法氏囊活性肽BP5對鴨肝炎病毒滅活疫苗免疫效果的影響

閆婉婉+張巫凡+張聰+王臣

摘 要：本試驗旨在研制具有良好免疫效果的免疫肽，通過將法氏囊活性肽BP5作為佐劑添加到油乳苗中免疫雛鴨，對免疫鴨體液免疫和細胞免疫指標的檢測來評價其對鴨肝炎病毒油乳滅活苗免疫效果的影響。結果表明，BP5作為免疫佐劑能明顯增強鴨肝炎病毒油乳滅活苗的體液免疫和細胞免疫應答，為進一步的研究奠定了基礎。

關鍵詞：法氏囊；活性五肽；鴨肝炎病毒；滅活疫苗；體液免疫；細胞免疫

鴨病毒性肝炎是一種由鴨肝炎病毒感染導致的急性和高度致死性傳染病，病死率達100%。疫苗接種是預防本病的有效措施，但目前使用的油乳滅活苗僅能誘導機體的體液免疫應答而不能有效刺激細胞免疫應答。因此研制與開發新型免疫增強劑成為當前家禽養殖業發展的當務之急。法氏囊活性五肽（BP5）是法氏囊中分離出來的一種新型活性小肽，能同時促進T、B淋巴細胞的增殖，不但能提高機體體液免疫和細胞免疫，還能平衡Th1和Th2類型免疫反應。而且它的免疫平衡作用是一般免疫增強劑所不具備的。本研究通過將法氏囊活性五肽作為免疫佐劑添加到鴨肝炎病毒油乳滅活苗中對雛鴨進行免疫，然后通過指標的測定來評價法氏囊活性肽對油苗免疫效果的影響，為開發一種新型免疫增強劑提供實驗依據。

一、材料與方法

1.試驗材料

法氏囊活性五肽，由西安華辰科技有限公司合成，純度達95%；健康非免疫雛鴨35只，購于洛陽首陽山鑫科畜禽養殖合作社；實驗兔2只，購于孫旗屯。

2.肽的設計及合成

法氏囊活性肽BP5根據已報道的序列（Cys-Lys-Asp-Val-Tyr），由西安華辰科技有限公司合成，純度達95%。

3.動物分組與免疫

將35只鴨分為三組：空白組（5只）、疫苗組（15只）、疫苗+法氏囊活性五肽組（15只）。再將每組動物的免疫劑量設置三個梯度，每個梯度5只鴨。分別為：空白組；疫苗組：0.2 mL，0.5 mL，0.8 mL油乳滅活苗；疫苗+BP5組：0.2 mL疫苗+100 ug BP5，0.5 mL疫苗+100 ug BP5，0.8 mL疫苗+100 ug BP5。做好標記，采取肌肉注射。待首免后兩周后進行二次免疫。采集鴨血100 mL，提取血清中的IgG來免疫兔子，在0 d進行首免，14 d進行二免。首免后21 d采集兔血50 mL，提取血清于-20°C冰箱內保存備用。

4.疫苗免疫后鴨血清中抗體的ELISA檢測

采集首免后7 d、14 d、21 d鴨血液，分離血清進行血清中抗體效價檢測。

5.疫苗免疫后鴨細胞免疫效果的檢測

T細胞E玫瑰花環試驗：分離淋巴細胞和制備紅細胞懸液，制片并觀察。鏡下淋巴細胞呈藍紫色或淡藍色，綿羊血紅細胞為無色，圍繞淋巴細胞形成花環。

二、結果與分析

1.免疫鴨血清中抗體水平的動態分析

鴨經疫苗首免后，疫苗組和佐劑組與對照組相比均有鴨肝炎病毒抗體的產生，疫苗+ BP5組產生抗體水平均高于疫苗組。其中疫苗+佐劑組中0.5 mL劑量的免疫效果最好，0.8 mL劑量的免疫效果其次，0.2 mL劑量的免疫效果最差，說明佐劑不但有增強疫苗的免疫效果的作用，而且免疫效果與疫苗的用量有關。

2.免疫鴨T細胞E玫瑰花環結果

疫苗加佐劑組與單獨疫苗組相比E玫瑰花環的形成率顯著增高，而且BP5配合中等劑量的滅活苗免疫，細胞免疫水平最高。

三、討論

鑒于法氏囊活性肽具有免疫佐劑的潛能，本研究通過人工合成法氏囊活性五肽，并將其作為佐劑添加到鴨肝炎病毒滅活疫苗中，通過固定法氏囊五肽的添加量，設置不同的疫苗免疫量來免疫雛鴨根據免疫指標顯示，隨著免疫的加強，疫苗+ BP5體液中抗體的水平呈均上升趨勢，OD405值均比相對應的疫苗組顯著增高；淋巴細胞形成率與單獨疫苗組相比提高顯著，這表明法氏囊活性五肽作為佐劑能顯著提高鴨肝炎病毒滅活疫苗的體液免疫和細胞免疫應答，為法氏囊活性五肽作為免疫佐劑配合滅活疫苗使用提供了參考依據。

參考文獻：

[1] 楊漢春.動物免疫學（第二版）（M）.北京：中國農業大學出版社，2003.8.

[2] 張秀根，蔣貽海，范根成，等.法氏囊活性肽對新城疫油乳劑滅活苗免疫效果的初步研究[J].中國獸醫雜志，1998，24（ 11） ：48- 49.

作者簡介：閆婉婉（1996- ），女，河南焦作人，本科學歷。

王臣（1979-），男，安徽六安人，博士學歷，副教授，研究方向：動物分子病原學與免疫學。