抗結(jié)核藥固定劑量復(fù)合劑分析方法研究進(jìn)展

張立光

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 蘇州 215009）

抗結(jié)核藥固定劑量復(fù)合劑分析方法研究進(jìn)展

張立光

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 蘇州 215009）

綜述了抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑分析方法的研究進(jìn)展。根據(jù)已報(bào)道的抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑的分析方法的相關(guān)文獻(xiàn)，分析檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)。通過(guò)分析檢測(cè)方法，提出建議,為抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑的分析方法的開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

抗結(jié)核藥；固定劑量復(fù)合劑；分析方法

近年來(lái)，結(jié)核病的發(fā)病率呈逐年增加趨勢(shì)，嚴(yán)重 威 脅 人 類(lèi) 健 康[1]。 人 類(lèi) 免 疫 缺 陷 病 毒 （ human immuno deficiency virus，HIV）的大量傳播和結(jié)核桿菌耐藥性的產(chǎn)生，尤其是多重耐藥性（multiple drugs resistance，MDR）的增多，使結(jié)核病的治療越來(lái)越受到關(guān)注。世界衛(wèi)生組織建議使用固定劑量復(fù)合劑(fixed-dose combinations，F(xiàn)DCs)代替單藥制劑治療結(jié)核病[2,3]。固定劑量復(fù)合劑主要是指幾種不同的藥物進(jìn)行配方，每種按一定劑量混成復(fù)合制劑，如利福平、 對(duì)氨基水楊酸鈉、異煙肼、鹽酸乙胺丁醇藥物進(jìn)行配方[4]。復(fù)方抗結(jié)核制劑有二聯(lián)制劑、三聯(lián)制劑、四聯(lián)制劑[5]。本文作者綜述了近年來(lái)抗結(jié)核藥固定劑量復(fù)合劑檢測(cè)分析方法的研究進(jìn)展。

1 含量測(cè)定方法

抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑中的幾種成分，只有鹽酸乙胺丁醇的含量測(cè)定是難點(diǎn)。由于鹽酸乙胺丁醇無(wú)紫外吸收，不能通過(guò)常規(guī)的高效液相色譜-紫外檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)，故鹽酸乙胺丁醇的測(cè)定一直是藥物分析的領(lǐng)域的難點(diǎn)。近年來(lái)，陸續(xù)有研究乙胺吡嗪利福異煙片Ⅱ的檢測(cè)方法發(fā)表。郭濤等[6]建立高效液相色譜法測(cè)定乙胺吡嗪利福異煙片中鹽酸乙胺丁醇、吡嗪酰胺、利福平和異煙肼含量。鹽酸乙胺丁醇選用了苯乙基異氰酸酯為衍生劑進(jìn)行柱前衍生化，用 C18 色譜柱，甲醇-水-冰醋酸（70∶30∶0．2）為流動(dòng)相，流速 1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng) 220 nm。異煙肼和吡嗪酰胺用 C18 色譜柱，以乙腈 0.02 mol·L-1磷酸二氫銨（2∶98）為流動(dòng)相，流速 1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng) 263 nm。利福平色譜條件為C18 色譜柱，以甲醇-乙腈-0.075 mol·L-1磷酸二氫鉀-1mol·L-1枸櫞酸（30∶30∶26∶4）為流動(dòng)相，流速 1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm。鹽酸乙胺丁醇、異煙肼、吡嗪酰胺及利福平分別在 20～160，2～50，10～250，20～180 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。特別是鹽酸乙胺丁醇的衍生化方法反應(yīng)迅速，條件容易控制，衍生化方法可靠，適用于抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑多成分的分離和含量測(cè)定。戚燕[4]建立了高效液相色譜法測(cè)定乙胺吡嗪利福異煙片Ⅱ中利福平、異煙肼、吡嗪酰胺和鹽酸乙胺丁醇的含量，樣品溶液在 4 h 內(nèi)穩(wěn)定，溶解樣品的溶劑為甲醇。方法簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確，可用于乙胺吡嗪利福異煙片中各組分的質(zhì)量控制。現(xiàn)國(guó)內(nèi)報(bào)道的其他測(cè)定方法主要有氣相色譜法[7]、柱前衍生化法[8]和 RP—HPLC法[9]等。總之，鹽酸乙胺丁醇的含量測(cè)定目前已經(jīng)不再是抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑研究領(lǐng)域的重點(diǎn)。

2 溶出度測(cè)定方法

在 2010 年以前，固定劑量復(fù)合劑的溶出度僅檢測(cè)利福平項(xiàng)，因?yàn)槔Ｆ绞沁@幾個(gè)成分中水溶性最不好的，所以?xún)H檢測(cè)利福平，如果利福平的溶出度良好，根據(jù)推理，其他成分的溶出度也會(huì)很好。但是世界衛(wèi)生組織在其技術(shù)報(bào)告[10]中說(shuō)明凡是固定劑量復(fù)合劑應(yīng)該對(duì)其中的每一個(gè)成分進(jìn)行溶出度的檢測(cè)，只測(cè)利福平的溶出度是不夠的，應(yīng)增加其他組分的測(cè)定。近年來(lái)，我國(guó)在抗結(jié)核藥品的溶出度方面做出了很多努力，各藥檢所與企業(yè)共同為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高做了很多的研究工作。《中國(guó)藥典》2010年版頒布以來(lái)，抗結(jié)核復(fù)方制劑的質(zhì)量得到了相應(yīng)的提高。異福片與異福膠囊的溶出度[11]都增加了對(duì)異煙肼項(xiàng)的溶出度的檢測(cè)，異福酰胺膠囊及異福酰胺片增加了對(duì)異煙肼與吡嗪酰胺的溶出度的檢測(cè)。2012 年乙胺吡嗪利福異煙片Ⅱ的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中利福平、吡嗪酰胺、異煙肼、鹽酸乙胺丁醇的溶出度均進(jìn)行了控制[1]。其中異福片與異福膠囊、異福酰胺膠囊及異福酰胺片的溶出度的檢測(cè)方法基本上一致。以鹽酸溶液（9→1000）900 mL 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為 100 r/min，依法操作，30 min 時(shí)取樣測(cè)定，供試品溶液需要在 2 h 內(nèi)測(cè)定。利福平項(xiàng)在 474 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算每片中利福平的溶出量，限度應(yīng)為利福平標(biāo)示量的 75%，異煙肼與吡嗪酰胺項(xiàng)照高效液相色譜法（附錄 V D）測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀 80.0 g 與磷酸氫二鉀 15.3 g，加水溶解并稀釋至 1000 mL，搖勻）-甲醇-水（10∶5∶85）為流動(dòng)相，流速為每分鐘 1.5 mL，檢測(cè)波長(zhǎng)為 254 nm，異煙肼峰與吡嗪酰胺峰的分離度應(yīng)大于 4.0。異煙肼限度為異煙肼標(biāo)示量的 80%，吡嗪酰胺限度為吡嗪酰胺標(biāo)示量的 75%，應(yīng)符合規(guī)定。雖然我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)中增加了對(duì)其他項(xiàng)目的控制，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較十年前有了大幅度的提高，但是溶出介質(zhì)仍與國(guó)外藥典有區(qū)別，美國(guó)藥典采用pH=6.8 的磷酸鹽緩沖液，而我國(guó)采用的是鹽酸。溶出介質(zhì)的區(qū)別也可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果有很大的差異。

在檢測(cè)方法上，以前的觀念是由于利福平不穩(wěn)定，應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行快速測(cè)定，因此利福平的溶出度都采用吸收系數(shù)法測(cè)定。因受薄膜衣或膠囊殼顏色的干擾，結(jié)果可能不準(zhǔn)確，吸收系數(shù)法存在一定的誤差。由于與利福平相關(guān)的雜質(zhì)有醌式利福平、3-甲酰利福霉素 SV、N-氧化利福平，結(jié)構(gòu)與利福平極為相似。在利福平的最大吸收波長(zhǎng)處，也存在著一定的紫外吸收。因此會(huì)對(duì)利福平的測(cè)定有所影響[12]。建議采用高效液相色譜法克服這個(gè)缺點(diǎn)。在 2012年國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的乙胺吡嗪利福異煙片Ⅱ以前，溶出介質(zhì)采用鹽酸。

對(duì)于固定劑量復(fù)合劑，每一種成分的溶出度都尤為重要，即使其中的組分可能是水溶性非常好的藥物，但是由于幾種成分組合到一起，可能會(huì)相互影響導(dǎo)致某一種成分的溶出度不好，進(jìn)而影響其在體內(nèi)的吸收，降低藥效。因此，對(duì)每一組分的溶出度進(jìn)行檢測(cè)非常重要。可見(jiàn)復(fù)方制劑中除利福平外的其他組分的溶出度已經(jīng)開(kāi)始越來(lái)越多的受到大家的關(guān)注。尤其在 WHO 預(yù)在中國(guó)進(jìn)行抗結(jié)核藥預(yù)認(rèn)證這個(gè)項(xiàng)目的大的背景之下，我們也感受到了國(guó)外的專(zhuān)家除了關(guān)注利福平之外，對(duì)異煙肼、吡嗪酰胺與鹽酸乙胺丁醇的溶出度也有濃厚的興趣。而抗結(jié)核藥物 FDCs 在整個(gè)溶出度的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上的提高也是國(guó)內(nèi)產(chǎn)品邁向國(guó)際市場(chǎng)的必經(jīng)之路。

3 有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)

抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑的有關(guān)物質(zhì)一直是國(guó)際上研究抗 結(jié)核藥物的 專(zhuān) 家的關(guān)注 焦 點(diǎn)。Bhavika Mohan[11]采用 HPLC 法同時(shí)測(cè)定了含量與有關(guān)物質(zhì)，有關(guān)物質(zhì)有 3-甲酰利福霉素SV,N-氧化利福平、25-去乙酰化利福平，醌式利福平，以及利福平與異煙肼產(chǎn)生的復(fù)合物利福霉素異煙胺腙。在對(duì) USP 方法進(jìn)行優(yōu)化后能夠使幾種雜質(zhì)很好的分離和測(cè)定。用于測(cè)定利福平、異煙肼、吡嗪酰胺的液相系統(tǒng)能夠測(cè)定降解產(chǎn)物除了 N-氧化利福平、25-去乙酰化利福平，其他的雜質(zhì)即使色譜條件發(fā)生很小的改變也能夠?qū)崿F(xiàn)。不同的色譜柱分離效果不同。無(wú)論是在哪種色譜柱上，利福平的柱效都能夠滿足要求，這種方法雖然能夠在同一條件下測(cè)定了利福平、異煙肼與吡嗪酰胺的含量，又檢測(cè)了有關(guān)物質(zhì)，但是對(duì)色譜柱的要求比較苛刻。

國(guó)際藥典 2008 年版[13,14]規(guī)定了有關(guān)物質(zhì)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為上述pH=7.0 磷酸鹽緩沖液—甲醇（40∶60）；檢測(cè)波長(zhǎng)為 254 nm。對(duì)醌式利福平、利福平與異煙肼形成的復(fù)合物腙及總雜質(zhì)的限度。2012 年，乙胺吡嗪利福異煙片Ⅱ的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也增加了有關(guān)物質(zhì)的控制，而此次標(biāo)準(zhǔn)的修訂，我們走在了國(guó)際上抗結(jié)核藥物雜質(zhì)研究的前沿，我們對(duì)利福平與醌式利福平的分離度做了更加嚴(yán)格的要求，國(guó)際藥典要求分離度達(dá)到 4.0，我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)要求 10.0，對(duì)雜質(zhì)腙的限度要求和總雜質(zhì)的限度要求均比國(guó)際藥典的要求嚴(yán)格，腙雜質(zhì)限度國(guó)際藥典為 5%，我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)為 3.0%，總雜質(zhì)國(guó)際藥典要求 10.0%，我國(guó)要求 7.5%。雜質(zhì)腙是抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑中的主要雜質(zhì)[15]。王曦培等[16]采用差示掃描量熱（DSC）法初步判定四聯(lián)藥物間配伍性，考察單藥和不同配伍混合物的配伍穩(wěn)定性，在光照、高溫、高濕及不同pH 條件下；采用RP-HPLC 法對(duì)樣品中有關(guān)物質(zhì)含量進(jìn)行檢測(cè)。

4 干燥失重

鹽酸乙胺丁醇吸濕性較強(qiáng)，外觀易發(fā)生變化[4]，并使利福平與異煙肼的反應(yīng)加快。S. Singh[17]報(bào)道了加速試驗(yàn)條件（40 ℃/75% RH）下抗結(jié)核藥的吸濕行為。鹽酸乙胺丁醇的存在，使粉末混合物或者樣品吸濕性更嚴(yán)重，更易發(fā)生物理性的變化[5]。光照條件下，鹽酸乙胺丁醇的粉末吸濕性更加嚴(yán)重，并且復(fù)方粉末中藥物組分越多，吸濕性越小，四組分的比三組分的吸濕性小。膠囊制劑的 FDC 產(chǎn)品都對(duì)水分進(jìn)行了控制，而片劑沒(méi)有水分的控制。由于鹽酸乙胺丁醇具有引濕性，制劑中的水分含量過(guò)多會(huì)影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性。而國(guó)外藥典無(wú)論對(duì)片劑還是膠囊劑都對(duì)水分進(jìn)行了控制。美國(guó)藥典對(duì)膠囊劑和片劑的 FDCs 都進(jìn)行了干燥失重的檢測(cè)，不得大于3.0%。國(guó)際藥典的限度也是不得大于 3.0%。筆者建議國(guó)內(nèi)的生產(chǎn)廠家應(yīng)參照國(guó)外藥典設(shè)立干燥失重或水分檢查項(xiàng)目，進(jìn)行控制。

5 結(jié)論與展望

復(fù)方制劑可以提高藥效，減少耐藥性。但復(fù)方抗結(jié)核制劑確實(shí)存在一些問(wèn)題急需解決：復(fù)方制劑的利福平降解的問(wèn)題比較嚴(yán)重，生物有效性的差異也較大[1]。因此建立一個(gè)嚴(yán)格的且統(tǒng)一的抗結(jié)核固定劑量復(fù)合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)提高藥品質(zhì)量是至關(guān)重要的，同時(shí)也為我國(guó)的抗結(jié)核藥物能夠出口提供了一個(gè)很好的機(jī)會(huì)。同時(shí)，希望隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，有更先進(jìn)的分析技術(shù)能夠?qū)菇Y(jié)核藥物的質(zhì)量控制做出更多的幫助。

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Researchprogress of Analysis Methods of Anti-tuberculosis Fix-dose Combination Drugs

ZHANG Li-guang
（Suzhou Health College, Jiangsu Suzhou 215009, China）

The recent development of analysis methods of anti-tuberculosis fix-dose combination drugs was reviewed. According to the reported literatures of analytical methods of anti- tuberculosis fix-dose combination drugs, advantages and disadvantages of these methods were analyzed. Through analysis of influence factors, some suggestions wasproposed.

Anti-tuberculosis; Fix-dose combination drugs; Analysis methods

TQ 460

： A

： 1671-0460（2017）02-0305-03

2016-07-08

張立光（1980-），女，遼寧省葫蘆島市人，副教授，碩士，2006 年畢業(yè)于沈陽(yáng)藥科大學(xué)，研究方向：藥物化學(xué)及藥物制劑。E-mail：ivy0714@126.com。