水產品中硝基呋喃代謝物殘留快速檢測新方法的研究

孫瑋+季寅星

摘 要：水產品是我國食物種類的重要組成，深受百姓的青睞，但是為了確保水產品的正常養殖，需要使用硝基呋喃類藥物，預防疾病的發生。雖然這類藥物可以經代謝排出，但是水產品體內依然會有一定的殘留，人們在食用水產品時如果將其體內殘留的硝基呋喃代謝物攝入體內，會給機體帶來一定的傷害。為了避免這種結果，必須對水產品中的硝基呋喃代謝物（AHD、SEM、AOZ以及AMOZ）進行快速檢測，以免出現嚴重的后果。本文試對硝基呋喃代謝物進行檢測，并對這種物質的新檢測方法進行簡單的介紹。

關鍵詞：水產品；硝基呋喃代謝物；殘留；快速檢測；新方法

中圖分類號：TS254.7 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170333033

呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮等硝基呋喃類抗菌藥物曾經在畜禽類和水產品的養殖中有著非常廣泛的應用，但是硝基呋喃本身具有的毒性可以為人體健康帶來危害，雖然經過代謝可以適量排出體外，但是其與蛋白質結合后會產生一定的殘留產物，具有致癌作用。為了保障食品安全，實驗室必須對水產品進行快速檢測，以確保其體內的硝基呋喃代謝物在殘留程度上符合安全標準。

1 檢測重要性

硝基呋喃是抗菌藥物中的一個種類，具有廣譜的優點，由人工方式合成，結構為“5-硝基”，曾經被添加到飼料中，用于畜禽或水產品疾病的預防和治療。但是，這種物質有一定程度的慢性毒性，短暫攝入人體后會帶來惡心嘔吐、腹瀉、厭食等不良反應，部分患者甚至會出現黃疸或溶血性貧血，若是長時間或大劑量攝入，會有致畸或致癌效果。雖然這種物質半衰期較短，可以通過代謝排出，但是硝基呋喃代謝物可以與組織蛋白質結合，以另一種存在形式長期存留在人體中。對此，我國農業部在2002年12月下旬與2005年10月下旬先后發布了關于禁止在水產品養殖與畜牧飼養過程中添加硝基呋喃的公告，將硝基呋喃在動物飼養中的應用視為非法行為。正是基于這樣的狀況，實驗室務必要對硝基呋喃殘留狀況進行快速檢測，避免相關食品安全問題的出現。

2 方法——免疫膠體金法

目前，用于硝基呋喃代謝物檢測的方法有許多，如：免疫膠體金法、液相色譜-串聯質譜法、液相色譜/串聯質譜線性組合法、固相萃取高效液相色譜-質譜法等方法。本文選擇免疫膠體金法這種新方法進行分析。

2.1 方法

挑選河蟹、魚蝦等水產品，取其可食用部分，大約100g，將搗碎后均勻混合，放在干凈容器中，送入-18℃環境中作冷凍避光保存。為AHD、SEM、AOZ以及AMOZ 4種硝基呋喃代謝物準備生化試劑，分別為4-CBA、4-NBA、2-NBA，另準備氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液以及磷酸氫二鉀溶液各0mol/L、pH=7.4的PBST緩沖劑復溶液以及其他一些必備物品。為水產品進行快速檢測。為了盡快取得陰性樣品與陽性樣品，可以借助LC-MS/MS方法進行預檢。將解凍樣品先稱取2g，放入50mL的離心管之中，添加10mL的“甲醇：水=1：1”的混合溶液，給予1min的漩渦混合操作，再以4000轉/min的速率進行5min的離心操作，完畢后將液體剔除，將殘留物放入10mL的0.2mol/L鹽酸之中，均勻漿后再次加入0.05mol/L的2-NBA與50?g/L的混合內標物（包含99.5%以上純度的AHD、SEM、AOZ、AMOZ）各0.1mL，進行1min的漩渦混合，做100次/min的振蕩，保持37℃溫度不變，過夜后將樣本取出并冷去，再添加0.1mol/L的磷酸氫二鉀5mL，使用1mol/L的氫氧化鈉進行酸堿度調整，直至其pH=7.4，隨后使用4mL的乙酸乙酯進行2次提取，待干燥后使用50%的甲醇溶液進行定容，直至最終量為1mL。在混勻之后若達到0.22?m，則可以使用UPLC-MS/MS方法進行測定。為樣品進行面積膠體金方法的檢測。將樣品吸取0.1mL，放入含有金標抗體的酶標板為控制中，以滴管進行反復吹打，直至微孔中的紅色物質徹底溶解。安靜等待5min之后，將試條取出并保持水平放置，將微孔中的溶液全部滴加到加樣孔并開始計時，使用肉眼進行結果觀察。

2.2 結果

陰性（-）為檢測線（T）顏色與對照線（C）相同或更深；陽性（+）為檢測線顏色比對照線顯色淺，甚至檢測線無顯色。檢測線的顯色越淺，水產品硝基呋喃代謝物的殘留度就越高。不同衍化劑對不同混合內標物具有不同的敏感度，AMOZ、AOZ、SEM與4-CBA配合性更好，AHD與2-NBA配合性更好（見圖1）。

3 結語

實驗室當前用于硝基呋喃代謝的檢測方法主要有免疫膠體金法、液相色譜-串聯質譜法等。本文僅對免疫膠體金法這種新型方法進行簡單介紹，但是實驗室應該在眾多選擇中選擇最適宜的方法，來提高對硝基呋喃代謝物的檢出率。

參考文獻

[1]柳愛春，劉超，趙蕓，等.免疫膠體金法快速檢測水產品中硝基呋喃類代謝物的研究[J].浙江農業學報，2013，25（1）.