清熱利濕飲通過調控FBW7影響HaCaT細胞Cyclin E的表達

孫淑娜 黃啟騰 魏海峰 李廣遠 趙 穎 張曉杰

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·論著·

清熱利濕飲通過調控FBW7影響HaCaT細胞Cyclin E的表達

孫淑娜1黃啟騰1魏海峰2李廣遠3趙 穎1張曉杰1

目的： 明確清熱利濕飲調控HaCaT細胞內Cyclin E表達的機制。方法： Western blot檢測HaCaT細胞蛋白半衰期；免疫沉淀及Western blot檢測蛋白泛素化水平；Western blot及Real-time PCR檢測清熱利濕飲對E3泛素連接酶SCF-FBW7表達的影響。結果： 與對照組比較,清熱利濕飲組Cyclin E蛋白的半衰期較對照組縮短，Cyclin E蛋白泛素化水平及蛋白降解速度顯著增高，FBW7 mRNA與蛋白水平明顯上調。結論： 清熱利濕飲通過調控FBW7抑制Cyclin E的表達。

清熱利濕飲； Cyclin E； 泛素化； FBW7

銀屑病病理生理的重要特點之一是表皮基底層的角質形成細胞增殖加速，細胞周期縮短，組織病理呈現角質形成細胞過度增生[1]。清熱利濕飲是針對銀屑病證型的有效中藥組方，經過臨床觀察療效顯著[2]。我們前期研究發現清熱利濕飲能夠抑制角質形成細胞HaCaT細胞增殖和Cyclin E蛋白表達下調，但機制不明[3]。為明確清熱利濕飲影響細胞增殖的分子機制，我們對其調控Cyclin E的表達機制進行了探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 人永生化表皮細胞HaCaT細胞株購于武漢大學中國典型培養物保藏中心；

1.1.2 主要試劑 DMEM培養基、胰蛋白酶與胎牛血清：Gibco公司。Western blot用一抗，siRNA，protein A珠子：Santa cruz公司， Light Cycler 480 SYBR Green I Master：ROCHE公司。MG132，CHX， RIPA裂解液：碧云天生物技術公司。Trizol，Lipofectamine2000：Invitrogen公司。cNDA逆轉錄試劑盒：天根生化科技有限公司。

1.2 主要方法

1.2.1 清熱利濕飲藥液制備 龍膽草6 g，黃芩9 g，柴胡9 g，山梔9 g， 生地黃15 g， 牡丹皮9 g，當歸9 g，金銀花30 g，土茯苓30 g，澤瀉9 g，車前子15 g，甘草6 g，上述藥材加10倍量水浸泡1 h,煎煮至沸,保持微沸45 min,過濾,濾渣加入8倍量水再煎煮,沸騰后保持微沸0.5 h,合并兩次煎煮液，將上述中藥液減壓濃縮成200 mL，每毫升藥液含0.78 g生藥，過濾除菌，4℃冰箱保存備用?！?br>