液質聯用法測定鹽酸美西律片的含量

楊敏，崔艷，吳威

（1.黑龍江省齊齊哈爾市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江齊齊哈爾 161005；2.黑龍江省哈爾濱市第一醫院，黑龍江哈爾濱 100730）

液質聯用法測定鹽酸美西律片的含量

楊敏1，崔艷2，吳威2

（1.黑龍江省齊齊哈爾市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江齊齊哈爾 161005；2.黑龍江省哈爾濱市第一醫院，黑龍江哈爾濱 100730）

目的建立測定鹽酸美西律片含量的高效液相色譜－質譜聯用（HPLC－MS／MS）法。方法采用HPLC－MS／MS儀，色譜柱為Agilent Zorbax SB－C18柱（150 mm×2.1 mm，5 m），以0.1%甲酸乙腈－0.1%甲酸水（30∶70）為流動相，流速為0.2 mL／min，柱溫為30℃；以阿替洛爾為內標物，采用電噴霧電離（ESI），正離子模式，多反應監測（MRM）掃描方式。結果鹽酸美西律質量濃度在0.627～20.064 g／mL范圍內與峰面積線性關系良好（r＝0.999 7），定量限為0.5 ng／mL，方法回收率為99.32%，RSD＝0.85%(n＝9)，穩定性良好。結論該方法分析快速，專屬性強，靈敏度高，可用于鹽酸美西律片的質量控制。

鹽酸美西律片；含量；高效液相色譜－質譜聯用法；質量控制

鹽酸美西律（mexiletine hydrochloride）為鈉通道阻滯劑，臨床主要用于治療慢性室性心律失常，屬于Ib類抗心律失常藥物[1－3]。該藥品治療窗較窄，有效劑量與最小中毒劑量很接近，因此有必要建立準確、靈敏、專屬性強的質量標準對其制劑的質量進行有效控制。近些年，其含量測定的方法有很多報道，主要有HPLC法[4－7]、毛細管電泳法[8]、滴定法[7，9]、紫外分光光度法[10]等，尚未檢索到用高效液相色譜－質譜聯用（HPLC－MS／MS）法對該藥品進行分析的報道。與以上這些方法相比，HPLC－MS／MS法的專屬性更強，靈敏度更高，更適用于該藥品定性鑒別和含量測定等，以實現質量控制，也可為該藥品的痕量測定提供方法學依據。為此，本研究中采用HPLC－MS／MS法測定了鹽酸美西律片的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Agilent 6460型三重四極桿質譜儀配有電噴霧離子源，B.05.00 Masshunter色譜工作站（美國安捷倫公司）；BP 211D型電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2 試藥

鹽酸美西律對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100218－201203）；阿替洛爾對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100117－201105）；鹽酸美西律片（上海信誼藥廠有限公司，批號為151101，151102，151103，標示量均為0.1 g）；乙腈為色譜純（DikmaPure公司，批號為50101）；甲酸為分析純（天津光復科技發展有限公司，批號為20130705）；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜與質譜條件

色譜柱為十八烷基鍵合硅膠柱Agilent Zorbax SB－C18柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）；流動相為0.1%甲酸乙腈－0.1%甲酸水（30∶70）；流速0.2 mL／min；柱溫30℃，進樣量20 μL。質譜采用電噴霧離子源（ESI）、正離子掃描、多反應監測方式（MRM）進行定量分析。干燥氣和霧化器均為氮氣，干燥氣溫度300℃，干燥氣流量30 L／min，鞘氣流量15 L／min，毛細管電壓4 500 V，噴嘴電壓2 000 V，掃描時間0.3 s，MRM掃描參數見表1。離子流色譜圖峰面積以內標法定量。離子全掃描二級質譜圖見圖1。可見，內標阿替洛爾和鹽酸美西律均破壞出了3個明顯的二級碎片離子，且響應值較強、豐度比穩定，因此亦為該2種化合物的專屬性鑒別提供了數據依據。

表1 MRM掃描參數表

圖1 全掃描二級質譜圖

2.2 溶液制備

內標貯備溶液：稱取阿替洛爾對照品50.02 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內標貯備溶液（500 μg／mL）。

對照品溶液：稱取鹽酸美西律對照品50.16 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液（500 μg／mL）。精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，精密加入內標貯備溶液1 mL，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

供試品溶液：取樣品20片，研細，精密稱取細粉適量（約相當于鹽酸美西律50 mg），精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續濾液1 mL，置100 mL容量瓶中，精密加入內標貯備液1 mL，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

陰性對照品溶液：按質量標準中處方比例同法制備不含鹽酸美西律的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗：分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，按擬訂色譜及質譜條件進樣測定，記錄HPLC－MS／MS定量離子離子流色譜圖。結果見圖2。可見，組分出峰的區域無干擾峰，且陰性對照基底響應值極低，表明處方中其他成分及輔料對樣品的測定無干擾。

圖2 HPLC－MS／MS定量離子離子流色譜圖

線性關系考察：分別精密量取對照品貯備溶液0.25，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00 mL，置200 mL容量瓶中，分別精密加入內標貯備液2 mL，加流動相稀釋至刻度，搖勻，配成鹽酸美西律對照品系列溶液，按擬訂色譜及質譜條件進樣分析，記錄定量離子總粒子流色譜圖，以鹽酸美西律峰與阿替洛爾峰面積比值（Y）為縱坐標，以鹽酸美西律質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y＝0.283 1 X＋0.033 24，r＝0.999 7(n＝7)。結果表明，鹽酸美西律質量濃度在0.627～20.064 μg／mL范圍內與內標物峰面積比值線性關系良好。將對照品系列溶液繼續稀釋，進樣分析，記錄信噪比（S／N）為10時鹽酸美西律的質量濃度(即定量限)為0.5 ng／mL。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定鹽酸美西律與內標峰面積比值。結果的RSD為0.11%（n＝6），表明該方法精密度良好。

重復性試驗：取鹽酸美西律片（批號為151101）6片，依法測定其含量。結果平均含量為97.24%，其RSD為0.33%（n＝6），表明該方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，24 h時進樣分析，內標法計算含量。結果的RSD為0.20%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的鹽酸美西律片（批號為151101）20片，研細，分別精密稱取細粉適量（約相當于鹽酸美西律50 mg），置100 mL容量瓶中，分別精密加入對照品40，50，60 mg，各3份，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。分別精密量取續濾液1 mL，置9個100 mL容量瓶中，再分別精密加入內標貯備液1 mL，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密吸取20 μL，進樣分析，計算鹽酸美西律的加樣回收率。結果見表2。

表2 鹽酸美西律加樣回收試驗結果（n＝9）

2.4 樣品含量測定

取3批鹽酸美西律片，依法制備供試品溶液，進樣分析，記錄定量離子離子流色譜圖，按內標法計算含量。結果批號為151101，151102，151103的樣品鹽酸美西律含量分別為標示量的97.24%，98.15%，97.64%。在液質聯用的同時，本試驗中還用液相色譜紫外檢測器在216 nm波長處對該樣品含量進行了檢測，并用外標法計算了鹽酸美西律片的含量，結果3批樣品含量分別為標示量的97.30%，97.95%，97.69%。可見，2種方法檢測結果無顯著性差異。

3 討論

色譜及質譜條件選擇：本試驗中分別考察了0.02mol／L乙酸銨－乙腈、0.1%乙酸－乙腈、0.1%甲酸－甲醇等流動相，結果流動相為0.1%甲酸乙腈－0.1%甲酸水（30∶70）時塔板數最高、質譜響應值最高，理論塔板數均可達4 000以上。因此，本研究中采用該流動相系統作為檢測條件。在對二級質譜進行優化時，鹽酸美西律和阿替洛爾均得到了穩定的碎片離子，因此本文獻也為這兩種藥品的定性鑒別提供了參考數據。

各國藥典比較：中國藥典[7]、美國藥典、英國藥典、歐洲藥典收載的鹽酸美西律含量測定方法為HPLC法和電位滴定法，其中，HPLC條件大體一致，均為甲醇－0.1 mol／L醋酸鈉溶液，液質聯用法由于只可用揮發性成分作流動相，故不適用于該系統。與各國藥典的方法相比，本研究中建立的方法適用于液質聯用法分析鹽酸美西律的含量，且引入了適當的內標物，定量限也更低，能更準確、靈敏、專屬地檢測鹽酸美西律的含量，與上述藥典中的方法比較更先進。

檢索到很多鹽酸美西律含量測定的HPLC法[4－8]，但其色譜系統均不適用于質譜檢測器的測定。本研究中與上述文獻報道中的色譜系統均不相同，為鹽酸美西律的分析開發了新的條件，且該系統適用于質譜檢測，能為HPLC－MS／MS法對該藥品的體內分析、復方制劑含量測定等提供參考。

[1]鄭斌，周旭華.胺碘酮聯合鹽酸美西律治療ICU高危快速型心律失常的效果分析[J].中國當代醫藥，2014，21（18）：63－65.

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[6]蔡濤，霍玉.高效液相色譜法測定鹽酸美西律片的含量[J].中國藥品標準，2010，11（2）：129－131.

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Content Determination of Mexiletine Hydrochloride Tablets by HPLC－MS／MS

Yang Min1，Cui Yan2，Wu Wei2

(1.Qiqihaer Institute for Food and Drug Control，Qiqihaer，Heilongjiang，China161005；2.Harbin First Hospital，Harbin，Heilongjiang，China100730）

ObjectiveTo establish an HPLC－MS／MS method for the determination of mexiletine hydrochloride tablets.Methods The LC－MS／MS was used.The samples were carried out on an Agilent Zorbax SB－C18column（150 mm×2.1 mm，5 μm）.The mobile phase was composed of 0.1%formic acid acetonitrile－0.1%formic acid water（30∶70）at a flow rate of 0.2 mL／min.The column temperature was 30℃.Atenolol was used as the internal standard.The detection was performed with MRM using electrospray ionization （ESI）.ResultsA good linearity of mexiletine hydrochloride was obtained in the range of 0.627－20.064 μg／mL（r＝0.999 7）and the limit of quantitation of mexiletine hydrochloride was 0.5 ng／mL.The recovery rate was 99.32%（RSD＝0.85%，n＝9）and the stabilities were good.ConclusionThis method is fast，sufficiently selective and sensitive which provides an analytical basis for the quality control of mexiletine hydrochloride tablets.

mexiletine hydrochloride tablets；content；HPLC－MS／MS；quality control

R972＋.2；R927.2

A

1006－4931(2017)02－0035－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.010

2016－10－07)

楊敏（1979－），女，大學本科，主管藥師，主要從事藥物分析工作，（電子信箱）wangchaozhongkcn＠163.com。