高效液相色譜法測定復(fù)方石栗噴霧劑中鹽酸小檗堿含量

呂本強(qiáng)，范積平，張貞良 ，林東賢

（中國人民解放軍第421醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510318）

·檢驗(yàn)檢測·

高效液相色譜法測定復(fù)方石栗噴霧劑中鹽酸小檗堿含量

呂本強(qiáng)，范積平，張貞良 ，林東賢

（中國人民解放軍第421醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510318）

目的建立測定復(fù)方石栗噴霧劑中鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法色譜柱采用Zorbax300 SB-C18柱（250 mm× 4．6 mm，5 m），流動相為乙腈-0．1%磷酸溶液（50∶50，每100m L加十二烷基磺酸鈉0．1 g），檢測波長為265 nm，流速為1．0m L／min，柱溫為30℃。結(jié)果 鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在6．4～64．0 g／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0．999 8），平均回收率為98．01%，RSD為1．63%（n＝9）。結(jié)論 該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，重復(fù)性好，簡便易行，可用于該制劑中鹽酸小檗堿的含量測定。

高效液相色譜法；鹽酸小檗堿；含量測定；復(fù)方石栗噴霧劑

復(fù)方石栗噴霧劑是我院臨床應(yīng)用多年的醫(yī)院制劑，由石栗、黃柏、冰片等中藥材提取精制而成，主要用于治療Ⅰ°和Ⅱ°燒燙傷、表皮擦傷、傷筋（急性軟組織損傷）所導(dǎo)致的瘀腫疼痛等癥，臨床效果滿意[1]。為進(jìn)一步提高該制劑質(zhì)量的可控性、穩(wěn)定性，保證臨床用藥安全、有效，根據(jù)2010年版《中國藥典(一部)》[2]及文獻(xiàn)[3-8]，本研究中考察了測定該制劑中鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜(HPLC)法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司，包括SPD-20A檢測器）；HT-220A型柱溫箱（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；UV-1800型紫外分光光度儀（日本島津公司）。

1．2 試藥

鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110713-201212，供含量測定用）；復(fù)方石栗噴霧劑（醫(yī)院制劑，批號為20141127，20141201，20141208）；乙腈、甲醇均為色譜純；重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 測定波長選擇

取鹽酸小檗堿對照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示在348，265，229 nm波長處均有較大吸收峰，在265 nm波長處吸收度較強(qiáng)且不易受溶劑峰干擾，故選擇265 nm作為測定波長，見圖1。

圖1 流動相溶液波長掃描圖（200～400 nm）

2．2 溶液制備

對照品溶液：取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1mL含0．05mg的溶液，即得。

供試品溶液：精密量取該制劑10 mL，置100 m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0．45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液：據(jù)處方配比（缺黃柏藥材）同法制成陰性對照品，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

2．3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Zorbax300 SB-C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0．1%磷酸溶液（50∶50，每100m L加十二烷基磺酸鈉 0．1 g）；檢測波長：265 nm；流速：1．0mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。取以上3種溶液按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。可知鹽酸小檗堿的保留時(shí)間為9．2 min，理論板數(shù)不低于4 000，且陰性對照在鹽酸小檗堿相應(yīng)保留時(shí)間處無干擾，見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2．4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，置250mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為0．08 g／L的對照品貯備液。取適量，加流動相定容至 50 m L容量瓶中，配制成 6．4，16．0，25．6，32．0，48．0，64．0μg／m L不同質(zhì)量濃度的系列對照品溶液。以對照品質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝33 103X+8 415．4，r＝0．999 8。鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在6．4～64．0μg／mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2．2項(xiàng)下供試品溶液適量，在室溫下貯存，按擬訂色譜條件，分別于0，0．5，1．0，3．0，5．0 h時(shí)進(jìn)樣測定供試品溶液中鹽酸小檗堿峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為1．72%(n＝5)，表明供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，見表1。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

精密度試驗(yàn)：精密吸取上述對照品溶液10μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測定鹽酸小檗堿峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0．12%(n＝5)，表明儀器精密度良好，見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

重復(fù)性試驗(yàn)：精密量取同一批（批號為20141127）供試品5份，各10m L，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定鹽酸小檗堿峰面積積分值。結(jié)果的RSD為1．52%(n＝5)，表明方法重復(fù)性良好，見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n＝5)

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量（批號為20141127，鹽酸小檗堿含量0．219 g／L）的供試品9份，各10 mL，各加入一定量的對照品，依法進(jìn)樣測定含量，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表4。

2．5 樣品含量測定

分別精密量取3批供試品（批號分別為20141127，20141201，20141208）各10m L，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定鹽酸小檗堿含量，結(jié)果批號為20141127，20141201，20141208的樣品含量分別為0．219，0．224，0．228 g／L。

表4 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

3 討論

3．1 檢測指標(biāo)成分選擇

復(fù)方石栗噴霧劑是我院臨床應(yīng)用多年的醫(yī)院制劑，由石栗、黃柏、冰片等組方。方中黃柏苦寒燥濕、瀉火解毒，既能燥濕以斂瘡，又能清解燒燙傷火熱之毒；冰片清香宣散、清熱止痛，用于瘡瘍腫痛、潰后不斂；石栗活血散瘀，以清瘀熱。諸藥相伍，共奏清熱燥濕，瀉火解毒，活血散瘀，斂瘡生肌，消腫止痛之功效。生物堿類化合物為黃柏中主要有效成分，如小檗堿、藥根堿、巴馬汀、黃柏堿等，其中小檗堿、巴馬汀已被證明具有抗菌抗炎、清熱解毒等藥理作用[9-10]，與該制劑功能主治相對應(yīng)。在制備過程中以75%乙醇浸漬提取黃柏有效成分，小檗堿類成分得到充分提取，故本制劑選擇黃柏中鹽酸小檗堿作為含量測定的指標(biāo)成分。

3．2 測定波長選擇

分別以甲醇、流動相為空白對照，取鹽酸小檗堿對照品溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在229，265，348 nm波長處均有較大吸收峰，但以甲醇為空白，流動相于220～235 nm波長處有微吸收。為避免流動相對測量結(jié)果的影響，且鹽酸小檗堿在265 nm波長處吸收較強(qiáng)，峰形較好，故選擇265 nm作為檢測波長。

3．3 流動相選擇

考察鹽酸小檗堿在不添加離子對試劑的乙腈-磷酸流動相體系中的分離效果，發(fā)現(xiàn)色譜峰分離效果明顯，但其系統(tǒng)適應(yīng)性差，理論板數(shù)偏低，影響測量的準(zhǔn)確性[11-16]。通過對比多種不同的流動相，試驗(yàn)結(jié)果顯示，以乙腈-0．1%磷酸溶液（50∶50，每100 m L加十二烷基磺酸鈉0．1 g）為流動相，鹽酸小檗堿峰形尖銳、對稱，無伸展、拖尾現(xiàn)象，色譜圖基線穩(wěn)定；通過系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，鹽酸小檗堿在該制劑中能得到理想的分離，陰性對照無干擾，故選用乙腈-0．1%磷酸溶液作為流動相。

3．4 樣品處理方法選擇

本制劑為石栗、黃柏等藥材經(jīng)75%乙醇浸漬、滲漉而成，處方簡單，待測成分明確，鹽酸小檗堿在流動相中能完全溶解，樣品處理也相對簡單，直接量取樣品溶液，用流動相稀釋定容即可。

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Content Determ ination of Berberine Hyd roch loride in Com pound Shili Sp ray by HPLC

LüBenqiang,Fan Jiping,Zhang Zhenliang,Lin Dongxian
(Pharmacy Department,PLA No．421 Hospital,Guangzhou,Guangdong,China 510318)

Objective To establish an HPLC method to determine the content of berberine hydrochliride in Compound Shili Spray．M ethods The determination was performed by HPLC using ZORBAX300SB-C18column(250 mm×4．6 mm,5μm);the column temperature was 30℃,the mobile phase consisted of acelonitrile-0．1% phosphoric acid solution(50∶50)(0．1 g sodium dodecylsulphate per 100 mL),the UV detection wavelength was 265 nm and the flow rate was 1．0 m L／min．Resu lts The berberine hydrochloride was in good linearity in the range of 6．4-64．0μg／mL(r＝0．999 8)．The average recovery rate was 98．01%,RSD＝1．63%(n＝9)．Conclusion The method is sensitive,accurate and reproducible,which can be used to control the content of berberine hydrochloride in Compound Shili Spray．

HPLC;berberine hydrochloride;content determination;Compound Shili Spray

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0015-03

2016-10-09；

2016-11-28)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．005

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題[14ZJZ03-3]。

呂本強(qiáng)（1978-），男，副主任藥師，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿┬录夹g(shù)與醫(yī)院藥學(xué)，（電話）020-61636468（電子信箱）Lbq421＠163．com。

張貞良（1964-），男，主任藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥事管理，（電子信箱）changefor＠vip．sina．com。