鰈科、星鰈屬，為一種大型鲆鰈底棲性魚類，由于該魚營養(yǎng)價(jià)值高，口感獨(dú)特，在國內(nèi)外市場(chǎng)上深受歡迎，特別是歐洲、日本、韓國，在市場(chǎng)上與鮭鱒魚類相媲美。自2006年實(shí)現(xiàn)全人工規(guī)模化育苗以來，星斑川鰈養(yǎng)殖規(guī)模逐步擴(kuò)大，已成為替代大菱鲆、牙鲆等重要的海水魚養(yǎng)殖種類，并實(shí)現(xiàn)出口韓國和日本。

星斑川鰈的無水保活運(yùn)輸及應(yīng)激生理反應(yīng)，目前未見報(bào)道。該實(shí)驗(yàn)將星斑川鰈商品魚長時(shí)間無水保活處理，統(tǒng)計(jì)了存活率，觀測(cè)了其間星斑川鰈對(duì)空氣暴露處理應(yīng)激反應(yīng)特點(diǎn)，為星斑川鰈無水保活運(yùn)輸技術(shù)開發(fā)應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

星斑川鰈（415±53）g由日照市星斑川鰈良種場(chǎng)提供。供試魚從養(yǎng)殖池?fù)瞥觯庞谛〕兀? m×3 m）暫養(yǎng)，養(yǎng)殖用水為砂濾海水，鹽度28‰，水溫18 ℃，連續(xù)充氣增氧，停食2 d后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理。

皮質(zhì)醇放射免疫分析藥盒購于北方生物技術(shù)研究所，其他藥品均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 低溫與空氣暴露處理和回水復(fù)活實(shí)驗(yàn)

逐漸向暫養(yǎng)池加冰降低水溫（5 ℃/h）至4 ℃，觀察魚呼吸明顯減慢、觸及反應(yīng)十分微弱后撈出，平放于自制塑料盒（23 cm×35 cm×13 cm）內(nèi)的懸空塑料網(wǎng)片上（1尾/盒），然后裝入塑料袋內(nèi)（1盒/袋），再放入空氣保濕材料和CO2吸收藥包，將塑料袋內(nèi)空氣趕出，沖入氧氣，扎緊后放置于4 ℃冷室，模擬無水保活運(yùn)輸柜進(jìn)行處理。處理結(jié)束后將存活魚從塑料袋中取出，轉(zhuǎn)入冷室外盛有同溫海水的水箱中（增氧），24 h后再轉(zhuǎn)入暫養(yǎng)池中繼續(xù)觀察至8 d，統(tǒng)計(jì)存活率。

1.2.2 觀察與記錄

每間隔約7 h觀察一次，確定處理魚的存活狀況，并隨機(jī)抽樣3尾采集血液制備血清。魚鰓蓋仍能均勻張合呼吸則認(rèn)為存活，反之，停止張合、反復(fù)刺激無反應(yīng)則視為死亡。

1.2.3 血清制備

抽樣魚迅速浸入含麻醉劑M-222（20 mg/L）的海水（4 ℃）中，使之處于深度昏迷狀態(tài)，用注射器收集其尾部動(dòng)靜脈血液注入離心管內(nèi)，于冰箱（4 ℃）靜置24 h后收集血清，離心（10 000 g，4 ℃）10 min，取上清液，分裝于1.5 mL離心管，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 血清皮質(zhì)醇測(cè)定

按照皮質(zhì)醇放射免疫分析藥盒提供的使用操作方法，由山東大學(xué)核醫(yī)學(xué)研究所測(cè)定。

1.2.5 血糖測(cè)定

采用鄰甲苯胺法[1]進(jìn)行血糖測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 無水保活處理過程中的魚存活情況

經(jīng)加冰降溫麻醉的星斑川鰈魚入充氧袋內(nèi)進(jìn)行無水保活處理。處理65 h內(nèi)未發(fā)現(xiàn)有魚死亡，處理84 h發(fā)現(xiàn)處理魚死亡兩尾，處理實(shí)驗(yàn)結(jié)束，存活率為90%。將存活魚15尾回水復(fù)活，5～17 min后回水魚呼吸頻率逐漸加快，30 min后觸動(dòng)全部有反應(yīng)，24 h后再轉(zhuǎn)入暫養(yǎng)池繼續(xù)觀察7 d，全部回水魚體色、呼吸、觸及反應(yīng)和游泳姿態(tài)均未見異常，且有攝食行為，復(fù)活率為100%。

2.2 無水保活處理過程中血清皮質(zhì)醇水平的變化

由圖1顯示，魚經(jīng)過低溫海水麻醉后血清皮質(zhì)醇濃度比未處理對(duì)照升高約0.5倍。將麻醉后的魚進(jìn)行無水保活處理，在0～65 h的處理時(shí)期內(nèi)，魚血清皮質(zhì)醇濃度繼續(xù)升高，呈階梯狀特點(diǎn)。在0～35 h階段，血清皮質(zhì)醇測(cè)定值比未處理對(duì)照魚升高2～3倍，在48～65 h期間，處理魚血清皮質(zhì)醇水平上升比未處理對(duì)照魚升高20～24倍。這些數(shù)據(jù)表明，處理前35h，應(yīng)激反應(yīng)相對(duì)平緩，處理48 h后，應(yīng)激反應(yīng)則明顯加劇。將處理84 h的存活魚放回海水中進(jìn)行復(fù)活，3 d后測(cè)定的血清皮質(zhì)醇水平與未處理對(duì)照測(cè)定值相當(dāng)，從血清皮質(zhì)醇水平上看，長時(shí)無水保活處理的星斑川鰈回水后能夠恢復(fù)到正常靜息狀態(tài)。

2.3 低溫與無水保活處理過程中血糖濃度的變化

如圖2所示，低溫處理使星斑川鰈血糖濃度顯著升高約1倍，進(jìn)一步的空氣暴露處理使星斑川鰈血糖水平繼續(xù)升高，并隨處理時(shí)間的延長而逐漸增大升高的幅度，在48 h觀測(cè)點(diǎn)達(dá)到峰值，在處理48～65 h期間血糖濃度維持高位水平。糖濃度的變化態(tài)勢(shì)基本與血清皮質(zhì)醇濃度變化相對(duì)應(yīng)。空氣暴露處理84 h實(shí)驗(yàn)魚回水復(fù)活處理72 h后，血糖濃度基本恢復(fù)到未處理對(duì)照水平。以上結(jié)果進(jìn)一步佐證了2.2部分血清皮質(zhì)醇觀測(cè)結(jié)果所得出的結(jié)論。

3 討論

該研究將經(jīng)低溫麻醉星斑川鰈商品魚入充氧袋內(nèi)進(jìn)行空氣暴露處理，來模擬無水保活運(yùn)輸，并觀測(cè)處理魚應(yīng)激生理反應(yīng)。血液皮質(zhì)醇水平的升高常被看作是魚類應(yīng)激的靈敏信號(hào)[2]。在脅迫條件下，魚類腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)活動(dòng)加強(qiáng)，皮質(zhì)醇分泌量大大增加，引發(fā)一系列的應(yīng)激生理反應(yīng)，如加速糖異生，抑制外周組織葡萄糖利用，血糖升高等，血糖升高亦常被作為可靠的生理應(yīng)激指標(biāo)之一[3]。因此，測(cè)定無水保活處理過程中的血清皮質(zhì)醇和血糖水平變化，對(duì)于了解星斑川鰈無水保活運(yùn)輸過程中的生理變化具有重要意義。

星斑川鰈經(jīng)低溫麻醉和無水保活處理，處理65 h存活率為100%，處理84 h存活率為90%。在0～35 h和48～65 h在階段血清皮質(zhì)醇和血糖水平呈現(xiàn)出階梯狀升高特點(diǎn)（如圖1，圖2）。基于這些觀察結(jié)果，本研究推測(cè)，在0～35 h階梯期，星斑川鰈應(yīng)處于應(yīng)激反應(yīng)的警告期和抵抗期，而在48～65 h階梯期則處于應(yīng)激反應(yīng)的疲憊期。這一推斷結(jié)合存活率的觀測(cè)提示，星斑川鰈無水保活運(yùn)輸在35 h以內(nèi)對(duì)于存活是相對(duì)安全平穩(wěn)的，在48～65 h處理時(shí)長內(nèi)處理魚雖處于應(yīng)激反應(yīng)的疲憊期，但保活運(yùn)輸是有可能實(shí)現(xiàn)的，而超過65 h，星斑川鰈可能因過度應(yīng)激反應(yīng)造成不可逆轉(zhuǎn)傷害而死亡。

參考文獻(xiàn)

[1] 洪磊，張秀梅.環(huán)境脅迫對(duì)許氏平鮋和花鱸血糖、血沉降的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2005，12（4）：414-418.

[2] Wendelaar B S E.The stress response in fish[J].Physiological Reviews，1997，77（3）：59l-625.

[3] 盧玉標(biāo)，游翠紅，王樹啟，等.淺水應(yīng)激后黃斑藍(lán)子魚生理指標(biāo)變化及牛磺酸的抗應(yīng)激作用[J].水生生物學(xué)報(bào)，2014，38（1）：68-73.