降血脂藥的前處理及檢測技術研究進展

王佳 凌云 王玉嬌 張峰

隨著生活水平的提高，高血脂癥患者日益增多，降血脂藥的使用愈加廣泛。降血脂類藥物是一類能降低血漿甘油三酯或降低血漿膽固醇的藥物，降血脂藥種類多，分類也較困難，主要有膽酸螯合劑、煙酸類、貝特類以及他汀類。其中貝特類和他汀類為此類藥物應用較多的兩大類。主要是通過選擇性抑制HMG-CoA和降低甘油三脂TG水平來起到降低血脂的作用［1］，但動物體內試驗與人類臨床試驗表明，服用此類藥物后，該類藥物可以較長時間以原藥形式存在于血漿之中，且此類藥物在高溫、光照情況下也不易分解，因此長期過量使用此類藥物，有可能導致藥物在人體內富集，由于此類藥物在降脂的同時，使用不當也可能會影響肝腎功能，可能引發橫紋肌溶解癥等，甚至會有導致腎衰竭的風險［2］，因此降血脂藥的檢測技術及分析方法尤為重要。通過搜集大量文獻，對降血脂藥的前處理和檢測方法進行總結及闡述，擬為進一步研究和開發快速、簡便、高通量方法提供依據。

1 樣品前處理方法

各類基質中的降血脂藥分析中樣品前處理極其重要，其提取、凈化及濃縮的各個步驟均影響著分析檢測的各項指標、成本及效率。因此，選擇更簡便有效的樣品前處理方法已成為發展趨勢。已有的前處理方法有:液—液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、超臨界流體萃取(SFE)、超聲輔助萃取(UE)等［3－11］。

1.1 液—液萃取(LLE)

1.1.1 常規液—液萃取: 也稱為溶劑提取，其基本原理是利用化合物在兩種互不相溶(或微溶)的溶劑中溶解度或分配系數的不同，使化合物從一種溶劑內轉移到另外一種溶劑中。經過反復多次萃取，將絕大部分的化合物提取出來。常用的有機溶劑有甲醇、乙腈、乙酸乙酯等。此類液—液萃取處理樣品量大，需使用大量的有機溶劑，由于有機溶劑的高揮發性、毒性和可燃性，造成環境污染和易引發安全事故。

1.1.2 分散液—液微萃取(DLLME): DLLME是一種新型微萃取技術。它基于使用微量注射器將微升級萃取劑快速注入樣液內，在分散劑—水相內形成萃取劑微珠，很大地擴展了有機萃取劑和水樣之間相接觸面，大大加快了萃取平衡的速度，使目標化合物迅速萃入萃取劑微珠內，提高了萃取效率和富集倍數。Sharmin［4］開發了一種使用無機—水性復合液滴的高效三相單滴微萃取方法，用于樣品的濃縮。Julia［5］用HPLC/Q-TOF-MS比較了污水中他汀藥物的固相萃取(SPE)，分散液—液微萃取(DLLME)和攪拌棒吸附萃取(SBSE)三種提取方法。分散液—液萃取到萃取平衡的速度快，使用有機萃取劑量非常小，萃取效率和富集倍數高，操作簡便，消耗低，不僅適用于痕量有機物的分離富集，也適用于痕量無機金屬離子的分離富集，已成功地應用于各種壞境水樣、多種飲料、生物樣品、煤和礦物樣品中痕量組分的分離富集，是一種有發展前途的環境友好的分離富集技術。

1.2 固相萃取(SPE) SPE技術基于液—固相色譜理論，采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進行富集、分離、純化，是一種包括液相和固相的物理萃取過程;也可以將其近似的看作一種簡單的色譜過程。Cai等［7］使用固相萃取(SPE)萃取自來水與飲用水處理廠中水中降血脂類藥物的殘留，水中大多數的藥物絕對回收率和相對回收率較好，可分別達到124.3%和125.6%。其優點是可同時完成樣品富集與凈化，大大提高檢測靈敏度，重現性好，同時萃取速度比液液萃取更快，更節省溶劑，亦可自動化批量處理，在樣品前處理上應用較廣。

1.3 固相微萃取(SPME) SPME是在固相萃取技術上發展起來的一種微萃取分離技術，是集采樣、萃取、濃縮和進樣于一體的無溶劑樣品微萃取新技術。與固相萃取技術相比，SPME操作更簡單，攜帶更方便，操作費用也更加低廉;另外克服了固相萃取回收率低、吸附劑孔道易堵塞的缺點。Arroyo等［8］通過氣相色譜—質譜法在牛奶中測定殘留藥物中的最佳設計和三向校準優化衍生反應和固相微萃取條件。通過三種SPME纖維－聚丙烯酸酯(PA)，聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯(PDMS/DVB)和聚二甲基硅氧烷(PDMS))的比較，以鑒定出萃取過程中最合適的一種。

1.4 基質固相分散(MSPD) MSPD是一種快速樣品處理技術，其原理是將樣品直接與適合反相鍵合硅膠(如C18、C8、硅藻土等)一起混合和研磨等，使樣品均勻分數于固體相顆粒表面制成半固體裝柱，然后采用類似SPE的操作進行洗滌和洗脫。MSPD適用于多藥物殘留分析，Beatriz［9］應用 MSPD-GC-MS/MS 法分析蔬菜中的他汀類藥物殘留。選擇兩種通常用于MSPD的吸附劑 Florisil和氧化鋁，加入番茄，并用EtAc-MeOH(90∶10，v/v)洗脫，以比較兩種吸附劑的提取效果。二次提取以后，結果表明，應用Florisil后對酸性藥物的回收率達87%。它是一種簡單高效實際的提取凈化方法，其優點是濃縮了傳統的樣品前處理中的樣品勻化、組織細胞裂解、提取、凈化等過程，不需要進行組織勻漿、沉淀、離心、pH調節和樣品轉移等操作步驟，避免了樣品的損失。適用于各種分子結構和極性農藥殘留的提取凈化，提高了分析速度、減少了試劑用量、適于自動化分析。

1.5 超臨界流體(supercritical fluid extraction，SFE)SFE技術就是利用超臨界流體為溶劑，從固體或液體中萃取出某些有效組分，并進行分離的一種技術。其特點在于充分利用超臨界流體兼有氣、液兩重性的特點，在臨界點附近，超臨界流體對組分的溶解能力隨體系的壓力和溫度發生連續變化，從而可方便的調節組分的溶解度和溶劑的選擇性，適合于提取分離揮發性物質及含熱敏性組分的物質。超臨界流體萃取法具有萃取和分離的雙重作用，物料無相變過程因而節能明顯，工藝流程簡單，萃取效率高，無有機溶劑殘留，產品質量好，無環境污染。Megumi等［10］應用超臨界流體萃取技術對蔬菜進行了前處理，通過改變提取的極性溶劑來改變各個藥物污染物的溶解性，進而結合液相質譜與氣相質譜的方法對其進行檢測，取得了很好的提取效果。但是，超臨界流體萃取法也有其局限性，二氧化碳—超臨界流體萃取法較適合于親脂性、相對分子量較小的物質萃取，超臨界流體萃取法設備屬高壓設備，投資較大。

1.6 超聲輔助萃取(Ultrasoundextraction，UE) UE亦稱為超聲波萃取、超聲波提取，是利用超聲波輻射壓強產生的強烈空化效應、擾動效應、高加速度、擊碎和攪拌作用等多級效應，增大物質分子運動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標成分進入溶劑，促進提取的進行。與常規萃取技術相比，超聲波輔助萃取快速、價廉、高效、安全、適用范圍廣。在油脂浸取、蛋白質提取、多糖提取、天然香料等食品分析中經常使用。Wu等［11］應用超聲波水浴中加入甲基叔丁基醚來萃取蔬菜樣品中的殘留藥物，提取的蔬菜中吉非貝齊的回收率可達到120.6%。雖然超聲提取快速節省時間，但也因為超聲波衰減等因素，且超聲波器件的安全性無法保證，且無法實現在線不停機維修，所以目前這種前處理方法使用較少。

2 檢測方法

2.1 氣相質譜聯用技術 氣相色譜聯用質譜法具有靈敏度高、專屬性好等特點，適用于揮發性高、熱穩定性較好、極性較高的化合物［12－17］。Azzouz 等［14］通過氣相色譜—質譜法同時測定牛奶，山羊奶和人乳中包括氯貝酸在內的20種藥理活性物質，報告了一種用于同時測定20種藥物活性物質的組合連續固相萃取和氣相色譜—質譜法的系統方法，其將牛奶樣品經過乙腈提取，繼而離心，固相萃取以后甲硅烷基化衍生進入氣質分析，所提出的方法在0.6～5 000 ng/kg的范圍內提供線性響應，并且特征的檢測限為0.2～1.2 ng/kg。但是，由于藥物污染物相對分子質量較大、極性較強、不易氣化或受熱易分解，因此GC技術在調節劑的殘留分析中應用不多，雖然衍生化處理后可以采用GC分析，但衍生化過程往往耗時費力，不符合實際檢測中簡單、快速的要求，更不適于大批量樣品的分析。

2.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法是利用被測組分在兩相中吸附或分配系數的微小差異而達到分離的目的，加上與紫外—可見檢測器相結合，能夠同時準確的檢測大量的組分。該法具有靈敏度高、重現性好、檢測速度快，線性范圍寬等特點，同時能夠克服GC法缺點，適合分析沸點高、熱穩定性較差、分子質量大的化合物。Steffen等［18］將人血漿和尿液樣品經過固相萃取，使用紫外檢測的高效液相方法將普伐他汀藥物通過等度反相HPLC(C18)分離并在239 nm檢測，此方法的定量限為血漿1.9 ng/mL，尿液估計為125 ng/mL檢測快速、準確、重現性好，但是還不能完全滿足低殘留的檢測。

2.3 液相質譜聯用技術 與高效液相法相比，液相質譜聯用的檢測器是質譜檢測器，其遵循帶電粒子磁場或電場中的運動規律，利用化合物的質荷比實現分離和利用豐度比實現定量，集高分離能力、高靈敏度、高分辨率于一體，是目前認為最佳的分析方法［19－31］。Marilena等［19］建立了一種多分析方法，結合固相萃取和液相色譜—串聯質譜法測定廢水樣品中89種藥物。廢水樣品經SPE固相萃取以后進樣分析，電噴霧正負離子同時監測，其中他汀類藥物的回收率范圍為50%到120%。精度以相對標準表示，偏差總是在15%以下，方法檢測限范圍為1.06 ng/L，分離與檢測都取得良好效果，適合水中藥物污染物的痕量檢測。但是質譜分析的儀器比較昂貴，對操作人員要求較高，在基層檢測中還有待進一步推廣。

3 展望

目前，降血脂類藥物檢測基質頗多，主要應用于血漿、尿液以及水體環境中，在食品中的檢測技術較少，而且此類藥物的不同的前處理方法和檢測方法都相應被開發出，而研究的重點和熱點主要集中在前處理方法的開發，主要集中在固相萃取SPE上，其他類的前處理技術，如固相微萃取技術、液相微萃取技術、QuEChERs等方法有待進一步的開發，目前，檢測技術主要傾向于常量檢測，痕量檢測技術相對較少，分析檢測研究趨勢也在向高分離度、高準確度、高靈敏度、高分辨率發展，應用高效液相色譜—串聯質譜儀測定，高分辨飛行時間質譜或軌道阱質譜儀具有較強大的多殘留篩查能力，有待進一步的應用。處理裝置小，處理速度快，操作簡單化，樣品和有機溶劑用量少，對待測成分的選擇性和回收率高，易于自動化的前處理方法與高分離度、高準確度、高靈敏度、高分辨率的分析儀器的相結合應用必將得到更大的發展，以滿足藥物的檢測需要。

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