嬰兒痙攣癥患者血清、腦脊液S-100β和膠質(zhì)纖維酸性蛋白水平觀察及其相關(guān)性分析

祝善堯，葛偉，陳貴海

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院，安徽巢湖238000)

嬰兒痙攣癥患者血清、腦脊液S-100β和膠質(zhì)纖維酸性蛋白水平觀察及其相關(guān)性分析

祝善堯，葛偉，陳貴海

(安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院，安徽巢湖238000)

目的觀察嬰兒痙攣癥患兒血清、腦脊液中星形膠質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)志物S-100β、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的相關(guān)性，并探討其臨床意義。方法選擇嬰兒痙攣癥患者29例為觀察組，同期收治的無中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的呼吸道感染患兒30例為對照組。采用ELISA法檢測觀察組、對照組患兒血清及觀察組患兒腦脊液中S-100β、GFAP水平。結(jié)果觀察組、對照組患兒血清S-100β水平分別為(0.80±0.16)、(0.37±0.07)μg/L，GFAP水平分別為(4.12±0.69)、(2.70±0.63)ng/L。觀察組患兒血清S-100β和GFAP水平均高于對照組(P均<0.05)。觀察組患兒腦脊液S-100β水平為(1.08±0.23)μg/L，GFAP水平為(4.85±0.42)ng/L。觀察組患兒血清S-100β水平和腦脊液S-100β水平呈正相關(guān)(r=0.883，P<0.05)，血清GFAP水平和腦脊液GFAP水平呈正相關(guān)(r=0.916，P<0.05)。結(jié)論嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β、GFAP水平升高，且與腦脊液S-100β、GFAP水平呈正相關(guān)。檢測嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β、GFAP水平有助于判斷患兒腦脊液S-100β、GFAP水平，進(jìn)而估計患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度。

S-100β蛋白；膠質(zhì)纖維酸性蛋白;癲癇；嬰兒痙攣癥；星形膠質(zhì)細(xì)胞

嬰兒痙攣癥是小兒癲癇的一個特殊類型，是一種嚴(yán)重的肌陣攣發(fā)作，預(yù)后不良，表現(xiàn)為全身性肌陣攣性抽搐，上肢伸直、屈曲內(nèi)收、頭和軀體前屈[1]。因為發(fā)作時神經(jīng)異常放電劇烈，且往往反復(fù)發(fā)作甚至連續(xù)發(fā)作，神經(jīng)損傷嚴(yán)重，有可能導(dǎo)致患兒智力發(fā)育遲緩、運(yùn)動發(fā)育遲滯[2,3]。S-100β和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)均為星形膠質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)志物[4]。文獻(xiàn)報道，癲癇患兒腦脊液S-100β、GFAP水平升高，反映患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度[5]。但是臨床上檢測腦脊液S-100β、GFAP水平需要進(jìn)行腰穿，有損傷且患兒家長難以接受。血清S-100β、GFAP水平檢測無創(chuàng)、方便且患兒家長容易接受。本研究觀察了嬰兒痙攣癥患兒血清、腦脊液S-100β和GFAP水平變化，并分析患兒血清S-100β、GFAP水平與腦脊液S-100β、GFAP水平的相關(guān)性，探討用血清S-100β、GFAP水平檢測間接觀察腦脊液S-100β、GFAP水平的可能性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2017年3月收治的嬰兒痙攣癥患兒29例位觀察組，其中男15例，女14例，年齡(4.7±2.3)歲。均符合國際抗癲癇聯(lián)盟制定的癲癇診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)[3]。發(fā)作次數(shù)均不少于3次。排除：①近期腦外傷和神經(jīng)系統(tǒng)感染者；②有腦梗死、外傷史者；③患有免疫系統(tǒng)疾病或正在接受免疫抑制劑治療者。另選同期收治的上呼吸道感染患兒30例為對照組，其中男17例，女13例，年齡(5.1±3.1)歲，均排除中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。兩組患兒性別、年齡相比，P均>0.05。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理審查委員會批準(zhǔn)，患兒家長均已簽署知情同意書。

1.2 血清、腦脊液S-100β、GFAP檢測方法 觀察組、對照組患兒于入院后24 h內(nèi)抽取靜脈血2 mL，室溫靜置30 min后置于離心機(jī)中，3 000 r/min離心20 min，吸取上層血清，置于-80 ℃環(huán)境待測。另外觀察組患兒入院后24 h行腰穿抽取腦脊液2 mL，保存于-80℃環(huán)境待測。血清、腦脊液中S-100β、GFAP檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，試劑盒購自北京天根生化科技有限公司，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清S-100β和GFAP水平比較 觀察組、對照組患兒血清S-100β水平分別為(0.80±0.16)、(0.37±0.07)μg/L，GFAP水平分別為(4.12±0.69)、(2.70±0.63)ng/L。觀察組患兒血清S-100β和GFAP水平均高于對照組(P均<0.05)。

2.2 觀察組患兒血清、腦脊液S-100β和GFAP水平的相關(guān)性 觀察組患兒腦脊液S-100β水平為(1.08±0.23)μg/L，GFAP水平為(4.85±0.42)ng/L。直線相關(guān)分析結(jié)果顯示，觀察組患兒血清S-100β水平和腦脊液S-100β水平呈正相關(guān)(r=0.883，P<0.05)，血清GFAP水平和腦脊液GFAP水平呈正相關(guān)(r=0.916，P<0.05)。

3 討論

癲癇是兒童神經(jīng)系統(tǒng)的常見疾病，嬰兒痙攣癥是其中一個類型，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可造成神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷，最終影響腦功能[6]。癲癇發(fā)作后的基本病理變化為神經(jīng)元選擇性喪失、神經(jīng)元樹突棘脫失和膠質(zhì)細(xì)胞增生形成瘢痕。有學(xué)者將上述病理改變引起的腦損傷分為三個階段，微空泡形成、缺血性神經(jīng)元損傷和細(xì)胞溶解。研究顯示當(dāng)神經(jīng)元處于微空泡形成階段時，如果采取方法終止發(fā)作，此時的神經(jīng)元損傷是可以逆轉(zhuǎn)的[7]。因此，找到一種安全、可靠的生化指標(biāo)用來估計腦損傷程度，在此基礎(chǔ)上給予合理的治療，能夠最大程度減少腦損傷，改善患者預(yù)后。

GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，屬細(xì)胞骨骼蛋白，分子量為50～52 kD，僅在星形膠質(zhì)細(xì)胞中高度表達(dá)，是維持其形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要蛋白[8]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)GFAP表達(dá)增強(qiáng)，能夠促進(jìn)周圍星形膠質(zhì)細(xì)胞有絲分裂，促使原始祖細(xì)胞分化為成熟細(xì)胞，并促進(jìn)纖維蛋白合成[9]。組織病理學(xué)研究顯示腦挫傷12 h內(nèi)，星形膠質(zhì)細(xì)胞變得肥大并開始增生，但是GFAP陽性細(xì)胞數(shù)量減少，隨后逐漸增多，7 d后星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯變化，邊界不清，GFAP陽性細(xì)胞大量增加[10]。嬰兒痙攣癥患兒腦脊液中GFAP水平高于中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能正常的兒童，可能是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)GFAP表達(dá)增強(qiáng)的結(jié)果。本研究結(jié)果顯示嬰兒痙攣癥患兒血清GFAP水平高于無中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的呼吸道感染患兒，說明嬰兒痙攣癥患兒血清GFAP水平的變化與腦脊液GFAP水平的變化是一致的。

S-100蛋白最早發(fā)現(xiàn)與牛腦組織中，是一類具有高生物學(xué)活性鈣結(jié)合蛋白[11]。S-100蛋白有兩種亞基，S-100α主要表達(dá)在紋狀肌、心臟和腎臟中，S-100β表達(dá)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，由星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞合成和分泌，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、能量代謝的作用，并參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[12]。當(dāng)膠質(zhì)細(xì)胞受到損傷時，S-100β會從細(xì)胞內(nèi)進(jìn)入腦脊液或者血液。細(xì)胞外S-100β發(fā)揮的作用取決于濃度。低濃度時可以營養(yǎng)神經(jīng)。正常情況下膠質(zhì)細(xì)胞會分泌少量S-100β，修復(fù)損傷促進(jìn)生長[13]。大量的S-100β具有細(xì)胞毒性，能夠誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡。大量研究表明腦組織損傷時，S-100β顯著增加且與損傷程度和范圍密切相關(guān)[14]。嬰兒痙攣癥患兒腦脊液中S-100β水平明顯高于中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能正常的兒童，是患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β水平高于無中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的呼吸道感染患兒，說明嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β水平的變化與腦脊液GFAP水平的變化是一致的。

為進(jìn)一步明確嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β、GFAP水平與腦脊液S-100β、GFAP水平的相關(guān)性，本研究對觀察組嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β水平和腦脊液S-100β水平、血清GFAP水平和腦脊液GFAP水平的相關(guān)性進(jìn)行了直線相關(guān)分析，結(jié)果顯示，觀察組患兒血清S-100β水平和腦脊液S-100β水平呈正相關(guān)(r=0.883，P<0.05)，血清GFAP水平和腦脊液GFAP水平呈正相關(guān)(r=0.916，P<0.05)。提示嬰兒痙攣癥患兒血清S-100β水平和腦脊液S-100β水平、血清GFAP水平和腦脊液GFAP水平存在很顯著的正相關(guān)關(guān)系。臨床中可不必抽取腦脊液，通過檢查靜脈血清S-100β、GFAP水平即能夠判斷嬰兒痙攣癥患者腦損傷的嚴(yán)重程度。因為腰穿具有損傷性，一些家長難以接受，本研究結(jié)果具有重要的現(xiàn)實意義，可以提高家長依從性，早期評估患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度，并給與適當(dāng)干預(yù)，改善患兒預(yù)后[15,16]。

[1] 劉硯韜,張伶俐,黃亮,等.新型抗癲癇藥物治療兒童癲癇的研究進(jìn)展[J].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版),2014,10(1):99-104.

[2] 周永,劉民,梁萬年,等.癲癇流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].中華流行病學(xué)雜志,2007,28(1):92-94.

[3] 王文志,吳建中,王德生等.中國五省農(nóng)村人群癲癇流行病學(xué)抽樣調(diào)查[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2002,82(7):449-452.

[4] 單嶠,李培棟,劉泉,等.早發(fā)性和晚發(fā)性兒童良性枕葉癲癇的臨床特點(diǎn)、腦電圖改變、治療及預(yù)后比較分析[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2013,12(7):696-699.

[5] 高靜云,王穎慧,楊莉,等.中國新診斷癲癇兒童首選丙戊酸鈉或左乙拉西坦治療方案的成本效果分析[J].中華實用兒科臨床雜志,2013,28(1):42-47.

[6] 袁莉,陳麗麗,闞鳳杰,等.癲癇兒童外周血炎性細(xì)胞因子和C反應(yīng)蛋白水平的臨床觀察[J].中國實驗診斷學(xué),2013,17(9):1668-1671.

[7] 王偉秀,陳霞,李榮品,等.癲癇患兒海馬急性損傷的MRI表現(xiàn)[J].中國醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志,2015,23(8):573-577.

[8] 盧萬可,高然.丙戊酸鈉對癲癇大鼠腦損傷時GFAP表達(dá)的影響[J].中國臨床新醫(yī)學(xué),2016,9(6):472-475.

[9] 陳秀,吳萬福,胡長林,等.成年大鼠缺氧性腦損傷后亞臨床發(fā)作及膠質(zhì)原纖維酸性蛋白的表達(dá)[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2007,32(12):1256-1259,1319.

[10] 林衛(wèi)紅,張淑琴,孟紅梅,等.星形膠質(zhì)細(xì)胞在實驗性癲癇中的作用及意義探討[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2004,21(4):317-319.

[11] 趙娟,潭延國.中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患與S-100β蛋白的關(guān)系[J].中國臨床康復(fù),2006,10(18):141-144.

[12] 董競梅,郝艷秋.全身發(fā)作性癲癇患兒血漿中CK-BB和S-100β蛋白含量的變化及意義[J].中國實驗診斷學(xué),2009,13(1):118.

[13] 周超寧.S-100β蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2011,17(21):3219-3222.

[14] 陳萍,李自如,馬翔凌,等.血清NSE和S-100β蛋白在癲癇急性發(fā)作患者中的變化及臨床價值[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,2009,41(7):788-789.

[15] 蔡娜莉,付亞林.NSE和S-100蛋白的檢測在判斷新生兒腦損傷預(yù)后中的臨床應(yīng)用價值[J].中國婦幼保健,2012,27(22):3512-3514.

[16] 甘靖,屈藝,羅蓉,等.嬰兒痙攣癥治療進(jìn)展[J].中華實用兒科臨床雜志,2014,29(24):1889-1892.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.35.024

R748

B

1002-266X(2017)35-0072-03

2017-06-25)

安徽省衛(wèi)計委科技攻關(guān)計劃項目(08010302123)。

陳貴海(E-mail：chenguihai_1964@medpap360.net)