多房棘球蚴病血清學(xué)及免疫學(xué)研究進(jìn)展

摘要：本文綜述多房棘球蚴病相關(guān)免疫學(xué)診斷不同抗原分子的有效性和可行性以及疫苗的開發(fā)研究進(jìn)展，強(qiáng)調(diào)具有高度特異性和敏感性的新抗原組分是當(dāng)前提高多房棘球蚴病免疫診斷效率及疫苗的開發(fā)研究的關(guān)鍵。

關(guān)鍵詞：多房棘球蚴病;免疫學(xué)診斷;抗原;疫苗;綜述

多房棘球蚴病（alveolar echinococcosis ， AE）是由多房棘球絳蟲（Echinococcus multilocularis ， Em）的續(xù)絳期幼蟲寄生在人體引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病，是國(guó)家衛(wèi)生部規(guī)劃防治的五大寄生蟲病之一。A E在我國(guó)主要流行于新疆、青海、四川、西藏、甘肅、寧夏、內(nèi)蒙古和黑龍江等8省區(qū)[1]。人體被感染后，多房棘球蚴呈腫瘤樣生長(zhǎng)，主要侵犯人體肝臟，晚期手術(shù)難度大，致死率高[2]。由于多房棘球蚴生長(zhǎng)較為緩慢，多房棘球蚴病患者早期通常無(wú)明顯癥狀，僅靠臨床診斷較為困難。

免疫學(xué)診斷可以用于多房棘球蚴病的早期篩查、初次診斷、手術(shù)或藥物治療后病人的隨訪及流行病學(xué)調(diào)查[3]，因此，免疫學(xué)診斷輔助臨床確診顯得尤為重要。然而棘球絳蟲生物學(xué)種屬繁多，宿主多樣，分布廣泛，其抗原成分復(fù)雜，交叉反應(yīng)多，給免疫學(xué)診斷帶來(lái)了極大的困難。隨著近年來(lái)基因重組技術(shù)和噬菌體肽呈現(xiàn)技術(shù)的出現(xiàn)，人們期望通過(guò)使用免疫學(xué)手段來(lái)解決多房棘球蚴病的診斷和預(yù)防問(wèn)題，并且已經(jīng)取得了較大的進(jìn)展[4]。目前，已被報(bào)道的多房棘球絳蟲相關(guān)抗原分子主要有Em2、EmⅡ/3-10、Em 14-3-3、Em16、EM18、EM95、EMY162等，其各有優(yōu)缺點(diǎn)，實(shí)用性及有效性有待進(jìn)一步提高。

1.Em2

Em2最早由Gottstein等[5]發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用親和層析法分離出多房棘球蚴組織可溶性抗原中與細(xì)粒棘球蚴囊液抗原具有高度同源性的抗原組份，進(jìn)一步通與細(xì)粒棘球蚴囊液抗體進(jìn)行免疫印跡分析后獲得了特異性較高的多房棘球蚴抗原。Em2的分子量約54kDa，具有較高的敏感性和特異性，目前已被WHO確定為多房棘球蚴病免疫學(xué)診斷的參照指標(biāo)。但因其屬于多房棘球蚴板狀層成分，其抗體滴度的消長(zhǎng)不能反映病灶活動(dòng)與否，在藥物治療穩(wěn)定或蟲體鈣化的患者中仍可出現(xiàn)較高滴度。Vogel等[6]通過(guò)免疫印跡分析法將Em2與多房棘球蚴病患者血清進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，敏感性和特異性分別為98%（40/41）和96%（74/77）。具有較高的敏感性和特異性，可作為多房棘球蚴病疫苗研究候選分子。

2.Em14-3-3

Siles-Lucas等[7]通過(guò)使用親和層析法得到14-3-3的抗體。以此抗體從多房棘球蚴cDNA文庫(kù)中鑒定出一個(gè)特異基因克隆14-3-3，其分子量約27kDa。Em的14-3-3基因在其基因組中為單克隆基因，RT-PCR顯示Em續(xù)絳期幼蟲表達(dá)Em14-3-3蛋白水平是多房棘球絳蟲成蟲的10倍，免疫熒光顯示Em14-3-3位于多房棘球絳蟲原頭節(jié)生發(fā)層，其過(guò)度表達(dá)與多房棘球蚴病的病情活動(dòng)及原頭蚴的進(jìn)行性、侵入性和腫瘤樣無(wú)限制生長(zhǎng)特性所引起肝臟等臟器損害密切相關(guān)。免疫組化提示14-3-3 蛋白質(zhì)也存在于細(xì)粒棘球絳蟲的成蟲體壁、排泄及分泌物中。而細(xì)粒棘球絳蟲幼蟲分泌物中未測(cè)到14-3-3蛋白。研究表明[8]不同地理株的Em14-3-3蛋白同源性為95%，而不同生長(zhǎng)期的Em14-3-3蛋白同源性為88%，Em14-3-3蛋白對(duì)原發(fā)性感染泡球蚴的BALB/c小鼠產(chǎn)生明顯的保護(hù)性免疫力[9]，提示該蛋白具有較高的遺傳學(xué)穩(wěn)定性，較強(qiáng)的免疫原性和較好的表面暴露性，適合作為多房棘球蚴病疫苗研究的候選分子。

3.Em18

近年來(lái)Ito等[10]研究報(bào)道提出Em18抗原對(duì)多房棘球蚴病具有很高的特異性和敏感性，其分子量為18kDa，對(duì)Em18氨基酸序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)其N末端氨基酸序列為KESDLAD，同源性分析表明該段氨基酸序列同樣存在于Em10中（349K至355D），提示Em18是Em10經(jīng)半胱氨酸蛋白酶水解后產(chǎn)生的一個(gè)新片段。Nimalan等[11]將Em18抗原與多房棘球蚴病人血清進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)后，陽(yáng)性率僅為75%，并與細(xì)粒棘球蚴病人血清存在很高的交叉反應(yīng)。同時(shí)用細(xì)粒棘球絳蟲原頭節(jié)分離出的分子質(zhì)量單位為18kDa抗原對(duì)多房棘球蚴病人血清進(jìn)行免疫印跡分析，結(jié)果在18kDa處仍可出現(xiàn)陽(yáng)性的抗原抗體反應(yīng)條帶。因此認(rèn)為Em18抗原不僅在多房棘球蚴中存在，在細(xì)粒棘球蚴中也同樣存在，細(xì)粒棘球蚴病人體內(nèi)也可能存在抗Em18 的血清抗體。

4.EM95和EMY162

EM95氨基酸序列由Gauci等[12]提交，其序列來(lái)源于從德國(guó)普通小鼠中發(fā)現(xiàn)的多房棘球絳蟲原頭節(jié)中所提取的mRNA所翻譯的蛋白質(zhì)。由156個(gè)氨基酸組成，屬分泌蛋白。Katoh Y[13]等從多房棘球絳蟲絳蟲成蟲mRNA的cDNA文庫(kù)分離出一個(gè)cDNA克隆，其表達(dá)產(chǎn)物命名為EMY162，由153個(gè)氨基酸組成，其分子量為17 kDa，是一種分泌蛋白。在多房棘球絳蟲四個(gè)階段（原頭節(jié)、棘球蚴、未成熟的成蟲和成熟的成蟲）均有表達(dá)。免疫印跡分析表明EMY162的氨基酸序列與EM95預(yù)測(cè)的二級(jí)結(jié)構(gòu)的抗原性存在31.4%的同一性。RT-PCR分析表明EMY162基因在多房棘球絳蟲的各生命周期階段的表達(dá)均比EM95顯著。免疫印跡檢測(cè)重組EMY162抗原對(duì)多房棘球蚴病人血清表現(xiàn)出明顯的抗原抗體反應(yīng)，重組EMY162抗原誘導(dǎo)宿主保護(hù)水平顯著（74.3%）。該結(jié)果為進(jìn)一步開展對(duì)泡型棘球蚴病診斷的有效性和可行性研究以及疫苗的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

5.結(jié)語(yǔ)

目前對(duì)多房棘球蚴病的診斷主要包括影像學(xué)方法（超聲波探查、X線、CT掃描、磁共振等）和血清學(xué)檢測(cè)（DIGFA、ELISA等）。影像學(xué)診斷方法安全、無(wú)創(chuàng)并能夠?qū)Χ喾考蝌什≈型砥诨颊咦龀鲚^為明確的判斷，但對(duì)早期患者及一些非典型影像病例通常難以作出準(zhǔn)確的判斷，其敏感性和特異性并非十分理想，而且大多需要特殊的儀器、設(shè)備和較完善的實(shí)驗(yàn)室，所需費(fèi)用較大，對(duì)包蟲病的防治作用局限，在一定程度上限制了其在包蟲病流行地區(qū)的推廣實(shí)用。血清學(xué)檢測(cè)DIGFA法操作簡(jiǎn)單，檢查所用時(shí)間短，所要求設(shè)備簡(jiǎn)單，可適用于流動(dòng)性現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查;ELISA法檢查包蟲特異抗原，雖所用時(shí)間較長(zhǎng)，檢查要求有相當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室設(shè)備和一定培訓(xùn)技能的人員進(jìn)行操作，用于現(xiàn)場(chǎng)流調(diào)有一定困難，但特異性和敏感性相對(duì)比影像學(xué)方法及DIGFA高，尤其是用較為新鮮的血樣標(biāo)本更為理想。寄生蟲抗原的研究雖然在許多方面還不

成熟，但已提出了許多新的想法和進(jìn)行了大量好的嘗試。進(jìn)一步開展對(duì)包蟲抗原的篩選研究，尋找具有更高敏感性和特異性的抗原組分，提高對(duì)包蟲病的診斷效率，是當(dāng)前棘球蚴病免疫診斷研究的一項(xiàng)重要內(nèi)容。

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