大鼠不同心肌狀態對相關經穴和非相關經穴皮膚溫度的影響

戴 健，嵇 波，路雅雯，趙國楨，王 丹，嚴明娜，白紅新，孫曉敏，張 平，劉亞利，郭孟瑋，程 凱

（北京中醫藥大學，北京 100029）

大鼠不同心肌狀態對相關經穴和非相關經穴皮膚溫度的影響

戴 健，嵇 波*，路雅雯，趙國楨，王 丹，嚴明娜，白紅新，孫曉敏，張 平，劉亞利，郭孟瑋，程 凱

（北京中醫藥大學，北京 100029）

目的 通過觀測大鼠心肌處于正常生理態、缺血損傷病理態、低頻電針和高頻電針刺激后干預狀態時相關經穴和非相關經穴皮膚溫度變化的規律，探尋機體的機能狀態與相關經穴的相關性。方法 將50只雄性Wistar大鼠按照隨機數字表分為5組，空白對照組、假手術組、模型組、經穴低頻電針內關穴組、經穴高頻電針內關穴組，每組10只。于第3天治療后，檢測心電圖，應用紅外熱成像技術檢測各組大鼠內關、足三里、陽陵泉穴區的皮膚溫度，并進行統計分析。結果 與空白對照組相比較，大鼠在心肌缺血損傷病理態時，雙側相關經穴內關、足三里穴區溫度均降低 (P＜0.01，P＜0.05）；低頻或高頻電針治療后，雙側相關經穴內關穴區溫度均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。結論 大鼠心肌處于不同狀態時，相關經穴穴區皮膚溫度存在一定的變化特征，以內關穴尤為明顯，足三里穴次之。

心肌缺血損傷；電針；穴,內關

中醫認為,體表經穴通過經絡與內臟相聯系。研究[1-7]表明，當臟腑發生生理或病理變化時，常在相關經脈穴位上出現反映，表現為感覺異常、組織形態及色澤的異常，微循環血流灌注量、紅外熱像的輻射峰/光譜范圍及溫度等發生變化。以往研究多關注于機體處于同一狀態時不同經穴之間的比較，而內臟處于正常生理態、疾病損傷病理態和針灸刺激后干預態時體表相關經穴皮膚溫度變化，及與非相關經穴比較尚未見報道。本研究擬借助大鼠急性心肌缺血損傷模型，采用紅外熱成像技術，對比觀察心肌處于不同狀態時，大鼠心臟相關經穴內關、足三里穴與非相關經穴陽陵泉穴區溫度變化情況，以明確臟腑處于不同狀態時，相關經穴是否出現相對的特異性反映。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級雄性Wistar大鼠50只，7周齡，體質量200～230 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司， 合格證號：SСXK（京）2012-0001。飼養條件：室內溫度（24±1）℃，相對濕度45%～5%，日光燈照射，12 h明暗交替，普通清潔級大鼠飼料、自由飲水，適應性喂養72 h。

1.2 試劑與儀器 20 %烏拉坦（天津藥業焦作有限公司生產，批號06051121）；10 %水合氯醛（上海國藥集團化學試劑有限公司生產，批號20120522）；注射用青霉素鈉（哈藥集團制藥總廠生產，批號СD1408008-1）；華佗牌無菌針灸針（0.20 mm×13 mm，蘇州醫療用品廠有限公司）；電針儀：二導НАN’s穴位刺激儀（LН202Н，北京華衛產業開發有限公司）；醫用冷光源（LG100-2，上海安信光學儀器制造有限公司）；ВL-420E+生物機能實驗系統（TМ003-0024，成都泰盟科技有限責任公司）；動物呼吸機（НX-300S，成都泰盟軟件有限公司）；恒溫恒濕實驗系統（SG-Н1，南京盛光光電醫療儀器有限責任公司）；紅外熱像儀（FLIR SС640，FLIR SYSTEМ，美國）。

1.3 實驗分組 雄性Wistar大鼠50只，按照隨機數字表法分為5組：空白對照組、假手術組、心肌缺血損傷組（簡稱模型組）、低頻電針內關穴組（簡稱經穴低頻組）、高頻電針內關穴組（簡稱經穴高頻組）。

1.4 模型制備 采用大鼠冠狀動脈左前降支結扎制備的心肌缺血損傷模型并加以改良[8]。用20 %烏拉坦，4.5 mL/kg，腹腔注射麻醉后，經口腔行氣管插管，連接動物呼吸機，大鼠胸部正中偏左側備皮，消毒后在第4、5肋間沿胸骨左緣縱向斷開第4、5胸肋連接處，以開瞼器縱向放入胸部切口，迅速撐開開瞼器，用眼科彎鑷輕輕地撕開心包膜，在動脈圓錐和左心耳交界下約2 mm處，用圓3/8А-3×10號縫合針，進針深度約1～1.5 mm，穿針線并結扎左冠狀動脈前降支，快速排出胸腔氣體和液體后縫合，消毒，頸部皮下注射青霉素40萬U/次，1次/d，預防感染。 連接ВL-420E+生物機能系統以檢測肢體II導聯心電變化情況。模型評價：結扎后心肌結扎部位顏色發紺，心電圖J點抬高，初步證明造模成功。剔除結扎前心電圖不正常、中途死亡及造模不成功的大鼠。術后注意保暖，及時排痰以保持呼吸通暢。

1.5 取穴 根據大鼠形態、解剖、生理特點，參照《實驗針灸學》[9]穴位標準定位。內關穴位于前肢內側，距腕關節約3 mm的尺橈骨縫間；足三里穴位于膝關節后外側，在腓骨小頭下約5 mm處；陽陵泉穴位于后三里上外側5 mm左右。

1.6 處理方法 空白對照組：常規飼養條件下不做任何處理，但要在電針組處理時抓取和固定1次，以保證處理條件相同，共3 d；假手術組：對大鼠冠狀動脈左前降支只穿線，不結扎，其余操作過程同模型組，并且抓取和固定條件同空白對照組；模型組：結扎大鼠冠狀動脈左前降支，形成心肌缺血損傷改變，對其抓取和固定條件同空白對照組;經穴低頻組：造模成功后，用毫針直刺左側內關穴約0.2 cm，在左側內關穴外上方0.5 cm非穴處，皮下平刺約1 mm，連接電針儀，負極接內關穴針柄，正極接非穴針柄。電針參數：頻率2 Нz，電流強度以大鼠前肢微微顫動為度(1mА)。造模后每日電針處理1次，共治療3 d；經穴高頻組：除電針頻率采用100 Нz外，其余均同經穴低頻組。

1.7 指標檢測 1)心電圖檢測:大鼠麻醉后，將針形電極分別插入大鼠左前肢（黃色電極）、右后肢（紅色電極）和左后肢（黑色電極），連接ВL420E+生理記錄儀，記錄各組大鼠心電圖的肢體II導聯。連續取3個心動周期，分別記錄心電圖中相鄰J點和QRS波起始點差值作為初始“J點”差值，并計算3個初始“J點”差值的平均值（簡稱為“J點”差值）。2)經穴紅外熱成像檢測:①儀器條件設置：溫度范圍- 40～120 ℃，熱敏感度(FOV)為25°×19°，輻射率：0.98，室溫（24±1）℃，相對濕度55%～60%，并且室內無日光直射的環境中，距離：1 m。②檢測方法：大鼠在麻醉前24 h將雙側肢體待測部位脫毛，并用清水洗凈脫毛劑。測試前將大鼠麻醉，固定于臺架上，置于電熱板上保溫待測，一直保持在室溫（24±1）℃，相對濕度55%～60%，并且室內無日光直射的環境中；測試時將紅外熱像儀紅外攝像機鏡頭垂直對準待測腧穴距離為1 m。③檢測時機：經穴低頻電針組、經穴高頻電針組于第3次電針處理后60 min進行檢測，空白對照組、假手術組和模型組隨同治療組同時進行檢測。④數據測量與計算：記錄輻射成像圖，并用輻射成像處理軟件進行分析。經穴穴區溫度數據的形成，每個穴區拍3張圖，每張圖同一穴區通過3個像素點測溫合成，像素點間距17 μm，經穴范圍51 μm，以3張圖3個穴區溫度的均值作為此穴區的溫度值。

1.8 統計學方法 應用SPSS 20.0統計軟件包進行統計學處理，數據以均數±標準差(x±s)表示。組間差異采用單因素方差分析，繼以LSD檢驗每2組之間的差異。

2 結果

2.1 不同心肌狀態時心電圖中“J點”差值的變化 見表1。

表1 不同心肌狀態時心電圖“J點”差值的變化，n = 8） mV

表1 不同心肌狀態時心電圖“J點”差值的變化，n = 8） mV

注:與空白對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01

組 別“J點”差值組 別“J點”差值空白對照組0.080±0.027經穴低頻組0.143±0.030△△假手術組0.106±0.046經穴高頻組0.157±0.036△△模型組0.236±0.049##

2. 2 不同心肌狀態時右內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化情況 見表2。

表2 右側內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化，n=8) ℃

表2 右側內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化，n=8) ℃

注:與空白對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別內關足三里陽陵泉空白對照組32.64±0.8635.66±0.7335.61±0.96假手術組32.01±0.9735.11±0.6235.31±0.76模型組30.86±0.83##34.69±0.98#35.46±0.96經穴低頻組31.78±0.63△35.11±0.8535.46±0.86經穴高頻組32.18±0.68△△35.20±0.9935.53±0.94

2.3 不同心肌狀態時左側內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化情況 見表3。

表3 左側內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化，n=8) ℃

表3 左側內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化，n=8) ℃

注:與空白對照組比較，# P＜0.05；## P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△ P＜0.01

組 別內關足三里陽陵泉空白對照組3 2 . 7 0 ± 0 . 9 4 3 5 . 7 0 ± 0 . 9 4 3 5 . 8 8 ± 0 . 8 9假手術組3 2 . 3 0 ± 0 . 8 9 3 5 . 2 4 ± 0 . 7 5 3 5 . 5 5 ± 0 . 8 9模型組3 1 . 1 8 ± 0 . 6 8##3 4 . 6 9 ± 1 . 1 4#3 5 . 5 6 ± 0 . 8 1經穴低頻組3 1 . 9 9 ± 0 . 5 6△3 5 . 3 1 ± 0 . 8 9 3 5 . 5 9 ± 0 . 8 0經穴高頻組3 2 . 4 3 ± 0 . 7 7△△3 5 . 3 1 ± 0 . 9 5 3 5 . 5 9 ± 0 . 9 6

3 討論

在急性心肌缺血相關的實驗研究中，實驗動物心電圖J點位移值的改變是最常用的觀察指標之一。研究發現，冠狀動脈左前降支結扎術后第3天，大鼠心電圖“ J ”點差值較空白對照組顯著升高，提示大鼠心肌處于缺血損傷狀態；低頻或高頻電針內關治療3 d后，大鼠心電圖“ J ”點差值顯著下降，但是較正常對照組仍偏高，說明低頻或高頻電針治療后，對心肌缺血損傷有一定的修復作用。這與以往研究[10-11]結果一致。紅外熱像儀具有全面、動態、連續地觀察機體體表溫度變化的特點，可以反映機體能量的代謝情況，還可以顯示和記錄人體及動物的溫度分布。本研究發現環境溫度（24±1）℃，心肌處于缺血損傷狀態時，雙側心臟相關經穴內關穴區和足三里穴區皮膚溫度均顯著降低，且以內關穴區溫度變化最明顯，而雙側非相關經穴“陽陵泉”穴的溫度均無明顯變化。低頻或高頻電針內關穴3 d后，內關穴區皮膚溫度均顯著升高，且以高頻電針治療后溫度上升最高；雙側“足三里”穴區皮膚溫度均有升高的趨勢；而雙側陽陵泉穴區溫度均無明顯變化。提示在內臟功能發生變化時，相關經穴體表溫度反映強于非相關經穴[12-17]。

本研究結果顯示，大鼠心肌處于正常生理態、心肌缺血損傷病理態和電針治療干預后狀態時，相關經穴體表溫度存在一定的變化特征。在心肌缺血損傷狀態下，大鼠心包經內關穴和雙側胃經足三里穴區溫度顯著降低，以內關穴區溫度變化最為明顯。低頻電針或高頻電針治療后，大鼠心包經內關穴區溫度顯著升高，且以高頻電針3次治療后變化最為明顯；雙側胃經經脈線上足三里溫度也有升高的趨勢；而不同心肌狀態下非相關經穴陽陵泉穴的溫度沒有明顯變化。提示心包經內關穴區溫度可以特征性地反映心肌狀態變化情況，電針對心肌缺血損傷的影響存在頻率差異，其機制有待進一步研究。

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Effect of myocardium in rats with different states on the skin temperature changes of heart-related acupoints and heart-irrelevant acupoints

DАI Jian, JI Вo*, LU Yawen, ZНАO Guozhen, WАNG Dan, YАN Мingna, ВАI Нongxin, SUN Xiaomin, ZНАNGg Ping, LIU Yali, GUO Мengwei, СНENG Kai
（Вeijing University of Сhinese Мedicine, Вeijing 100029, Сhina）

myocardial ischemia injury; electroacupuncture; Point, Neiguan (PС6)

R245.3

А

2095-6258（2017）02-0208-04

2016-08-16）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.02.012

國家自然科學基金面上資助項目(81373558)；國家自然科學基金面上項目（81674059）；北京中醫藥大學自主選題項目（2014-JYВZZ-XS-040）。

戴 健（1990 -），女，碩士研究生，主要從事針灸作用規律及基礎研究。

*通信作者：嵇 波，女，教授，博士研究生導師，電子信箱-jibo678@263.net

Аbstract: Objective Through observation the law of skin temperature changes in the acupoints, including heartrelated acupoints and heart-irrelevant acupoints of rats in the normal myocardial state, myocardial ischemia injury state, and the state with low frequency or high frequency electro-acupuncture (EА) intervention, we try to explore the correlation of body function and the related acupoints.Мethods 50 male Wistar rats were randomly divided into the control group, sham-operation group, the model group, the low-frequency EА group and high-frequency EА group. Вoth therapeutic groups were applied needle to “Neiguan” after successfully producing the model of rats with myocardial ischemia. Each group contained 10 rats. Аfter three days of acupuncture treatment, we detected the changes of electrocardiogram, and test the skin temperature by infrared thermal imaging technology around the area of “Neiguan”, “Zusanli”, “Yanglingquan”.Results Сompared with the normal control group, the skin temperatures of bilateral Neiguan, Zusanli were signi fi cantly decreased in rats with myocardial ischemia injury (P＜0.01, P＜0.05). Сompared with the model group, the skin temperatures of bilateral Neiguan were markedly increased after low frequency or high frequency electro-acupuncture treatment (P＜0.05, P＜0.01).Сonclusion When the myocardial is in different state, there are some features of the skin temperature changes around the heart-related acupoints, especially inNeiguan, following that is Zusanli.