右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用

葉敏，陳達柔，陳宇中，杜少冰，杜展鑫，李玉鳳，唐珮瑜，楊昌山，朱曉琴

（1廣州醫科大學第二臨床學院 麻醉學系，廣東 廣州511436；2廣州醫科大學 病理生理學教研室，廣東 廣州511436；3廣州醫科大學 生理學教研室，廣東 廣州511436）

·實驗研究·

右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用

葉敏1，陳達柔1，陳宇中1，杜少冰1，杜展鑫1，李玉鳳1，唐珮瑜1，楊昌山2，朱曉琴3*

（1廣州醫科大學第二臨床學院 麻醉學系，廣東 廣州511436；2廣州醫科大學 病理生理學教研室，廣東 廣州511436；3廣州醫科大學 生理學教研室，廣東 廣州511436）

目的探討右美托咪定后處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響。方法構建肝臟缺血再灌注損傷模型，測定各組大鼠在不同方法處理后的ALT、AST含量和SOD活性，制作肝臟冰凍切片觀察。結果右美托咪定后處理可提高肝組織SOD活性，降低血清ALT、AST含量。病理學觀察：與S組相較，IR組肝組織損傷明顯；與IR組相較，P組及Dex組損傷減輕，N組損傷加重。結論右美托咪定后處理可減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷。

右美托咪定；后處理；肝缺血再灌注；保護

肝臟血流中斷造成肝缺血再灌注損傷 （ischemia-reperfusion injury，IRI）嚴重影響肝臟手術成功率和患者生存率［1－2］。藥物后處理 （pharmacological post－conditioning，PPC）通過使用模擬內源性機制的藥物來發揮后處理的保護作用［3］。研究［4］表明右美托咪定預處理可減輕肝缺血再灌注損傷，但其后處理對肝缺血再灌注損傷是否有保護作用及其機制尚未明確。本研究建立大鼠肝缺血再灌注損傷模型，探討右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物丙泊酚注射液 （20 mL∶200 mg），右美托咪定注射液 （2 mL∶200 μg），硫代乙酰胺 （上海研臣實業有限公司），大鼠SOD ELISA試劑盒 （上海酶聯生物技術有限公司）。

1.2 動物分組與模型制備成年雄性SD大鼠50只，體重200～230 g，隨機分為5組：假手術組 （S組）、肝缺血再灌注組（IR組）、右美托咪啶后處理組 （Dex組）、陽性對照組 （P組）、陰性對照組 （N組）。術前12 h禁食不禁水，經腹注射3%戊巴比妥鈉40 mg／kg麻醉后固定。S組僅游離第一肝門，其余組用無損血管夾夾閉第一肝門，制作肝缺血再灌注損傷模型，30 min后恢復灌注。恢復灌注同時，Dex組立即經尾靜脈泵注5 μg·kg－1·h－1的Dex，P組泵注 2 mg／kg丙泊酚，N組泵注 400 mg／kg硫代乙酰胺，以上藥物均溶于NS配成3 mL混合液，S組及IR組注射等量NS，均維持30 min。再灌注2 h后處死大鼠。

1.3 模型制備成功判定去除血管夾幾秒后，肝由蒼白恢復至正常的赤褐色。

1.4 樣本提取與檢測

1.4.1血清檢測 大鼠處死后，取下腔靜脈血3.5～4 mL，室溫靜置2 h，離心提取血清，－70℃冰箱保存，送醫院檢測ALT、AST含量。

1.4.2肝組織勻漿檢測 取新鮮肝臟，以4℃冰NS沖洗表面血液，濾紙吸干表面水份，取 100～200 mg，剪碎移入勻漿管內，按w∶v＝1∶9比例加入4℃NS，冰浴中勻漿，制備100 mg／L肝組織勻漿液，離心后取上清液，檢測肝SOD活性。

1.5 肝組織病理學觀察取新鮮肝臟用4%多聚甲醛固定，－80℃冰箱保存，制備冰凍切片，HE染色，光鏡觀察。

1.6 統計學分析應用SPSS 13.0統計軟件分析數據。計量資料以均數 ±標準差 （±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清ALT、AST含量比較與S組比較，各組ALT、AST含量明顯升高 （P＜0.05）；與IR組比較，Dex組和P組ALT、AST含量下降 （P＜0.05），N組ALT、AST含量升高 （P＜0.05）；與P組比較，Dex組及N組ALT、AST含量升高；與N組比較，Dex組ALT、AST含量降低 （P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較 （±s）

表1 各組大鼠血清ALT、AST含量比較 （±s）

注：與S組相比，aP＜0.05；與IR組相比，bP＜0.05；與P組相比，cP＜0.05；與N組相比，dP＜0.05。

分組 鼠數 ALT（U／L） AST（U／L）S組 10 49.0±14.2 38.5±30.9 IR組 10 870.0±65.2a 1050.0±162.4aDex組 10 642.3±67.5abcd 780.0±15.4abcdP組 10 319.0±37.4ab 454.8±74.4abN組 10 1283.4±433.0abc 1559.0±492.6abc

2.2 肝組織勻漿SOD活性比較與S組比較，各組SOD活性降低 （P＜0.05）；與IR組比較，Dex組和P組SOD活性升高（P＜0.05），N組SOD活性下降 （P＜0.05）；與P組比較，Dex組及N組SOD活性下降 （P＜0.05）；與N組比較，Dex組SOD活性升高 （P＜0.05）。見表2。

表2 各組肝勻漿SOD活性比較 （±s）

表2 各組肝勻漿SOD活性比較 （±s）

注：與S組相比，aP＜0.05；與IR組相比，bP＜0.05；與P組相比，cP＜0.05；與N組相比，dP＜0.05。

分組 鼠數 SOD（U／mg）S組 10 46.2±2.1 IR組 10 12.8±1.1aDex組 10 32.8±5.8abcdP組 10 40.3±2.8abN組 10 6.9±1.8abc

2.3 肝組織病理學觀察S組肝組織無明顯變化；Dex組及P組肝細胞輕度腫脹；IR組肝細胞明顯腫脹，肝細胞條索狀結構紊亂；N組肝細胞腫脹加重，部分有空泡變性，細胞核消失，條索狀結構紊亂，竇周間隙變窄。見圖1。

3 討論

各種原因導致肝血流中斷引起的肝缺血再灌注損傷，嚴重影響患者生存率。文獻［4］報道，右美托咪定預處理對肝有保護作用。但臨床上往往失去預處理時機，而藥物后處理更具有臨床實用價值，故本實驗研究右美托咪定后處理是否具有減輕再灌注損傷作用。

圖1 各組大鼠肝臟病理觀察 （HE染色，200×）

研究［5］表明，丙泊酚對肝有保護作用，硫代乙酰胺可造成急性肝損傷，故設丙泊酚為陽性對照，硫代乙酰胺為陰性對照，以排除假陰性及假陽性。血清學及病理學結果顯示，本實驗模型建立成功，并提示缺血再灌注導致肝細胞膜及線粒體膜嚴重破壞，損傷肝實質；右美托咪定后處理可減輕肝缺血再灌注損傷，但其后處理對肝保護作用不如丙泊酚。

肝缺血再灌注損傷機制尚未明確。其中，氧自由基的產生及其引發的脂質過氧化是缺血再灌注損傷的主要機制之一。酶學結果顯示，與S組比較，各組SOD活性降低；與IR組比較，Dex組SOD活性升高。結合血清學及病理學結果推測，缺血再灌注過程產生的大量氧自由基，引起脂質過氧化，細胞膜損傷，破壞細胞完整性，導致嚴重肝損傷。而右美托咪定后處理提高抗氧化酶活性，清除過多氧自由基，抑制氧自由基產生，減輕脂質過氧化程度，從而減輕肝損傷。

綜上所述，右美托咪定后處理對肝缺血再灌注損傷有一定保護作用，其機制可能與提高抗氧化酶活性，減少氧自由基生成，提高機體對缺血再灌注損傷的耐受能力有關。具體機制及其他影響因素仍需進一步研究。

[1]Lesurtel M,Selzner M,Petrowsky H,et al.How should transection of the liver be performed?:a prospective randomized study in 100 consecutive patients:comparing four different transection strategies[J]. Ann Surg,2005,242(6):814-823.

[2]Helling TS.Liver failure following partial hepatectomy[J].HPB (Oxford),2006,8(3):165-174.

[3]Tsang A,Hausenloy DJ,Mocanu MM,et al.Postconditioning:a form of"modified reperfusion" protects the myocardium by activating the phosphatidylinositol 3-kinase-Akt pathway[J].Circ Res,2004,95 (3):230-232.

[4]Arslan M,Metin Comu F,Kücük A,et al.Dexmedetomidine protects against lipid peroxidation and erythrocyte deformability alterations in experimental hepatic ischemia reperfusion injury[J].Libyan J Med, 2012,7(1):18185.

[5]郭永清,余淑珍,郭劍津,等.丙泊酚與肝缺血/再灌注損傷后細胞凋亡 [J].中國藥物與臨床,2007,7(11):859-860.

（責任編輯：常海慶）

Protective Effects of Dexmedetomidine Postconditioning on Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Rats

YE Min1,CHEN Darou1,CHEN Yuzhong1,DU Shaobing1,DU Zhanxin1,LI Yufeng1,TANG Peiyu1,YANG Changshan2,ZHU Xiaoqin3*
(1Department of Anesthesiology,the Second Clinical College of Guangzhou Medical University,Guangzhou 511436,China;2Department of Pathophysiology,Guangzhou Medical University,Ghuangzhou 511436,China;3Department of Physiology,Guangzhou Medical University,Ghuangzhou 511436,China;*

ZHU Xiaoqin,E-mail:495612726@qq.com)

ObjectiveTo determine the effect of dexmedetomidine postconditioning on hepatic ischemia-reperfusion injury in rats.MethodsA rat model of hepatic ischemia-reperfusion was established.The contents of serum AST and ALT,and liver superoxide dismutase (SOD)activity of each group with different treatments were measured.The frozen section of liver was observed.ResultsDexmedetomidine postconditioning could elevate the hepatic SOD activity and reduce the contents of serum AST and ALT.Pathological observation showed that:compare with group S,the liver tissue in group IR had more obviously damage;Compared with group IR,the damage of liver tissue in group P and group Dex were alleviated,the damage of liver tissue in group N were aggravated.ConclusionsDexmedetomidine postconditioning attenuates hepatic ischemia-reperfusion injury in rats.

Dexmedetomidine;Postconditioning;Hepatic ischemia-reperfusion;Protection

R614

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.02.0176

2016－10－13

2016－12－02

2016年度全國大學生創新創業訓練計劃項目 （No. 201610570006）；廣東大學生科研創新培育專項資金 “攀登計劃”項目（No.pdjh2016b0411）；2015-2016年廣州醫科大學大學生課外科技活動立項資助研究項目 （No.2015A005）

葉敏 （1994－），女，廣東信宜人，麻醉專業本科。

＊通訊作者：朱曉琴，博士，教授，E－mail：495612726＠qq.com。