響葉楊莖段組織培養(yǎng)獲得再生植株的技術(shù)

宋建清

摘 要：響葉楊（ Populus adenopoda）是我國特有的速生用材樹種，為楊柳科（Salicaceae） 、楊屬（ Populus）的一種喜光陽性樹種，落葉喬木，高可達(dá)30m，在我國南方10 多個(gè)省均有分布。本文主要就響葉楊莖段組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了研究，利用響葉楊幼嫩莖段通過激素誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽、增殖、生根，待組培苗生長到一定程度后，再移栽煉苗，最后在室外定植。

關(guān)鍵詞：響葉楊；組織培養(yǎng)；莖段

一、前言

植物組織培養(yǎng)是一種將植物體的部分細(xì)胞或組織與母體分離，在適當(dāng)?shù)臈l件下加以培養(yǎng)，使它們能夠生長、發(fā)育、分化與增殖的技術(shù)。原理是來自植物細(xì)胞的全能性分化能力，也就是植物體內(nèi)的某一類細(xì)胞，能夠獨(dú)立發(fā)育并且分化成為完整的植物成體。

響葉楊作為我國特有的速生樹種，其通過傳統(tǒng)的扦插成活率極低，大大影響了其推廣范圍和速度，本文通過對響葉楊組織培養(yǎng)技術(shù)的研究，力爭為響葉楊推廣提供強(qiáng)力支撐。

二、試驗(yàn)材料及方法

1.試驗(yàn)材料。試驗(yàn)材料為定植3年以上的干形良好、生長迅速的響葉楊，在春季截取響葉楊幼嫩莖段作為組織培養(yǎng)的外植體。

2.試驗(yàn)方法

（1） 外植體處理。將從響葉楊母樹上截取的幼嫩莖段剪成1-1.5cm長，帶腋芽的小段，放置于250ml的燒杯中，燒杯口用紗布覆蓋扎緊，在流水下沖洗2-3h。取出外植體，用70%的CH3CH2OH消毒20-40s后，再用0.1%的HgCl2浸泡6-8min，然后在無菌條件下用無菌水清洗4-6次，用無菌紗布吸干。

（2） 試驗(yàn)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。各階段培養(yǎng)基采用1/2MS或者M(jìn)S，蔗糖5-6%，pH 5.5-6.0，瓊脂6-8g.L-1。白天除自然光照外，進(jìn)行9-10h的熒光燈補(bǔ)照（不定芽誘導(dǎo)接種后，先置于暗培養(yǎng)箱中48-72h，然后放在光照培養(yǎng)箱上光照培養(yǎng)），溫度控制在22-28℃。

（3）培養(yǎng)程序。整個(gè)培養(yǎng)的程序?yàn)椋和庵搀w→誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽→截取不定芽調(diào)整激素比例誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽→截取3-4cm的不定芽到生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根→長出3條以上根，長度在4cm以上后移出進(jìn)行煉苗。

三、結(jié)果與分析

1.不定芽誘導(dǎo)。首先對基本培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基不定芽誘導(dǎo)率顯著高于1/2MS培養(yǎng)基。在此基礎(chǔ)上，選取NAA和6-BA作為不定芽誘導(dǎo)的激素，各選取了三個(gè)濃度進(jìn)行了正交試驗(yàn)，最終選出MS+6-BA0.5mg.L-1 +NAA0.03mg.L-1作為不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方。從表1可以看出，NAA對不定芽誘導(dǎo)率的影響遠(yuǎn)大于6-BA。

2.不定芽增殖。截取生長健康的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)基上接種3-4個(gè)，接種后不需要進(jìn)行暗培養(yǎng)，直接進(jìn)行光照培養(yǎng)，20d后可以增殖大量的不定芽，表2可以看出，MS+6-BA 0.4mg.L-1 +NAA 0.01mg.L-1為最佳培養(yǎng)基配方，6-BA和NAA均對不定芽增殖率有著較大的影響，又尤以6-BA為主；NAA對不定芽長勢（長度）影響較大，且在同一6-BA濃度下，隨著NAA濃度升高，芽分化數(shù)呈現(xiàn)減小趨勢，可能是高濃度NAA或者前期NAA的積累抑制了芽的分化。

3.壯苗生根。不定芽增殖完成后，截取長度3-4cm的不定芽到MS空白培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng)15d左右，再轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上。

對MS和1/2MS培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)1/2MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根率顯著高于MS培養(yǎng)基，因此選用1/2MS培養(yǎng)基作為生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，并添加不同濃度的NAA進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果見表3。可以看出，1/2MS +NAA0.01-0.03 mg.L-1的誘導(dǎo)率最高，根系條數(shù)最多，根系長度最長，初步可以判斷為最佳生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

4.煉苗。生根后的組培幼苗，移栽到蛭石與沙土按1：3混合的基質(zhì)上，基質(zhì)先期用高錳酸鉀消毒，注意保持幼苗的水分，防止由于缺水導(dǎo)致的幼苗死亡，根據(jù)試驗(yàn)情況可以看出在管護(hù)良好的情況下，移栽的幼苗成活率在85%以上。

四、討論與分析

響葉楊組織培養(yǎng)其不定芽誘導(dǎo)階段主要受到NAA的影響，增殖階段主要受6-BA影響，生根階段1/2MS培養(yǎng)基不添加任何激素的情況其效果已經(jīng)較好，同時(shí)隨著前期增殖階段不定芽體內(nèi)逐漸積累了較高含量的NAA，可以滿足生根需求。因此，建議隨著增殖繼代不斷增加，逐漸降低激素濃度，防止激素積累過多出現(xiàn)玻璃化苗等，同時(shí)還可以降低成本。

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