埃博拉疫苗臨床研究進(jìn)展

侯利華

軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 生物工程研究所，北京 100071

綜述

埃博拉疫苗臨床研究進(jìn)展

侯利華

軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 生物工程研究所，北京 100071

2014年西非埃博拉疫情暴發(fā)后，多個(gè)埃博拉疫苗臨床試驗(yàn)陸續(xù)開(kāi)展。開(kāi)展臨床試驗(yàn)的埃博拉疫苗主要是病毒載體類(lèi)疫苗，例如人腺病毒載體（Ad5和Ad26）、3型黑猩猩腺病毒載體（ChAd3）、水泡性口炎病毒載體（VSV）、痘病毒載體（MVA）。從免疫策略上來(lái)說(shuō)，包括單次免疫與初免-加強(qiáng)兩種免疫策略。基于Ad5、Ad26、ChAd3和MVA載體的埃博拉疫苗在Ⅰ、Ⅱ期臨床試驗(yàn)中顯示了良好的免疫原性，基于VSV載體的疫苗更是在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中顯示了很好的保護(hù)性。

埃博拉疫苗；臨床試驗(yàn)；病毒載體疫苗；免疫原性

在2014年西非埃博拉疫情暴發(fā)之前，世界范圍內(nèi)共開(kāi)展了3項(xiàng)埃博拉疫苗研究。2014年西非埃博拉疫情暴發(fā)后，20余個(gè)埃博拉疫苗臨床試驗(yàn)陸續(xù)開(kāi)展。目前開(kāi)展臨床試驗(yàn)的埃博拉疫苗主要是病毒載體類(lèi)疫苗，例如人腺病毒載體（Ad5和 Ad26）、3型黑猩猩腺病毒載體（chAd3）、水泡性口炎病毒載體（VSV）、痘病毒載體（MVA），以及DNA疫苗和VLP疫苗。從免疫策略上來(lái)說(shuō)，包括單次免疫與初免-加強(qiáng)兩種免疫策略。截至2016年12月，國(guó)際上尚無(wú)埃博拉疫苗獲得批準(zhǔn)上市，但有數(shù)個(gè)疫苗進(jìn)入臨床研究階段（表1）。

表1 截至2016年9月已開(kāi)展（或登記）的埃博拉疫苗臨床試驗(yàn)進(jìn)展

1 DNA疫苗

1.1 分別表達(dá) Ebola GP（Zaire）、Ebola GP（S/ G）、NP（Zaire）

該疫苗由美國(guó)國(guó)家過(guò)敏癥和傳染病研究所（NIAID）研制，臨床試驗(yàn)在2003～2005年開(kāi)展[1]，是最早開(kāi)展的埃博拉疫苗臨床試驗(yàn)，為隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的Ⅰ期臨床試驗(yàn)，研究結(jié)果表明埃博拉的DNA疫苗是安全且有免疫原性的。編碼Ebola GP（Zaire）、GP（Sudan/Gulu）和NP蛋白的3個(gè)質(zhì)粒，同時(shí)進(jìn)行肌肉注射，分為2、4、8 mg組和安慰劑組，共計(jì)27人。疫苗安全性好，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)。在20名疫苗組試驗(yàn)者中，至少有一種抗原成分能被ELISA或細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測(cè)到。6名受試者檢測(cè)到CD8+的特異性T細(xì)胞反應(yīng)。

1.2 分別表達(dá)Ebola GP（Zaire）、GP（Sudan）、MARV GP（Angola）

2009～2010年美國(guó)國(guó)防部和美國(guó)NIH資助在烏干達(dá)開(kāi)展了一項(xiàng)DNA疫苗的隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的臨床Ⅰb期試驗(yàn)[5]，該試驗(yàn)分為3組，即分別表達(dá)Ebola Zaire GP組（EBO組）、Mar?burg GP組（MARV組）和同時(shí)注射的二聯(lián)疫苗組，分別在0、4、8周免疫，使用Biojector 2000無(wú)針注射系統(tǒng)進(jìn)行肌肉注射。研究結(jié)果表明，該注射方式和疫苗耐受性好，無(wú)嚴(yán)重的局部與全身不良反應(yīng)。EBO疫苗組中17/30產(chǎn)生了EBO特異性抗體反應(yīng)，二聯(lián)疫苗組中有14/30產(chǎn)生了EBO特異性抗體反應(yīng)，MARV疫苗組9/29產(chǎn)生了特異性抗體反應(yīng)，二聯(lián)疫苗組中有7/30產(chǎn)生了MARV特異性抗體反應(yīng)。EBO疫苗組中19/30產(chǎn)生了EBO特異性T細(xì)胞反應(yīng)，二聯(lián)疫苗組中有10/30產(chǎn)生了EBO特異性T細(xì)胞反應(yīng)，MARV疫苗組15/29產(chǎn)生了特異性T細(xì)胞反應(yīng)，二聯(lián)疫苗組中有13/30產(chǎn)生了MARV特異性T細(xì)胞反應(yīng)。

從以上結(jié)果可以看出，埃博拉的DNA疫苗免疫程序復(fù)雜，免疫原性弱，不適合緊急公共衛(wèi)生事件中使用。

2 病毒載體類(lèi)疫苗

2.1 黑猩猩腺病毒載體-埃博拉疫苗（ChAd3-ZEBOV vaccine）

該疫苗以黑猩猩3型腺病毒（ChAd3）為載體，表達(dá)Zaire型EBOV GP蛋白，疫苗類(lèi)型為復(fù)制缺陷型重組腺病毒，在人體內(nèi)不能持續(xù)復(fù)制。疫苗由美國(guó)NIAID研制，商業(yè)開(kāi)發(fā)權(quán)授予英國(guó)制藥企業(yè)葛蘭素史克公司（GSK）合作，目前在clincaltrial.gov登記注冊(cè)的臨床試驗(yàn)已有10個(gè)左右。在非洲國(guó)家利比里亞開(kāi)展了Ⅲ期臨床試驗(yàn)。

2.1.1 Ⅰ期臨床試驗(yàn)-1 2014年11月27日，在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表了ChAd3-EBOI期臨床試驗(yàn)的初步結(jié)果[5]。該研究對(duì)ChAd3-EBO進(jìn)行了第一階段劑量遞增的開(kāi)放性試驗(yàn)，為雙價(jià)疫苗，疫苗含有1∶1的分別表達(dá)Ebola Zaire和Ebola Sudan型GP的病毒載體。將20個(gè)健康成年人編成2組，10人/組，以肌肉注射方式進(jìn)行接種，劑量為2×1010或2×1011VP，觀察期為免疫后4周。在本項(xiàng)研究中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)安全性問(wèn)題，但是有2名接種劑量為2×1011VP的受試者在免疫后1天內(nèi)出現(xiàn)了短暫發(fā)熱癥狀。20個(gè)受試者體內(nèi)均產(chǎn)生了包膜糖蛋白特異的抗體，接種2× 1011VP的組別要比接種2×1010VP的組別擁有更高的抗體效價(jià)（針對(duì)Zaire的抗體的幾何平均效價(jià)比為2037∶331；P=0.001)，同時(shí)接種2×1011VP的組別也擁有更高比例的糖蛋白特異的T細(xì)胞反應(yīng)。其中，2×1011VP的組別中10個(gè)人均有CD4反應(yīng)，而2×1010VP組別中僅有3個(gè)人有CD4反應(yīng)（P=0.004）；檢測(cè)了CD8反應(yīng)，2×1011VP組別中有7人有反應(yīng)，而2×1010VP組別中只有2人有反應(yīng)（P=0.07）。

由于該疫苗的埃博拉病毒包膜糖蛋白基因序列為Zaire-Mayinga（1976）型，考慮到2014年暴發(fā)的 Zaire-Guinea（2014）型糖蛋白序列與Zaire-Mayinga（1976）型同源性為97.6%，以Zaire-Guinea（2014）型糖蛋白為抗原，檢測(cè)到的抗體幾何平均滴度在2周和4周時(shí)分別為177和623，而以Zaire-Mayinga（1976）型糖蛋白為抗原檢測(cè)到的抗體幾何平均滴度在2周和4周時(shí)分別為376和2037，說(shuō)明2種抗原之間的抗原性存在著差異，也就暗示著采用Zaire-Guinea（2014）型糖蛋白作為2014年疫情的抗原可能會(huì)具有更好的保護(hù)性。

該文章認(rèn)為ChAd3-EBO疫苗的不良反應(yīng)和免疫反應(yīng)取決于劑量。當(dāng)劑量為2×1011VP時(shí)，Zaire型包膜糖蛋白特異的抗體反應(yīng)處于與已報(bào)道的非人靈長(zhǎng)類(lèi)試驗(yàn)中疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫范圍內(nèi)。

2.1.2 Ⅰ期臨床試驗(yàn)-2 2015年1月28日在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表了另外一篇ChAd3-EBOⅠ期臨床試驗(yàn)的初步結(jié)果[6]。本實(shí)驗(yàn)中評(píng)價(jià)了單價(jià)ChAd3-EBO Z（Zaire）的免疫原性和安全性，試驗(yàn)地點(diǎn)在英國(guó)，共招募60名受試者，平均分入3個(gè)劑量組，分別是1×1010、2.5×1010、5× 1010VP。安全性觀察截至免疫后4周，研究結(jié)果表明3個(gè)劑量組均未發(fā)現(xiàn)安全性問(wèn)題。2/59受試者發(fā)燒，4名受試者在免疫后2周發(fā)生了延長(zhǎng)的活化部分凝血活酶時(shí)間（3例在中劑量組，1例在高劑量組）。8名受試者出現(xiàn)了暫時(shí)的高膽紅素血癥（6例在中劑量組，2例在高劑量組）。免疫4周后，高劑量組的ELISA抗體的幾何平均值最高（469，68%陽(yáng)轉(zhuǎn)率）。采用與上一個(gè)臨床試驗(yàn)同樣的檢測(cè)方法，3個(gè)劑量組的抗體EC90值分別為235、402和469。在利用滅活病毒（2014 Guinea基因型）作為包被抗原檢測(cè)時(shí)，6/35（17%）有陽(yáng)性反應(yīng)，低劑量組2/10，中劑量組1/12，高劑量組3/13。ELISPOT方法檢測(cè)的T細(xì)胞反應(yīng)陽(yáng)性率為100%，14天時(shí)到達(dá)峰值（中位數(shù)為693 SFC/106細(xì)胞）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到了CD4+和CD8+的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。在測(cè)試的所有劑量中，抗體水平和T細(xì)胞免疫水平均低于同類(lèi)疫苗在食蟹猴體內(nèi)激發(fā)的免疫水平。

2.1.3 Ⅰ期臨床試驗(yàn)-3 2015年11月，Tapia等在《柳葉刀傳染病》發(fā)表了用ChAd3-EBO初免，利用痘病毒載體的MVA-BN-Filo進(jìn)行加強(qiáng)免疫的Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果[4]，該文章綜合了3個(gè)臨床Ⅰ期結(jié)果。在美國(guó)進(jìn)行的是單盲、隨機(jī)的Ⅰ期臨床試驗(yàn)，招募18～65歲的成年人；在馬里進(jìn)行的是開(kāi)放和雙盲、劑量遞增的Ⅰb臨床試驗(yàn)，招募18～50歲的醫(yī)務(wù)人員，其中部分受試者劃入巢式、隨機(jī)、雙盲和安慰劑對(duì)照的MVA-BN-Filo疫苗組。在馬里和美國(guó)的臨床試驗(yàn)隨機(jī)化中，采用計(jì)算機(jī)按照1∶1隨機(jī)分配至不同的劑量組中，馬里受試者的劑量分別為1×1010、2.5×1010、5×1010和1×1011VP，美國(guó)受試者的劑量分別為1×1010和1×1011VP。馬里受試者隨機(jī)分入巢式試驗(yàn)中，接受注射2×108PFU的MVA-BN-Filo或安慰劑（生理鹽水）。在馬里試驗(yàn)的雙盲部分，研究者、臨床工作人員、受試者和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作人員保持盲態(tài)，但研究藥師、疫苗注射人員和統(tǒng)計(jì)師不是盲態(tài)。在美國(guó)臨床試驗(yàn)中，研究者不是盲態(tài)，但受試者是盲態(tài)。主要研究終點(diǎn)是免疫7天后的安全性，由副反應(yīng)發(fā)生率來(lái)判斷。

本試驗(yàn)于2014年10月至2015年2月進(jìn)行，在馬里共入組91名受試者，1×1010VP組10人，2.5×1010VP組35人，5×1010VP組35人，1×1011VP組11人；在美國(guó)共入組受試者20人，1×1010VP組10人，1×1011VP組10人。馬里受試者中共有52人加強(qiáng)免疫了MVA-BN-Filo（27人）或安慰劑（25人）。研究結(jié)果表明2種疫苗都沒(méi)有安全性問(wèn)題。馬里的91名受試者中有7人（8%）出現(xiàn)了發(fā)熱（5×1010VP組5人，1×1011VP組2人），發(fā)熱持續(xù)時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)；美國(guó)的20名受試者中4人出現(xiàn)發(fā)熱，均在1×1011VP組，持續(xù)時(shí)間不超過(guò)24小時(shí)；加強(qiáng)免疫M(jìn)VA-BN-Filo的27名馬里受試者中，有15人出現(xiàn)注射部位疼痛或虛弱。

檢測(cè)了免疫4周后抗體的GMT值，1×1011VP組的抗體均值顯著高于其他劑量組，抗體水平在免疫4周后達(dá)到峰值，在接下來(lái)的12周緩慢下降。經(jīng)過(guò)MVA-BN-Filo加強(qiáng)之后，抗體均值上升36倍，且能在此高水平維持。接受高劑量組chAd3-EBO的抗體水平高于低劑量組。加強(qiáng)免疫組與非加強(qiáng)免疫的受試者在基礎(chǔ)水平上沒(méi)有差異。初免-加強(qiáng)免疫時(shí)間間隔也沒(méi)有差異，加強(qiáng)免疫4周后的抗體GMT為9297.6，顯著高于初免后28天的抗體GMT（356.4），平均值增長(zhǎng)了26倍。觀察了5名1×1011VP組受試者chAd3-EBO-Z的抗體持久性，免疫后259天，抗體水平輕微下降。初次免疫后，T細(xì)胞反應(yīng)較輕微，chAd3-EBO-Z初免后，14/49受試者CD4+細(xì)胞或CD8+細(xì)胞的T細(xì)胞免疫反應(yīng)陽(yáng)性。在加強(qiáng)免疫后7天，CD4+細(xì)胞或CD8+細(xì)胞的T細(xì)胞免疫反應(yīng)均增加。

2016年4月，Ewer在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表了ChAd3-EBO-Z初免、MVA-Filo加強(qiáng)免疫的長(zhǎng)期免疫效果觀察結(jié)果[10]。初次免疫受試者的劑量分別為1×1010、2.5×1010和5×1010，每組20人，每組中10人接受MVA-Filo加強(qiáng)免疫。免疫4周后，chAd3-EBO-Z初免與rVSV-ZEBOV免疫學(xué)效果相似，chAd3-EBO-Z的抗體滴度為752，而rVSV-ZEBOV的抗體滴度為921。2種疫苗的中和抗體滴度也相似，分別為 14.9和 22.2。MVA-Filo加強(qiáng)免疫后，抗體滴度升高了12倍，達(dá)到9007；CD8+T細(xì)胞反應(yīng)升高了5倍，中和抗體滴度顯著升高，達(dá)到139。ChAd3-EBO-Z免疫后6個(gè)月的抗體滴度為758，而經(jīng)過(guò)MVA-Filo加強(qiáng)的受試者加強(qiáng)后6個(gè)月的抗體滴度為1750，加強(qiáng)后的免疫效果更好一些。

2.1.4 Ⅰ/Ⅱa期臨床試驗(yàn)-4 2016年3月，Santis等在《柳葉刀傳染病》雜志上發(fā)表了在瑞士洛桑開(kāi)展的ChAd3-EBO-Z疫苗的隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的臨床試驗(yàn)結(jié)果[11]。共120名受試者，分為安慰劑組（20人）、2.5×1010組（51人）和5×1010組（49人）。75%的高劑量組受試者、79%的低劑量組受試者及25%的安慰劑組受試者出現(xiàn)了局部不良反應(yīng)。疲勞和惡心是最常見(jiàn)的系統(tǒng)不良反應(yīng)，出現(xiàn)在62%的高劑量組受試者、60%的低劑量組受試者及25%的安慰劑組受試者中。頭痛和發(fā)熱也是較為常見(jiàn)的系統(tǒng)不良反應(yīng)。免疫后28天，針對(duì)Ebola GP抗體值達(dá)到峰值，高劑量組為51 μg/mL，低劑量組為44.9 μg/mL，安慰劑組為3.2 μg/mL。免疫后180天，抗體值降低到高劑量組為25.5 μg/mL，低劑量組為22.1 μg/mL，安慰劑組為3.2 μg/mL。高劑量組受試者中，57%產(chǎn)生CD4+T細(xì)胞反應(yīng)，67%產(chǎn)生CD8+T細(xì)胞反應(yīng)；低劑量組受試者中，61%產(chǎn)生CD4+T細(xì)胞反應(yīng)，69%產(chǎn)生CD8+T細(xì)胞反應(yīng)。

2.2 人腺病毒 26載體埃博拉疫苗（Ad26-EBOV）

2016年 Milligan等在 JAMA發(fā)表了利用Ad26.ZEBOV與MVA-BN-Filo加強(qiáng)的臨床試驗(yàn)結(jié)果[12]。該產(chǎn)品由美國(guó)制藥公司Johnson&Johnson研制。這是一項(xiàng)單中心、隨機(jī)、安慰劑對(duì)照、觀察者盲態(tài)的Ⅰ期臨床試驗(yàn)，在英國(guó)牛津開(kāi)展，開(kāi)始于2014年12月，結(jié)束于2015年10月。共入組87名18～50歲的受試者，分為5組，72人隨機(jī)分入4組，每組18人，2組為首次免疫Ad26.ZE?BOV，分別再于免后29、57天免疫M(jìn)VA-BN-Fi?lo；2組為首次免疫M(jìn)VA-BN-Filo，分別再于免后29、57天免疫Ad26.ZEBOV。15人分配至開(kāi)放研究組，首次免疫Ad26.ZEBOV，再于免后15天免疫M(jìn)VA-BN-Filo。未見(jiàn)疫苗相關(guān)的嚴(yán)重不良事件。在隨機(jī)組內(nèi)，MVA-BN-Filo免后未出現(xiàn)發(fā)熱，而Ad26.ZEBOV免后5%的受試者出現(xiàn)發(fā)熱。在開(kāi)放研究組，Ad26.ZEBOV免后27%的受試者出現(xiàn)發(fā)熱。在隨機(jī)組內(nèi)，97%的Ad26.ZE?BOV接種者初次免疫后28天可檢測(cè)到抗體，而23%的MVA-BN-Filo接種者初次免疫后28天可檢測(cè)到抗體，在加強(qiáng)免疫后21天，所有受試者均可檢測(cè)到抗體。加強(qiáng)免疫后7天，86%的受試者檢測(cè)到特異性T細(xì)胞反應(yīng)。免疫后240天，所有接種疫苗的受試者抗體仍然維持在高水平。

2.3 水泡性口炎病毒載體-埃博拉疫苗（rVSVZBEOV vaccine）

該疫苗是利用改造后的水泡性口炎病毒載體，表達(dá)Zaire Kikwit 1995型EBO GP蛋白，疫苗類(lèi)型為復(fù)制型重組VSV病毒，在人體內(nèi)能夠持續(xù)復(fù)制，由加拿大公共衛(wèi)生署研制，目前商業(yè)開(kāi)發(fā)權(quán)轉(zhuǎn)讓給美國(guó)默克公司。

2.3.1 Ⅰ期臨床試驗(yàn)-1 2015年4月1日在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表了VSV疫苗的Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果[7]，是一項(xiàng)雙盲、安慰劑對(duì)照、劑量遞增的Ⅰ期臨床試驗(yàn)，試驗(yàn)地點(diǎn)在美國(guó)，共入組52人，分為2個(gè)臨床試驗(yàn)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)26人，分為2組，2×107PFU組和3×107PFU組，每組13人中，10人注射疫苗，3人注射安慰劑。

該疫苗最常見(jiàn)的不良反應(yīng)為注射部位疼痛、肌肉痛和虛弱，所有受試者均出現(xiàn)了暫時(shí)的VSV病毒血癥。免疫后14天，2×107PFU組，19/ 20（95%）受試者陽(yáng)轉(zhuǎn)；3×107PFU組，18/20（90%）受試者陽(yáng)轉(zhuǎn)。2×107PFU組的抗體GMT值為857，而3×107PFU組的抗體GMT值為283。免疫4周后，所有受試者100%陽(yáng)轉(zhuǎn)，2×107PFU組的抗體 GMT值高于3×107PFU組（4079 vs 1300），基于假病毒的中和抗體水平分別為441和223。該試驗(yàn)未進(jìn)行T細(xì)胞免疫檢測(cè)。

2.3.2 Ⅰ期臨床試驗(yàn)-2 2015年4月1日在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表了另外一篇VSV載體疫苗的Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果，包括3個(gè)開(kāi)放、劑量遞增的Ⅰ期試驗(yàn)和1個(gè)隨機(jī)、雙盲、對(duì)照的Ⅰ期試驗(yàn)，試驗(yàn)地點(diǎn)在歐洲和非洲，共入組158人。未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的疫苗相關(guān)副反應(yīng)。輕到中度的早期反應(yīng)較為常見(jiàn)，但是暫時(shí)性的。在注射3×106PFU以上的110人受試者中，103人（94%）在免疫后3天內(nèi)出現(xiàn)了疫苗的病毒血癥，在唾液和尿液中未檢測(cè)到rVSV。免疫后2周時(shí)，日內(nèi)瓦的51名受試者中，有11名（22%）出現(xiàn)了1～4個(gè)關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)炎，疼痛持續(xù)的平均時(shí)間是8天左右。在德國(guó)和肯尼亞的40名受試者中出現(xiàn)了2個(gè)自限性疾病的受試者，1例在滑膜液中檢出病毒，1例在皮膚水泡中檢出病毒，說(shuō)明在免疫后2周病毒仍在外周組織復(fù)制。

共分為6個(gè)劑量組，即3×105、3×106、1×107、2×107、5×107PFU組和安慰劑組。ELISA檢測(cè)抗體時(shí)，低水平的陽(yáng)性值在一些地方檢測(cè)出（12/ 23，52%）。免疫4周后，所有疫苗組受試者都檢測(cè)到了抗體，最低劑量3×105PFU組也顯示出了免疫原性。在使用滅活病毒作為抗原的ELISA檢測(cè)中，血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率為53%。利用假病毒檢測(cè)中和抗體時(shí)，91名受試者中有76人出現(xiàn)了陽(yáng)轉(zhuǎn)。盡管在GP蛋白ELISA和假病毒中和抗體之間有相關(guān)性，在試驗(yàn)中還是觀察到一些較大的差異。在日內(nèi)瓦的試驗(yàn)中，5×107PFU組和1× 107PFU組受試者中ELISA檢測(cè)到了相似的GP抗體水平，GMT值分別為1780和1064，而中和抗體值分別為273和99，說(shuō)明高劑量可能會(huì)激發(fā)更高的中和抗體水平。

2016年4月，在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表了該研究的最終研究結(jié)果[13]。未見(jiàn)疫苗相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，輕到中度的早期不良反應(yīng)常見(jiàn)但是很短暫。30%的受試者出現(xiàn)了發(fā)熱。在免疫后180天時(shí)，抗體滴度仍維持在較高水平。與免疫后28天抗體值相比，抗體變化范圍在0.59～1.59倍之間。

2.3.3 Ⅲ期臨床試驗(yàn) 2015年7月31日在《柳葉刀》雜志發(fā)表了一項(xiàng)rVSV-ZEBOV疫苗的Ⅲ期臨床試驗(yàn)[8]，該研究于2015年4月1日至7月20日在幾內(nèi)亞開(kāi)展，由WHO負(fù)責(zé)實(shí)施。這是一項(xiàng)開(kāi)放、隨機(jī)分組的環(huán)形接種試驗(yàn)，作為國(guó)家監(jiān)測(cè)體系的一部分，由埃博拉反應(yīng)小組來(lái)獨(dú)立確定疑似Ebola病例，實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)新病例之后，首先定義這個(gè)組的接觸者和接觸者的接觸者，按1∶1隨機(jī)分配至立即接種組和延遲（21天后）接種組中，接種劑量為2×107PFU，未懷孕或哺乳期的成年人都可以入組。塊隨機(jī)（Block randomis?ation）是通過(guò)隨機(jī)變化塊、地域（城市或農(nóng)村）、環(huán)的大小（≤20人或>20人）來(lái)進(jìn)行分層。該試驗(yàn)是開(kāi)放設(shè)計(jì)的，對(duì)受試者和不同接種時(shí)間的區(qū)域內(nèi)的隊(duì)伍來(lái)說(shuō)不可能保持盲態(tài)，但埃博拉響應(yīng)小組和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員并不清楚立即接種組和延遲接種組的分配。考慮到體內(nèi)病毒潛伏期約10天，預(yù)設(shè)的主要研究重點(diǎn)是入組后10天出現(xiàn)埃博拉病毒病癥狀且實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)的病例，根據(jù)立即接種組和延遲接種組的發(fā)病情況來(lái)進(jìn)行分析。

試驗(yàn)共招募7651人，分90群（cluster），其中48群（4123人）立即接種，即在出現(xiàn)病例后，周?chē)佑|人群馬上接種疫苗；42群（3528人）延遲接種（21天后），即出現(xiàn)病例后，周?chē)佑|人群在21天后接種疫苗。結(jié)果表明在接種10天之后，立即接種組沒(méi)有出現(xiàn)感染病例，而延遲接種組出現(xiàn)了16例新發(fā)病例。在立即接種組和延遲接種組接種6天后，均沒(méi)有出現(xiàn)新發(fā)病例，疫苗顯示了良好的保護(hù)效果。試驗(yàn)中，共報(bào)告了43例SAE，其中1例被認(rèn)為可能與疫苗接種相關(guān)（1例受試者出現(xiàn)了高熱）。

2016年12月，Henao-Restrepo等在《柳葉刀》發(fā)表了VSV-ZEBOV疫苗的Ⅲ期臨床試驗(yàn)的最終研究報(bào)告[14]。受試者人群包括幾內(nèi)亞和塞拉利昂的唐克里里和邦巴里地區(qū)，Ⅲ期臨床試驗(yàn)最終招募8334人，根據(jù)感染病例分為117個(gè)群，其中包括194名兒童，5837人接種疫苗。該試驗(yàn)只監(jiān)測(cè)了不良反應(yīng)和Ebola病毒感染情況，未進(jìn)行血清抗體方面的檢測(cè)。在隨機(jī)化分組部分，4539名受試者分為51個(gè)群，分配至立即接種組（3232人合格，2151人同意，2119人立即接種）；4557人分為47個(gè)群，分配至延遲接種組（3096人合格，2539人同意，2041人隨機(jī)化分組后21天接種）。立即接種組在接種10天后無(wú)發(fā)病人數(shù)，而延遲接種組在隨機(jī)化分組后10天有16人（7個(gè)群）發(fā)病，疫苗顯示了100%的有效性（95%CI 68.9～100.0，P=0.0045）。此外，19個(gè)非隨機(jī)化分群共計(jì)2745人，其中2006人合格，1677人進(jìn)行了立即接種，其中包括194名兒童。在所有的117個(gè)群中，立即接種組在接種10天后無(wú)發(fā)病人數(shù)，而延遲接種組在隨機(jī)化分組后10天有23人（11個(gè)群）發(fā)病，總體而言，預(yù)估疫苗有效率為100%（95%CI 79.3～100.0，P= 0.0033）。所有疫苗接種者訪(fǎng)視至84天，在免疫后14天53.9%的受試者至少報(bào)告了1項(xiàng)不良反應(yīng)，大部分是輕度的。主要的副作用是頭痛（25.4%）、疲勞（18.9%）和肌肉痛（13.1%）。出現(xiàn)了80例嚴(yán)重不良事件。2例被判定為與疫苗有關(guān)，分別是發(fā)熱和過(guò)敏反應(yīng)；1例流感樣疾病是可能相關(guān)。3例均康復(fù)，無(wú)后遺癥。

2.4 人5型腺病毒載體-埃博拉疫苗（Ad5-EBOV）

該疫苗是以人5型腺病毒（Ad5）為載體表達(dá)EBOV GP蛋白，疫苗類(lèi)型為復(fù)制缺陷型重組腺病毒，在人體內(nèi)不能持續(xù)復(fù)制。

2.4.1 Ⅰ期臨床試驗(yàn) 2015年3月25日在《柳葉刀》發(fā)表了Ad5-EBOV的Ⅰ期臨床試驗(yàn)[15]，這是在江蘇省泰州市進(jìn)行的一項(xiàng)隨機(jī)雙盲、安慰劑對(duì)照的臨床Ⅰ期研究。18～60歲的健康成年人順序入組，按照2∶1的比例分別編入安慰劑組、低劑量組和高劑量組。所有參加者、研究者和實(shí)驗(yàn)室人員均為盲態(tài)。主要的安全性終點(diǎn)為接種7天內(nèi)的征集性不良反應(yīng)。主要的免疫原性終點(diǎn)是接種后28天的糖蛋白特異的抗體滴度和T細(xì)胞反應(yīng)

在2014年12月28日至2015年1月9日間共招募120名受試者，分別入組低劑量組、高劑量組和安慰劑組，每組40人。受試者觀察到28天。在接種7天內(nèi)82名受試者（68%）報(bào)告至少有1項(xiàng)征集性副反應(yīng)（安慰劑組19例，低劑量組27例，高劑量組36例，P=0.0002）。最常見(jiàn)的反應(yīng)為注射部位的輕微疼痛，安慰劑組8人（20%），低劑量組14人（35%），高劑量組29例（73%），組間P<0.0001。其他副反應(yīng)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在組間無(wú)顯著性差異。低劑量和高劑量組的受試者的糖蛋白特異的抗體水平顯著升高，在14天時(shí)抗體GMT值分別為421.4和820.5（P< 0.0001）；在28天時(shí)抗體幾何平均值分別為682.7和1305.7（P<0.0001）。14天時(shí)T細(xì)胞反應(yīng)達(dá)到峰值，低劑量組SFC中位數(shù)為465.0，高劑量組為765.0。共有21人（18%）輕微發(fā)熱，包括安慰劑組9人、低劑量組6人和高劑量組6人。未觀察到嚴(yán)重的副反應(yīng)。研究結(jié)果表明高劑量疫苗Ad5-EBOV是安全的，免疫原性很強(qiáng)。1針高劑量Ad5-EBOV在14天時(shí)就能激發(fā)產(chǎn)生糖蛋白特異的體液免疫和T細(xì)胞反應(yīng)來(lái)抵抗埃博拉病毒感染。

2016年12月22日，Ad5-EBOV加強(qiáng)免疫的研究結(jié)果發(fā)表在《柳葉刀全球衛(wèi)生》上[16]。與上一研究同樣的一批受試者，在首次免疫后6個(gè)月，再次接受同樣劑量的疫苗免疫，觀察至免疫后1年。原初的臨床試驗(yàn)招募的120名受試者中，有110人參加了加強(qiáng)免疫（高劑量組38人，低劑量組35人，安慰劑組37人），初次免疫后6個(gè)月進(jìn)行同種疫苗的加強(qiáng)免疫，誘導(dǎo)了針對(duì)埃博拉糖蛋白的強(qiáng)烈的體液免疫反應(yīng)，這一反應(yīng)強(qiáng)度要高于單針初次免疫所激發(fā)的免疫反應(yīng)。加強(qiáng)免疫后28天抗體水平快速增長(zhǎng)，相比于加強(qiáng)免疫前，低劑量組增長(zhǎng)了30倍以上，達(dá)到6110.3（95%CI 4705.4～7934.6），高劑量組增長(zhǎng)了20倍，達(dá)到11824.9（8903.6～15704.8）。接受1.6×1011VP疫苗的高劑量組受試者相比于低劑量組顯示出更強(qiáng)的加強(qiáng)免疫后抗體滴度。然而，在此之后抗體水平逐漸下降。到加強(qiáng)免疫后12個(gè)月，低劑量組和高劑量組的抗體幾何平均值分別為674.1（95%CI 505.9～898.2）和856.8（573.8～1279.2），仍然維持在相對(duì)較高的水平。

加強(qiáng)免疫后，特異T細(xì)胞反應(yīng)適度增強(qiáng)，在低劑量組中，IFN-γ的斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)為23.3（IQR 16.7～90.0），高劑量組中這一數(shù)值為95.0（63.3～196.7），均顯著高于安慰劑組。相比于加強(qiáng)免疫前，雖然加強(qiáng)免疫誘導(dǎo)了更高水平的IFN～γ表達(dá)，但這一表達(dá)水平顯著低于初次免疫后28天的IFN～γ表達(dá)水平。研究結(jié)果表明在初免疫后6個(gè)月進(jìn)行同種疫苗加強(qiáng)免疫能夠引起強(qiáng)烈而持久的抗體反應(yīng)。

2.4.2 Ⅱ期臨床試驗(yàn) 2016年12月22日，在塞拉利昂開(kāi)展的Ad5-EBOVⅡ期臨床試驗(yàn)結(jié)果發(fā)表于《柳葉刀》[9]。這是一項(xiàng)隨機(jī)、觀察員單盲、安慰劑對(duì)照的Ⅱ期臨床試驗(yàn)。18～50周歲的健康成年人隨機(jī)以2∶1∶1的比例分別接受單針次高劑量（1.6×1011VP）和低劑量（8.0×1010VP）Ad5-EBOV或安慰劑，疫苗接種后對(duì)所有受試者進(jìn)行6個(gè)月的隨訪(fǎng)。共招募500名受試者，分別接種了高劑量疫苗（250人）、低劑量疫苗（125人）或安慰劑（125人）。疫苗接種受試者的征集性注射部位不良反應(yīng)顯著高于安慰劑組（P= 0.0077），但大多數(shù)反應(yīng)是輕度或中度的。高劑量疫苗組報(bào)告了3例嚴(yán)重不良反應(yīng)事件。Ad5-EBOV誘導(dǎo)的ELISA EC90抗體陽(yáng)性反應(yīng)在免疫后14天可檢測(cè)到，抗體反應(yīng)在免疫后28天達(dá)到峰值，低劑量組抗體滴度為1471.8（95%CI：1151.0～1881.8），高劑量組抗體滴度為 2043.1（1762.4～2368.4）。疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體在之后的幾個(gè)月內(nèi)迅速下降。該研究表明Ad5-EBOV疫苗在塞拉利昂健康成年人中是安全的，且具有高免疫原性，以低劑量（8.0×1010VP）進(jìn)行接種最佳。

3 結(jié)語(yǔ)

目前，已有臨床數(shù)據(jù)證實(shí)，GP蛋白具有良好的免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)。rVSV-ZBEOV疫苗更是在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中驗(yàn)證了其保護(hù)性，證實(shí)了以GP蛋白為目標(biāo)抗原的病毒載體疫苗的可行性。多種病毒載體類(lèi)疫苗在人體上顯示了很好的安全性和免疫原性，有望發(fā)展成為埃博拉疫苗。

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An Overview of Clinical Trials for Ebola Vaccines

HOU Li-Hua*
Beijing Institute of Biotechnology,Beijing 100071,China
*Corresponding author,houlihua@sina.com

Several clinical trials for Ebola vaccines started after Ebola epidemic outbreak in 2014.Ebola vac?cines in the clinical trials mainly focused on viral vectors,such as human adenovirus vector（Ad5 and Ad26）, Chimpanzee adenovirus vector（chAd3）,vesicular stomatitis virus vector（VSV）,vaccinia vector（MVA）.Different vac?cination strategies were used in the clinical trials,including one immunization and prime-boost immunization.Those Ebola vaccines based on Ad5,Ad26,ChAd3 and MVA vectors showed good immunogenicity in phaseⅠand phaseⅡ clinical trials,and Ebola vaccine based on VSV vector showed protection efficacy in phaseⅢ clini?cal trial.

Ebola vaccine;clinical trials;virus-vector vaccines;immunogenicity

R373;R392

A

1009-0002（2017）01-0035-09

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.01.007

2017-01-02

侯利華（1973-），女，研究員

侯利華，（E-mail）houlihua@sina.com