MMP—9、TNF—α、NT—proBNP在川崎病患兒血漿中的變化及臨床意義

[摘要] 目的 探討基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、N末端腦利鈉肽（NT-proBNP）在川崎病（KD）患兒中的臨床意義。方法 方便選取該院2014年3月—2016年10月住院的KD患兒58例，根據心臟超聲心動圖檢查結果分為冠狀動脈損傷（CAL）組26例和無冠狀動脈損傷（NCAL）組32例，另選取同期年齡相仿的門診健康體檢兒童25例作為對照組，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）和電化學發光免疫分析法（CLIA）分別測定各組兒童MMP-9、TNF-α和NT-proBNP水平。 結果 KD患兒治療前血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP水平與對照組比較，差異有統計學意義（t=20.73、9.34、16.61，P<0.05），且CAL組顯著高于NCAL組，差異有統計學意義（t=5.25、3.45、5.57，P<0.01）。KD患兒治療后MMP-9、TNF-α、NT-proBNP水平較治療前顯著降低，差異有統計學意義（t=75.29、16.06、40.33，P <0.05）。KD組治療前TNF-α與MMP-9、NT-proBNP水平均成正相關關系（P<0.01），而MMP-9與NT-proBNP水平也成正相關性關系（P<0.01）。 結論 血漿MMP-9、TNF-α和NT-proBNP與KD患兒心血管損害關系密切，聯合檢測有助于早期診斷KD和預測心血管系統并發癥。

[關鍵詞] 川崎病；基質金屬蛋白酶-9；腫瘤壞死因子-α；N末端腦利鈉肽

[中圖分類號] R725.4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）02（a）-0028-03

[Abstract] Objective To study the clinical significance of MMP-9， TNF-α and NT-proBNP in the plasma of children with Kawasaki disease. Methods Convenient selection 58 cases of KD children in our hospital from March 2014 to October 2016 were selected and divided into the CAL group with 26 cases and NCAL group with 32 cases， and 25 cases of healthy physical examination children at the same period were selected as the control group， and the MMP-9， TNF-α and NT-proBNP levels of children in each group were respectively measured by the ELISA and CLIA. Results The differences in the plasma MMP-9，TNF-α，NT-proBNP levels of KD children before treatment between the two groups had statistical significance（t=20.73，9.34，16.61， P<0.05）， and the levels in the CAL group was obviously higher than that in the NCAL group， and the differences had statistical significance（t=5.25，3.45，5.57， P<0.01）， and after treatment， the levels obviously decreased compared with those before treatment， and the differences had statistical significance（t=75.29，16.06，40.33，P <0.05）， and the TNF-αlevel was positively correlated with the MMP-9 and NT-proBNP levels before treatment in the KD group（P<0.01）， and the MMP-9 was positively correlated with the NT-proBNP level（P<0.01）. Conclusion The correlation between the plasma MMP-9， TNF-αand NT-proBNP and cardiovascular damage in KD children is close， and the combined test contributes to the early diagnosis of KD and preventing the complications of the cardiovascular system.

[Key words] Kawasaki disease； MMP-9； TNF-α； NT-proBNP

川崎病（KD）是嬰幼兒時期常見的以全身血管炎為主要病變的急性發熱、出疹、自限性疾病。自1976年日本川崎富作醫生首次報道，其發病率呈現出兩種不同的趨勢，在日本、韓國、臺灣等遠東地區逐年增高，而在北美洲、澳大利亞、歐洲等則趨于平穩[1]，現已成為我國兒科住院的常見病之一。心血管并發癥包括冠狀動脈擴張及冠狀動脈瘤、心功能減低、二尖瓣反流、體動脈病變等是KD最常見的并發癥。其中冠狀動脈并發癥是KD患兒最嚴重的并發癥，可引起心肌缺血、梗死甚至猝死，預防和診治是目前兒科醫師關注的重點[2]。該研究通過對該院2014年3月—2016年10月診斷明確的58例KD患兒血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP的檢測，探討其水平變化及在冠狀動脈損傷中的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院兒科住院的KD患兒58例，均符合王衛平主編[3]第8版兒科學KD的診斷標準 ，并排除已于院外丙種球蛋白治療、合并先天性心臟病、免疫性疾病等。其中男34例，女24例；發病年齡8個月～6歲，平均（2.5±0.9）歲。根據心臟超聲心動圖結果將KD患兒分為CAL組26例和NCAL組32例。另選取同期門診健康體檢兒童25例作為對照組。其中男13例，女12例，年齡6個月～5歲，平均（2.2±0.7）歲。各組年齡、性別差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

KD患兒分別于治療前及治療后采集外周靜脈血2 mL送該院實驗室采用羅氏電化學發光免疫分析儀測定血漿NT-proBNP水平，另采集外周靜脈血2 mL，EDTA抗凝，立即離心取血漿保存于-80℃冰箱待統一測定MMP-9、TNF-α水平。KD患兒入院時均行心臟超聲心動圖檢查，確診后給予大劑量丙種球蛋白及阿司匹林治療。正常對照組只采血1次，標本處理方法同上。采用ELISA法檢測血漿MMP-9、TNF-α的含量。人MMP-9試劑盒購自美國R&D公司，人TNF-α試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司，嚴格按照試劑說明書的步驟進行操作。

1.3 統計方法

采用SPSS 17.0學統計軟件進行數據處理。計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組比較用兩獨立樣本t檢驗或配對樣本t檢驗，相關分析采用Pearson相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP蛋白水平的比較

治療前病例組血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP水平均顯著高于對照組，差異均有統計學意義（t=20.73、9.34 、16.61，P<0.05），且與治療后相比差異有統計學意義（t=75.29、16.06、40.33，P <0.05）。見表1。

2.2 CAL組、NCAL組治療前血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP蛋白水平的比較

KD患兒治療前CAL組血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP的水平與NCAL組比較，差異有統計學意義（t=5.25、3.45、5.57，P<0.01）。見表2。

2.3 KD患兒血漿MMP-9、TNF-α、NT-proBNP相關性分析

KD組治療前TNF-α與MMP-9、NT-proBNP水平均成正相關關系（r=0.61、0.72，P<0.01），而MMP-9與NT-proBNP水平也成正相關性關系（r=0.58，P<0.01）。

3 討論

KD現已成為兒童后天獲得性心臟病的最主要原因 ，發病機理仍然不清楚，診斷主要依據臨床特點而缺乏特異性的實驗室指標。在感染等因素的誘發下，遺傳易感性個體的免疫系統高度活化，產生大量的細胞因子，啟動細胞因子的瀑布式反應，導致血管內皮損傷，在KD發病機制中起重要作用。

MMP-9是降解血管外細胞基質的主要酶類，能夠降解膠原酶和彈性蛋白酶，有助于中性粒細胞、單核巨噬細胞細胞等向血管壁深層浸潤，參與多種疾病的病理過程。目前國內外學者認為血管基質的代謝紊亂是KD發病機制的重要原因之一，尤其與CAL的發生。國外學者Sakata[4]發現，KD患兒急性期血清MMP-9水平顯著增高，并在死亡KD患兒冠狀動脈標本中檢測到異常增高的MMP-9。我國學者趙建美等[5-6]研究發現，KD急性期MMP-9在外周血單個核細胞中mRNA表達和血清中MMP-9濃度明顯增高，酶活性亦增強，CAL較NCAL更顯著，且MMP-9/TIMP-1比值與左冠狀動脈內徑/主動脈瓣環內徑比值呈正相關。TNF-α是一種具有廣泛生物學活性的調節因子，可以通過誘導免疫細胞粘附分子的表達、促進炎性因子的釋放等參與KD血管炎的發生，其拮抗劑—英夫利昔單抗在治療大劑量丙種球蛋白無反應型KD起到很好的療效。Lau[7]等認為TNF-α可以上調血管平滑肌細胞內的MMP-9的表達。國內張艷蘭等[8-9]對KD小鼠研究發現，TNF-α/NF-ΚB/MMP-9信號通路可能是KD血管炎及CAL發生的重要通路。NT-proBNP是與BNP水平成正相關關系的一種由心室肌細胞合成分泌的內分泌激素，較BNP有較好的血漿穩定性，更加適合作為心功能受損的重要生物學指標。研究發現[10]，NT-proBNP在KD患兒急性期顯著增高，并且可以早期預測冠狀動脈損害。Qin YJ等[11]對體外培養大鼠心室肌細胞BNP mRNA表達的研究發現，TNF-α能選擇性誘發BNP mRNA表達。該研究結果顯示，TNF-α可能是KD發病的始動因素，通過一定的信號轉導途徑促進MMP-9和NT-proBNP分泌，并與KD冠狀動脈損傷有一定的關系。

綜上所述， MMP-9、TNF-α、NT-proBNP參與KD血管炎及冠狀動脈損害的發生發展，聯合檢測有助于早期診斷KD和預測心血管系統并發癥。

[參考文獻]

[1] Singh S， Sharma D， Bhattad S， et al. Recent Advances in Kawasaki Disease–Proceedings of the 3rd Kawasaki Disease Summit， Chandigarh， 2014[J]. Indian J Pediatr，2016，83（1）：47-52.

[2] Dimitriades VR， Brown AG， Gedalia A. Kawasaki disease： pathophysiology， clinical manifestations and management[J]. Curr Rheumatol Rep， 2014， 16（6）：423-426.

[3] 王衛平，毛萌，李廷玉，等.兒科學[M].8版.北京：人民衛生出版社，2013：192-193.

[4] Sakata K， Hamaoka K， Ozawa S， et al. matrix metalloproteinase-9 in vascular lesions and endothelial regulation in Kawasaki disease[J] .Circ J，2010，74（8）：1670-1675.

[5] 趙建美，倪凱華.MCP-1、MMP-9、TIMP-1在川崎病中的表達及與冠狀動脈病變的關系[J].江蘇醫藥，2014，40（21）：2551-2554.

[6] 胡江.2種不同藥物聯合治療川崎病的臨床療效[J].中國衛生產業， 2011（25）：56.

[7] Lau AC， Duong TT， Ito S， et al. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 activity improves coronary outcome in an animal model of Kawasaki disease[J].Clin Exp immunol，2009， 157（2）：300-309.

[8] 張艷蘭，杜忠東，楊海明，等.川崎病小鼠腫瘤壞死因子α/核因子κB/基質金屬蛋白酶-9通路研究[J].中國循證兒科雜志，2014，9（1）：59-63.

[9] 張昭.丙種球蛋白沖擊治療對小兒川崎病冠膜損傷的療效觀察[J].中國衛生產業，2014（12）：88-89.

[10] Adjagba PM， Desjardins L， Fournier A，et al.N-terminal pro-brain natriuretic peptide in acute Kawasaki disease correlates with coronary artery involvement[J].Cardiol Young，2015，25（7）：1311-1318.

[11] Qin XJ， Zhang XL， Yu YQ， et al. Cardioprotective affect of erythropoietin on sepsis-induced myocardial injury in rat[J].World J Emerg Med，2013，4（3），215-222.

（收稿日期：2016-11-16）

[作者簡介] 杜風華（1969.3-），女，內蒙古通遼人，本科，副主任醫師，研究方向：兒內科。