蛹蟲草的規(guī)范化栽培技術(shù)

肖淑媛+胡長生

摘 要：蛹蟲草又稱蛹草、北蟲草、北冬蟲夏草等，在真菌分類中與冬蟲夏草隸屬于子囊菌亞門、核菌綱、麥角菌目、麥角菌科、蟲草屬，是一種蟲或蛹與菌的結(jié)合體。蛹蟲草與冬蟲夏草一樣，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。由于天然蟲草資源的不夠，為了保護(hù)生態(tài)環(huán)境，許多學(xué)者進(jìn)行了人工培栽培蟲草的試驗(yàn)研究。其中，尤以蛹蟲草的研究和應(yīng)用最多。本文從品種的選擇、栽培與管理等方面，介紹蛹蟲草的規(guī)范化栽培技術(shù)。

關(guān)鍵詞：蛹蟲草；規(guī)范化；栽培技術(shù)

蟲草通常有兩種含義，一種含義是指：蟲草屬中最為著名的冬蟲夏草；另一種含義是指：蟲草是指蟲草屬中所有的真菌，如冬蟲夏草、蛹蟲草、古尼蟲草、蟬花蟲草等。

蟲草屬菌類，是真菌在冬天寄生在昆蟲的幼蟲、蛹、成蟲體內(nèi)，在蟲體內(nèi)生長繁殖，讓蟲體成為充滿菌絲的僵蟲，次年環(huán)境適宜時(shí)蟲體長出有柄的頭狀或棒狀子座，是蟲與草的復(fù)合體。

蟲草種類較多，據(jù)報(bào)道全世界大約有400多種。在蟲草屬中蛹蟲草是這個(gè)屬中專化性不強(qiáng)的種，能廣泛侵染鱗翅目、鞘翅目等2000多種昆蟲的幼蟲、蛹、成蟲，以蛹較為常見。同時(shí)，也可以在人工培養(yǎng)基上生長，如大米培養(yǎng)基。因此，蛹蟲草的人工栽培既可以用大米培養(yǎng)基進(jìn)行，其產(chǎn)品為蛹蟲草的子座；也可用柞蠶、桑蠶的蛹和馬尾松毛蟲的成蟲和幼蟲等進(jìn)行，能獲得包括寄主在內(nèi)的蛹蟲草子實(shí)體（下次介紹）。

蛹蟲草原為野生，主要產(chǎn)于高海拔地區(qū)及樹木叢生的深山老林，產(chǎn)量少，遠(yuǎn)不能滿足人們的消費(fèi)需求。我國于1986年開始人工栽培，以大米培養(yǎng)基為主的栽培技術(shù)，已在全國許多地方試驗(yàn)成功，這為蛹蟲草的規(guī)范化生產(chǎn)奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。筆者擬就介紹多年來從事蛹蟲草栽培的一些經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)，以同各界朋友交流，共同提高蛹蟲草的規(guī)范化栽培技術(shù)及產(chǎn)品品質(zhì)。

一、菌種選育與復(fù)壯

人們在蛹蟲草栽培中遇到的難題，是蛹蟲草菌種的退化顯著，優(yōu)良性狀不能穩(wěn)定遺傳。筆者選育的一個(gè)較好菌株，使用得好的話，可保持一到兩年優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)；否則，使用半年左右，甚至是轉(zhuǎn)種幾代后菌種就嚴(yán)重退化，其特征為不長子實(shí)體或只長出極少量子實(shí)體，而且質(zhì)量極差。因此，掌握成熟的菌種選育與復(fù)壯技術(shù)，是實(shí)現(xiàn)蛹蟲草規(guī)范化栽培的前提條件。

1.菌種選育

一般采用組織分離法進(jìn)行菌種選育，此法具有操作方便，菌絲萌發(fā)快，能保持原菌種的優(yōu)良種性等特點(diǎn)。

（1）選優(yōu)良菌株。從野外或者室內(nèi)選生長健壯、大小適中、無病蟲害八成熟的、第一批優(yōu)良蛹蟲草菌株。

（2）消毒。將鮮蛹蟲草用清水洗去外表泥土，用75%酒精浸泡3～5秒鐘，無菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞水溶液消毒l～3分鐘，用無菌水沖洗3～5次，洗凈后進(jìn)行分離。從室內(nèi)選的菌株僅需酒精消毒，無菌水沖洗即可。

（3）分離。縱剖有龜背狀花紋的蛹蟲草頂端組織子實(shí)體，用尖頭鑷子取內(nèi)部白色組織塊，取綠豆粒大的組織接種到已消毒的斜面培養(yǎng)基中部。

（4）培養(yǎng)。把已接種的斜面培養(yǎng)基放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)室殺菌消毒，避光，保持培養(yǎng)室的溫度25℃左右，空氣濕度60%左，經(jīng)常檢查，把污染的去除，培養(yǎng)5～10天，菌種已培養(yǎng)好，挑選性狀優(yōu)良的菌種作為母種。

（5）優(yōu)良菌種標(biāo)準(zhǔn)。白色菌絲粗壯濃密，且緊貼培養(yǎng)基匍匐狀生長，邊緣整齊，氣生絨毛狀菌絲少，見光后菌絲變?yōu)殚冱S色。

2.菌種提純

（1）消毒。將優(yōu)良母種和已消毒的斜面培養(yǎng)基試管放入超凈工作臺(tái)內(nèi)。先用肥皂洗凈雙手，再用75%酒精棉球擦手和菌種管表面，在酒精燈火焰上灼燒消毒。

（2）轉(zhuǎn)管。轉(zhuǎn)管時(shí)兩手從接種孔伸入超凈工作臺(tái)內(nèi)，75%酒精棉球擦拭接種環(huán)。左手持菌種管和斜面管，兩支試管口對齊于火焰上方。右手持接種環(huán)，并將其在酒精燈火焰上干熱滅菌，用小指及無名指拔掉棉塞，使棉塞底部朝外。接種環(huán)冷卻后伸入菌種管內(nèi)取黃豆粒大并帶有薄薄培養(yǎng)基的菌絲塊，迅速移入斜面培養(yǎng)基的中部，菌絲朝上。然后，將棉塞在火焰上燒一下，立即塞入試管口，旋緊棉塞。

接種環(huán)不要觸碰管口及管壁，以防感染。適溫培養(yǎng)5～10天左右即可。

3.出草實(shí)驗(yàn)

將提純菌種，在無菌條件下接種到培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室培養(yǎng)。在溫度為18～22℃，濕度適宜的條件下培養(yǎng)20～30天，即可形成橙紅色子實(shí)體。經(jīng)鑒定，選優(yōu)良菌種進(jìn)行生產(chǎn)。

4.菌種復(fù)壯

菌種繁殖應(yīng)無性繁殖與有性繁殖交替進(jìn)行，否則菌種性狀易退化，其表現(xiàn)為出草不整齊、畸形，甚至不出草。因此，在生產(chǎn)過程中應(yīng)及時(shí)對菌種進(jìn)行有性繁殖來提純復(fù)壯。

（1）消毒。選取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、早熟的蛹蟲草子實(shí)體消毒。

（2）接種。將消毒的子實(shí)體懸掛于裝有PDA培養(yǎng)基的無菌三角瓶內(nèi)。

（3）培養(yǎng)。接種的三角瓶在25℃左右條件下，在無菌室靜置培養(yǎng)一天，當(dāng)三角瓶的培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量蛹蟲草的白色菌絲時(shí)，在超凈工作臺(tái)上挑取單個(gè)或多個(gè)菌絲，用接種環(huán)接種到試管斜面培養(yǎng)基中部進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)蛹蟲草菌絲布滿斜面后再提純。獲得的母種經(jīng)出草試驗(yàn)后，選擇優(yōu)質(zhì)蛹蟲草子實(shí)體再進(jìn)行組織分離法培養(yǎng)，獲取的母種可以擴(kuò)繁栽培種。

二、培養(yǎng)基的制作與滅菌

1.液體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基常見的有采用搖床來生產(chǎn)的搖瓶培養(yǎng)法和采用發(fā)酵罐來生產(chǎn)的深層培養(yǎng)法。現(xiàn)介紹搖瓶培養(yǎng)法。

（1）液體培養(yǎng)基的配制與滅菌

①配方。磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，檸檬酸銨1g，葡萄糖30g，蛋白棟3g，維生素B150mg，馬鈴薯營養(yǎng)液200ml定容至1000ml。

②搖瓶振蕩培養(yǎng)。把配好的液體培養(yǎng)基裝入錐形瓶中，每瓶裝150毫升，瓶口用棉塞、牛皮紙密封。

③滅菌。高壓滅菌，把已經(jīng)裝好營養(yǎng)液體的三角瓶放在高壓滅菌鍋內(nèi)，當(dāng)壓力表讀數(shù)為0.1～0.15MPa時(shí)，即121℃，滅菌15～30min。

④接種。滅菌后的三角瓶在無菌條件下接入2～4塊約1cm2的斜面菌種，于23℃～25℃下靜置培養(yǎng)24h。

⑤培養(yǎng)。菌絲萌發(fā)時(shí)放置在搖床上振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為每分鐘80～130次。搖床的溫度控制在23℃～25℃，培養(yǎng)時(shí)間因菌類不同而異，一般是5天左右。將振蕩好的培養(yǎng)基倒入大容器里，經(jīng)過擴(kuò)容后，在無菌條件下安裝通氣管，用輸氧機(jī)通入適量氧氣后培養(yǎng)48小時(shí)即可。若沒有輸氧機(jī)，振蕩培養(yǎng)一周左右也可。

⑥培養(yǎng)結(jié)束的標(biāo)準(zhǔn)。營養(yǎng)液清澈透明，其中懸浮著大量小菌絲球，并伴有菌類特有的香味。

2.大米培養(yǎng)基

（1）大米培養(yǎng)基的制作。據(jù)試驗(yàn)，蛹蟲草的培養(yǎng)基，其配方為大米加營養(yǎng)液，以350ml玻璃廣口瓶作為培養(yǎng)瓶，按培養(yǎng)基配方，先稱大米，要求大米新鮮、無霉變、無污染，最好是雜交米，在天平上稱30克大米，倒入培養(yǎng)瓶中，加入35ml左右液體培養(yǎng)基，大米與營養(yǎng)液的比例要適當(dāng)，不能太干或太濕，適宜的含水量為60%左右。瓶口用透氣的封口膜封好，外用牛皮紙包好。

（2）大米培養(yǎng)基的滅菌。高壓滅菌，當(dāng)壓力表讀數(shù)為0.1～0.15MPa時(shí)，即121℃，保持1～1.5小時(shí)；常壓滅菌8～10小時(shí)，常壓滅菌時(shí)必須在3小時(shí)以內(nèi)灶內(nèi)溫度達(dá)到100℃，否則培養(yǎng)基容易酸化變質(zhì)，影響產(chǎn)量。

三、接種和培養(yǎng)

1.接種

培養(yǎng)基冷卻到30℃以下時(shí)，在無菌條件下接種。在超凈工作臺(tái)上，將液體菌種接種到培養(yǎng)基上，方法是左手拿培養(yǎng)基，瓶口對酒精燈火焰，右手拿菌種瓶往培養(yǎng)瓶內(nèi)注射菌種。若大批量生產(chǎn)可以采用專用接種槍，每瓶注射菌種5～10ml，接種完后培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)室的培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)

接種后將栽培瓶置清潔避光處培養(yǎng)。發(fā)菌初期，為減少雜菌污染，保持室溫15～18℃，待料面布滿菌絲后，將溫度調(diào)到20～23℃，空氣相對濕度65%左右，空氣新鮮。經(jīng)15天左右培養(yǎng)，菌絲長滿料瓶，完成營養(yǎng)生長。

四、出草管理

蛹蟲草的出草對環(huán)境條件要求較嚴(yán)，環(huán)境因子控制得好，出草快，質(zhì)量好，否則出草慢，甚至不出草。

1.控制好溫度

蛹蟲草是變溫結(jié)實(shí)性菌類，對變溫菌類而言，溫度是所有環(huán)境因素中最重要的因素。蛹蟲草出草的溫度為10～25℃，適宜溫度為18～22℃。出草如遇低溫會(huì)產(chǎn)生畸形，影響產(chǎn)量和質(zhì)量，溫度在23℃以上時(shí)生長不良。人工培育過程中應(yīng)保持恒溫管理，只有在原基分化時(shí)期才適宜給較大晝夜溫差刺激，溫差保持在8～10℃左右。

2.適宜的濕度

濕度也是蟲草生長的重要因素之一，它包括培養(yǎng)基濕度和空氣相對濕度，培養(yǎng)基濕度為60%左右。采收第一批子實(shí)體后，培養(yǎng)基含水量下降至45%～50%，在轉(zhuǎn)潮期補(bǔ)足水分，通常用營養(yǎng)液進(jìn)行補(bǔ)水。子實(shí)體生長期間，特別是在中后期，要求空氣相對濕度達(dá)到90%～95%，這樣可以延遲蛹蟲草的衰老，提高產(chǎn)量。一般出草到成熟需向瓶中注水3～4次。

3.通風(fēng)良好

菌絲生長和子實(shí)體的發(fā)育均需保持良好的通風(fēng)條件，當(dāng)瓶子發(fā)滿菌后，應(yīng)立即進(jìn)行通風(fēng)，方法是用竹簽在封口膜上刺幾個(gè)圓孔通風(fēng)，直到蟲草成熟，同時(shí)每天開窗通風(fēng)兩次，每次30分鐘。

4.光照適宜

光照是蛹蟲草栽培的又一個(gè)重要因素。菌絲長滿瓶后開始見光，但避免太陽光直射。原基形成和子實(shí)體生長發(fā)育需要較充足的散射光，光照強(qiáng)度保持在100～200勒克斯以上。原基形成時(shí)，要求較強(qiáng)的散射光刺激，且每天要求光照時(shí)數(shù)在10小時(shí)以上。但須防止晝夜連續(xù)光照，否則子實(shí)體將難以分化。室內(nèi)栽培用日光燈補(bǔ)充光源，燈管距栽培瓶30～50cm。蛹蟲草有較強(qiáng)的趨光性，在子實(shí)體形成后，應(yīng)經(jīng)常調(diào)整光源的方向，以保證子實(shí)體直立生長，形成優(yōu)質(zhì)的棒狀的子座。當(dāng)子實(shí)體5～8cm時(shí)即停止生長，子實(shí)體成熟。

五、及時(shí)采收

當(dāng)子實(shí)體成熟，頭部出現(xiàn)龜裂狀花紋，表面出現(xiàn)黃色粉末狀物，及時(shí)采收。如采收過遲，則子實(shí)體枯萎或倒苗腐爛。采收時(shí)，用無菌手術(shù)鑷子將子實(shí)體從培養(yǎng)基上摘下即可。采收后，停水3～4天后在瓶內(nèi)注入營養(yǎng)液，包扎好瓶口，繼續(xù)培養(yǎng)，10～20天左右，又可長出第二批。采后子實(shí)體要及時(shí)烘干，烘干的產(chǎn)品要存放到密閉的塑料薄膜袋內(nèi)。

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