奶牛結核病的綜合防治

周靜靚

(上海市崇明區動物疫病預防控制中心,上海202150)

奶牛結核病的綜合防治

周靜靚

(上海市崇明區動物疫病預防控制中心,上海202150)

奶牛結核病是由結核分支桿菌引起的人畜共患慢性傳染病。世界動物衛生組織(OIE)將其列為B類動物疫病,規定必須強制報告,我國則將該病列為二類動物疫病。結核病是一種古老的疾病,其發展經歷了上升,平穩,爆發等多個歷程,近年來全球結核病有所回升。

奶牛;結核病;防治

1 奶牛結核病的危害

據世界衛生組織統計資料，1986～1990年間41.5%的發展中國家和25%的發達國家結核病的疫情在上升。牛結核病雖然在許多發達國家已被控制，但在許多發展中國家，它依然威脅著億萬人民的健康，其中包括我國在內。至今，牛結核病所造成的損失大于牛的其他各種疾病所造成損失的總和。世界衛生組織專家委員會第七次會議報告指出：“除非撲滅牛結核病，否則人類結核病的控制是不會成功的”。

結核病己經給我國的養牛業造成了巨大的經濟損失，尤其是對奶牛的危害極其嚴重。患病奶牛的壽命縮短，產奶量顯著降低，母牛常常不能懷孕，使役牛患病后逐漸消瘦，勞動能力減弱，最后被迫淘汰。同時隨著人們對奶食品需求量的日益增加，奶牛結核病與人身健康關系更為密切。國外的一項報告表明：曾在100個患結核病的病人中，發現有26例是從動物感染上本病的，在這26人中，15歲以下的竟占了20例，他們得病都與不慎飲用含結核桿菌的牛奶有關。這將嚴重打擊人類對奶類產品的消費信心，最終直接影響打擊到行業的信心，因此牛結核病已成為影響我國養牛業健康發展，可持續發展的重大障礙。

2 奶牛結核病的流行情況

結核病曾是人類歷史上最猖獗的傳染病之一，直到結核菌發現及抗結核藥物出現后，人類結核病才有所平緩。我國很早就有結核病的記載，其中家畜結核病在我國流行歷史悠久，與人的結核病呈平行關系，特別是進入40年代，由于從國外大量輸入奶牛，有許多結核病牛混入其中，從而使我國家畜結核病的流行更為廣泛。50年代我國出現牛結核病的大爆發，如1955年檢出陽性率達36.4%，以后由于人們長期努力并采取有效措施，使結核陽性率大大下降并控制在較低水平。70年代，隨著奶牛業的不斷發展，奶牛養殖業規模不斷擴大，牛結核病的流行也達到了歷史最高峰，個別地區檢出陽性率高達67.4%。雖然80年代牛結核病的流行有所緩和，但感染率仍然比較高。

3 奶牛結核病的主要診斷技術和研究發展

牛結核病的診斷方法有很多，目前的研究發展及方法主要有以下幾種：

（1）臨床癥狀和病理變化診斷：牛結核病臨床癥狀不典型，感染前期不出現臨床癥狀，而感染后期常出現體弱、厭食、消瘦、呼吸困難、淋巴結腫大和咳嗽等，這些癥狀在其他疾病也可看到，故早期臨床診斷不易獲得準確結果。病理學檢查可以根據特征病變確診，如干酪樣壞死、鈣化、上皮樣細胞、多核巨細胞和吞噬細胞等，但必須在宰殺后進行。

抗酸染色法：病料涂片后進行抗酸染色，顯微鏡檢查抗酸性桿菌，本菌的細胞壁不僅有肽聚糖，還有特殊的糖脂，因為糖脂的影響，致使革蘭氏染色不易著染，但能抵抗30ml/L酸酒精的脫色作用，抗酸染色為紅色，常用齊尼二氏染色法，也可用熒光抗酸染色法。如果組織內有抗酸性微生物，并且具有典型的組織學病變，則可以做出初步診斷。抗酸染色法陽性率比較低，但它作為一種傳統的檢測方法，具有假陽性率低，價格低廉，操作簡便等特點，在牛場中就可進行，所以仍有一定的實用價值。

（2）細菌分離培養法：用選擇性培養基分離分支桿菌，再通過培養和生化試驗來鑒定，也可采用核酸探針和聚合酶鏈式反應法。如果因培養物污染或其他特殊原因，可通過豚鼠接種，再分離鑒定來證實。常用的培養基是羅杰二氏培養基、改良羅杰二氏培養基、丙酮酸培養基和小川培養基。但是，在上述培養基中，結核菌需14～15h分裂一次，這使得病原學檢查所需周期長，一般需10～30d才能看到菌落，陽性率不高，所以在實際工作中很少被采用。

（3）PCR：PCR技術自1983年發明以來，顯示出了靈敏度高、特異性強、快速等特點，已經被廣泛地用于檢測疑似結核病病人的臨床樣品（主要是痰液），近年來在檢測牛結核病方面也有應用。Ritelli M等報道，將人的一個巨噬細胞系用來從臨床樣品中分離擴增分支桿菌，收集培養后的細胞，再通過半套式PCR檢測培養物中牛分支桿菌的特異性插入序列IS6110，可以確定有沒有牛分支桿菌感染。劉思國等根據已經發表的牛分支桿菌的pncA基因序列，設計引物可擴增294 bp目的片段，建立了特異性檢測牛分支桿菌的PCR方法，該方法特異性強，敏感度可達到50 pg，陽性樣品符合率為90%，陰性樣品符合率為100%，而且有利于結果的判定和臨床樣品的直接檢測。但是，商品化試劑盒和各科研部門研制的方法檢測結果差異較大。含有少量細菌的樣品降低了檢測結果的可靠性。由于去除污染的方法、DNA提取步驟、去除酶抑制劑技術、內部和外部控制以及交叉污染的防止措施等差異使得結果千差萬別。該方法還需要標準化和更加嚴格的操作步驟，以克服實驗過程中容易出現的假陽性或假陰性問題。

（4）遲發性變態反應試驗：目前臨床上應用最廣泛的是遲發性變態反應試驗，即結核菌素試驗，它是測定牛結核病的標準方法，也是國際貿易的指定方法。對牛皮內注射結核菌素，并在72h后測量注射部位腫脹程度。美國就是采用撲殺結核菌素試驗陽性牛而消滅了牛結核病。它的技術要求不高，但是工作量大，檢出時間長，操作麻煩，許多因素都可以降低該方法的敏感性和特異性。由于提純結核菌素（PPD）皮膚試驗個體差異較大，注射劑量和PPD批號對牛個體反應均有差異，會呈現不同的皮膚反應，其結果以皮膚厚度的增加數為準，易造成人為誤差。結核菌素試驗陽性僅能表明在過去某一時間曾經發生過的一次結核菌感染，它無法證明目前的結核菌感染是否為活動的，或僅為在機體的某處有活的結核菌存在。當動物發生某些細菌或病毒的感染時，或者使用某些藥物治療及一些不明原因，也可能造成假陽性或假陰性結果。部分研究者還發現，該法存在著極強的非特異性，即在相當數量的結核菌素試驗陽性牛中，既找不出特征病變，又不能分離出結核菌，或僅僅分離出非典型的分支桿菌，重復檢疫時陽性率下降，而且妊娠母牛檢出率低，給基層的撲殺工作帶來困難，因此在實際工作中用于診斷牛結核病并不十分理想。

牛結核病的診斷方法雖然有很多，但無論哪種檢測方法都有其優點和缺點，如與細胞免疫相應的淋巴細胞增生試驗和γ-干擾素試驗或者因為操作繁瑣，或者因為成本高，所用試劑含有放射性物質，難以在牛結核病的常規檢測中運用；分子生物學檢測技術需要貴重的儀器設備，技術復雜，對實驗室和操作人員的要求較高等原因，使其在常規牛結核病普查中難以運用；目前作為法定檢疫方法，結核菌素試驗仍然是普查檢疫中運用的方法。

4 奶牛結核病的防治

雖然我們對于奶牛結核病在理論上已有相當的研究，知道了其危害以及一些檢測的方法，但是卻還是缺乏一種快速精確確診的手段以及有效控制其的一些措施，導致其不能得到有效控制，并且由于各種因素的存在，近年來，其發展趨勢更是不容樂觀，特別是隨著人民生活水平的提升，奶產品消費量迅速上升，市場巨大，養牛業迅猛發展，飼養奶牛的積極性也空前高漲，規模不斷擴大，但相應的防控疫病能力卻停滯不前，導致各類惡性疾病時有發生，而病牛又由于各種利害關系又不能做到嚴格控制，甚至出現出售病牛情況，導致傳染源人為轉移，更是讓結核病防控難上加難。

另一方面讓人擔心的是隨著全國大市場、大流通的進一步形成，各地失去了有效防控疾病的地域屏障優勢，加上奶牛交易頻繁，轉運奶牛手續不齊全情況時有發生，甚至結核病病牛也發生大范圍流動，直接導致了各地發生結核病疫情的潛在風險越來越大，所以加強奶牛結核病的監測檢疫工作，嚴格撲殺病牛是當前緊迫的一項工作，對防止結核病的發生，擴散和傳播，對促進奶牛業的持續穩定健康發展和確保人民群眾身體健康具有十分重要和深遠的意義，且迫在眉睫。 因此，農業部規定，奶牛結核病防治必須堅持”預防為主”的方針，采取”監測、檢疫、撲殺、消毒”相結合的綜合性防治措施，每年定期開展奶牛結核病監測，從而達到加強對奶牛結核病的防治，有效控制該病疫情，保障畜牧業發展和人民身體健康，各地也更應該制定適合本地區更為嚴格的措施，防止結核病的發生，杜絕一切可能引起結核病的因素，保證轄區的牛群干凈健康。

[1] 楊廣.奶牛結核病的防治[J].草業與畜牧，2012，（8）：52-53.