橙皮苷殼聚糖膜劑制備工藝研究

彭國，廖日房

（1.廣東省高州市中醫(yī)院，廣東茂名 525200；2.中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510235）

橙皮苷殼聚糖膜劑制備工藝研究

彭國1，廖日房2

（1.廣東省高州市中醫(yī)院，廣東茂名 525200；2.中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510235）

目的制備用于抗氧化保健作用的新型透頰膜給藥制劑。方法采用成膜材料殼聚糖，制備中藥橙皮苷殼聚糖膜劑；以膜劑的外觀質(zhì)量、抗拉力強度、溶解時間、黏附時間、體外黏附力及藥物釋放度作為評價指標，優(yōu)選最佳制備方法，并采用紫外分光光度法測定橙皮苷的含量。結(jié)果所制膜劑易成膜、起膜，透明度高，均勻性良好，測定波長為420 nm。結(jié)論該膜劑處方合理，引起的生物組織反應(yīng)小，可為口腔科常見疾病防治提供新的劑型。

橙皮苷；殼聚糖；膜劑；制備工藝

橙皮苷存在于檸檬、柑桔、代代花等果皮中，別名二氫黃酮苷、陳皮苷、柑果苷、桔皮苷、橘皮苷。在柑桔屬（Cirtus）中，中果皮（白色海綿狀組織）發(fā)達系統(tǒng)和較薄系統(tǒng)者多含橙皮苷。橙皮苷主要具有止咳、抗氧化作用，也有維持滲透壓、增強毛細血管韌性、縮短出血時間、降低膽固醇等作用，臨床制劑用于心血管系統(tǒng)疾病的輔助治療。其可制作多種防治動脈硬化和心肌梗死的藥物，是成藥“脈通”的主要原料之一，在食品工業(yè)中可用作天然抗氧化劑，也可用于化妝品[1－2]。殼聚糖（CS）是一種半合成高分子氨基多糖，主要存在于蝦、蟹殼中，對人體無刺激、無致敏、無毒，且生物可降解，是國家食品藥品監(jiān)督管理總局認可的一類生物降解材料，且已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域[3－4]。本試驗中以殼聚糖為主要膜材，配以聚乙烯醇（PVA）、海藻酸鈉（ALG）、羧甲基纖維素鈉（CMC－Na）等其他輔材，制備3種不同組方配比的膜劑，通過緩釋性、溶解性、黏附力及黏附時間測試，最終確定了橙皮苷殼聚糖膜劑的最佳制備工藝。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FA1004型電子天平（沈陽天平儀器有限公司）；UV1101型紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；CMT2000型電子拉力試驗機（昆山科瑞特試驗儀器有限公司）；RCZ－6C型溶出度測定儀（上海黃海藥檢儀器廠）；HH－S型恒溫水浴箱（東莞市鼎檢儀器設(shè)備有限公司）；KQ－100B型超聲波清洗器（深圳市得康科技有限公司）；遠紅外快速干燥箱（上海科辰實驗設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

橙皮苷（上海西域集團有限公司，批號為H0049）；殼聚糖（脫乙酰度90%，鄭州金利生物有限公司）；ALG（鄭州盛凱化工產(chǎn)品有限公司）；PVA（廣州市啟華化工有限公司）；CMC－Na（廣州市啟華化工有限公司）；其余試劑均為分析純。

2 制備工藝

2.1 處方設(shè)計

設(shè)計3組膜劑組方配比，其中橙皮苷0.020 g，加水至20 mL，結(jié)果見表1。

表1 處方工藝設(shè)計

2.2 處方膜劑制備

1號處方：根據(jù)表1所示處方比例，將0.507 g殼聚糖加入7 mL體積分數(shù)為2%的冰醋酸中，精密加入橙皮苷0.020 g，攪拌均勻，30℃水浴加熱使溶解。稱取PVA 0.219 g溶于6 mL水，90℃超聲溶解。于30℃恒溫水浴中，使海藻酸鈉0.260 g充分溶解于7 mL水溶液中，備用。將PVA溶液、海藻酸鈉溶液加入殼聚糖溶液中，加水至20 mL，充分攪勻，靜置脫泡30 min。取上述混合溶液涂布于潔凈的聚四氟乙烯板上，30℃干燥36 h，起膜，鋪于以乙基纖維素為背襯層的薄膜上，即得。

2號處方：根據(jù)表1所示處方比例，用10 mL體積分數(shù)為2%的冰醋酸配置含0.517 g殼聚糖的溶液，精密加入0.020 g橙皮苷，30℃水浴加熱使溶解。稱取0.375 g海藻酸鈉與0.045 g碳酸氫鈉溶于10 mL水，置30℃恒溫水浴箱中，靜置脫泡。先將海藻酸鈉溶液涂布于潔凈的聚四氟乙烯板上，略干后將殼聚糖溶液涂布于其上，30℃干燥36 h，起膜，鋪于以乙基纖維素為背襯層的薄膜上，即得。

3號處方：根據(jù)表1所示處方比例，將0.515 g殼聚糖加入10 mL體積分數(shù)為2%的冰醋酸中，精密加入0.020 g橙皮苷，30℃恒溫水浴溶解后得1液。將適量羧甲基纖維素鈉和甘油攪勻成糊狀，得2液。稱取0.210 g PVA溶于10 mL水，90℃超聲溶解，得3液。將1液倒入2液，充分混勻成糊狀，得4液。將4液倒入3液，攪拌成形，加熱0.5 h，過濾，靜置脫泡。取上述混合溶液涂布于潔凈的聚四氟乙烯板上，30℃干燥36 h，起膜，鋪于以乙基纖維素為背襯層的薄膜上，即得。

2.3 質(zhì)量評價

2.3.1 外觀評價

分別評價3組處方配比制備的膜劑外觀，結(jié)果見表2。

表2 3組配比制備的膜劑外觀評價結(jié)果

2.3.2 橙皮苷含量測定(紫外吸收光譜法)

檢測波長選擇：空白對照為0.5%十八烷基磺酸鈉溶液，于200～600 nm波長范圍掃描[5]。結(jié)果顯示，橙皮苷在420 nm波長處有最大吸收。

標準曲線繪制：精密稱取橙皮苷標準品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，加入0.5%十八烷基磺酸鈉溶液至刻度，配制成質(zhì)量濃度為0.5 mg／mL的對照品溶液。在100 mL容量瓶中，分別精密吸取對照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，用0.5%十八烷基磺酸鈉溶液定容，制成系列對照品溶液，于278 nm波長處測定吸光度。得標準曲線方程Y＝0.048 3X＋0.000 2，r＝0.999 7（n＝5）。

含量測定：取1號、2號、3號膜（1.0 cm×0.5 cm）各1片，置10 mL容量瓶中，加適量0.5%十八烷基磺酸鈉溶液振搖1 min，超聲0.5 h，冷卻后加至刻度，搖勻。以0.5%十八烷基磺酸鈉溶液為空白對照，于420 nm波長處測定吸光度，根據(jù)標準曲線計算含量。結(jié)果3組膜劑中橙皮苷含量分別為0.407，0.405，0.409 mg／cm2。

2.3.3 抗拉力強度測定

在3組膜劑中，分別取2片（1.0 cm×4.0 cm）橙皮苷殼聚糖膜劑，置濕度為60%條件下1周。使用電子拉力試驗機進行拉力測試，結(jié)果見表3。

2.3.4 溶解時間測定

取測試膜夾，在夾子上放入恒定37℃的水浴（裝有100 mL蒸餾水的100 mL燒杯）中，置電磁攪拌器上（50 r／min），記錄膜劑溶解時間，結(jié)果見表3。

2.3.5 黏附時間測定

在3組膜劑中，分別取3片（1.0 cm×1.0 cm）橙皮苷殼聚糖膜劑粘貼于已去污、相對平整的新鮮豬大腸，掛在37℃、pH為6.2的恒溫水浴中，分別計算平均黏附時間。結(jié)果見表3。

2.3.6 體外黏附力測定

取豬大腸內(nèi)膜置32℃及pH為7.4的等滲磷酸鹽緩沖液中浸泡0.5 h，備用。根據(jù)張力儀設(shè)計原理，制定黏附力測定儀，將2塊平臺中的1塊平臺固定于試驗臺上，另1塊平臺連接到天平稱物托盤下，用黏合劑將2塊（3.0 cm×3.0 cm）備用豬大腸內(nèi)膜背襯層分別黏附在2塊平臺上，使其黏膜面朝外，將橙皮苷殼聚糖膜劑潤濕置2塊大腸黏膜之間，稍壓2 min，隨后在另一托盤上不斷施加重力，測定拉開測試膜與黏膜所需力。結(jié)果見表3。

表3 3組處方配比膜劑性能測定結(jié)果比較

2.3.7 藥物釋放度測定

采用小杯槳法進行藥物體外釋放試驗，將杯放入恒溫（37±0.5）℃及恒速50 r／min的水浴中，不斷攪拌，分別取1塊（2.0 cm×2.0 cm）測試膜放入十八烷基磺酸鈉溶液中，分別于開始試驗15，30，40，50，60，90，120 min取樣5 mL，同時補充等量釋放介質(zhì)，過濾，測定橙皮苷含量，結(jié)果見表4。將累積釋放百分率對時間作圖，結(jié)果見圖1。

表4 處方1號、2號、3號膜釋放度測定結(jié)果

圖1 不同組方膜劑的釋放度

3 討論

橙皮苷為橙皮素通過7位羥基與蕓香糖形成的糖苷，為二氫黃酮衍生物，廣泛存在于豆科、白樺、唇形花科、蝶形花科、蕓香科、柑橘屬植物體中，其藥理作用也受到了多方面的關(guān)注。Cvetnic等[6]報道，橙皮苷可有效抑制20余種細菌的活性，對10多種酵母菌也有很好的抑制作用。橙皮苷質(zhì)量濃度在1～10 μg／mL范圍內(nèi)對葡萄孢屬、曲霉菌屬也具有抑制作用[7]。橙皮苷可抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的炎性細胞因子腫瘤壞死因子－α（TNF－α）的生成，其抗炎作用優(yōu)于消炎痛和柚皮素，對組織的毒性更小[8]。橙皮苷屬多酚類化合物，具有很好的抗氧化活性，可以清除氧自由基，抑制氧化還原通路的相關(guān)酶類。研究還發(fā)現(xiàn)，橙皮苷具有抗病毒、抗腫瘤、抗心血管疾病、防紫外線及免疫調(diào)節(jié)等作用[9－10]。

殼聚糖是僅次于纖維素的第2大可再生天然高分子材料，來源廣泛，安全性好，具有有趣的生物性能，如抗菌、抗炎及工藝性能如脂肪結(jié)合能力或紋理增強[11]。殼聚糖凝膠可作為牙抗菌素的載體，具有止血、消炎和促進傷口愈合等功能；可降低血清和肝臟中的膽固醇濃度，用于降膽固醇劑。殼聚糖能強化肝臟機能，防止由于過量飲酒引起的肝臟宿醉，并對殘留在體內(nèi)的重金屬、毒素、農(nóng)藥、化學(xué)色素具有吸附和排泄功效。癌癥患者服用殼聚糖后，可激活體內(nèi)具有免疫功能的淋巴細胞，使其能分辨正常細胞和癌細胞，并殺死癌細胞。殼聚糖能調(diào)節(jié)體內(nèi)的pH至弱堿性，提高胰島素的利用率，有利于防治糖尿病。此外，其還具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，使胰島素分泌正常，抑制血糖升高，調(diào)血脂。在生物醫(yī)學(xué)方面，殼聚糖易于加工成凝膠、膜、納米纖維、納米纖維絲、珠子、微粒、納米顆粒及支架和海綿狀泡沫等，在組織工程、傷口愈合、藥物控釋載體及基因工程方面具有廣泛的應(yīng)用前景[12－14]。

本試驗結(jié)果證明，3組膜劑處方配比均能制成棕色且外觀平整的中藥橙皮苷膜劑，其中處方1號膜透明度高，柔韌性強，均勻性最好。殼聚糖屬天然高分子多聚糖，具有較好的成膜性[15]，當(dāng)它們被植入生物體內(nèi)或覆蓋在創(chuàng)傷表面時，引起的生物組織反應(yīng)小，且可被組織細胞釋放的酶降解，但其黏附性能并不理想。而口腔貼膜應(yīng)受到黏膜黏附性和生理狀況（唾液、口腔活動等）的影響和制約，黏膜黏附性是決定口腔貼膜優(yōu)良與否的先決條件。本試驗中參考文獻[16]自制黏附力測定裝置進行測定，結(jié)果隨著海藻酸鈉或CMC－Na比例的增加，黏附力明顯增加，PVA比例增大而黏附力減小。1號處方加入適量PVA，可使膜劑易成膜、不易碎，且具有一定黏附力，故選擇1號處方作為中藥橙皮苷膜劑的成膜材料。

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Preparation Technology of Membrane of Hesperidin and Chitosan Polymers

Peng Guo1，Liao Rifang2

（1.Gaozhou Traditional Chinese Hospital，Maoming，Guangdong，China525200；2.Department of Pharmacy，Sun Yat－Sen Memorial Hospital，Sun Yat－Sen University，Guangzhou，Guangdong，China510235）

Objective To prepare novel buccal film formulation anti oxidation and health care function.Methods The chitosan film was prepared by chitosan as the film－forming material.The appearance quality，tensile strength，dissolution time，adhesion time，in vitro adhesion and drug release were used as evaluation indexes.The content of hesperidin was determined by ultraviolet spectrophotometry.ResultsThe films were easy to form and film，and the transparency was high and the homogeneity was good.The measurement wavelength was 420 nm.ConclusionThe formulation of this film is reasonable，and the biological tissue reaction is small.It can provide a new dosage form for the prevention and treatment of common diseases in the Department of Stomatology.

hesperidin；chitosan polymers；membrane；preparation techonlogy

TQ461

A

1006－4931(2017)01－0019－04

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.006

2016－08－18；

2016－09－21)

彭國，大學(xué)本科，主管藥師，研究方向為臨床藥學(xué)，（電話）0668－6199737。