食用菌全開放操作接種技術(shù)

時 冰 管中顯 張振喜

（1. 泌陽縣職業(yè)技術(shù)學(xué)校，河南 泌陽 4637002；2. 河南省泌陽縣食用菌協(xié)會，河南 泌陽 463700）

食用菌全開放操作接種技術(shù)

時 冰1管中顯2張振喜2

（1. 泌陽縣職業(yè)技術(shù)學(xué)校，河南 泌陽 4637002；2. 河南省泌陽縣食用菌協(xié)會，河南 泌陽 463700）

介紹一種不依賴藥物、安全穩(wěn)定的食用菌接種新技術(shù)及其原理，從料、種、空氣、人、用具、地面6方面詳細(xì)陳述其操作規(guī)程，強(qiáng)調(diào)空間凈化的關(guān)鍵措施：霧化降塵的操作方法、檢測方法及其標(biāo)準(zhǔn)，并對其應(yīng)用范圍提出看法。

全開放；食用菌；接種；無菌；霧化降塵

食用菌接種環(huán)節(jié)多、難度大，對無菌操作要求嚴(yán)格，操作不規(guī)范、結(jié)果不穩(wěn)定，易造成生產(chǎn)失敗。而采用無菌車間接種模式，雖然保障度提高，但成本高，不利于大面積推廣。

一般的開放接種模式，更容易造成嚴(yán)重的雜菌污染，遭受失敗。而采用接種箱、接種罩、超凈臺、層流凈化室等接種模式，用甲醛、氣霧盒熏蒸，多菌靈涂擦等，仍難以確保低污染。其主要問題是過于依賴藥物消毒，理念上存在“無藥不成”的誤區(qū)。

全開放食用菌接種新模式能確保成功率達(dá)到99.5%～99.9%，其原理并不新穎，只是在方法上要抓關(guān)鍵。該技術(shù)已應(yīng)用十多年，效果穩(wěn)定。

1 技術(shù)原理

本技術(shù)原理即為“空間浮沉降徹底，地面塵埃清出去，無塵便無菌”。無塵是硬道理，雜菌在空氣中以浮塵的形式存在，空間的浮塵量和雜菌量的指征意義完全一致，也與凈化車間的原理完全一致。這是實(shí)施霧化降塵全開放接種的科學(xué)依據(jù)。

空氣中的浮塵主要來源于地面，包括塵埃、紙屑、衣物纖維、細(xì)毛、細(xì)菌、芽孢、霉菌孢子、孢子團(tuán)等。清除了這些污染物，空氣就近乎無菌。再加上菌種自身的生長優(yōu)勢，就能保證接種的成功率。

2 操作規(guī)程

全開放接種技術(shù)規(guī)程的主體內(nèi)容就是清除雜菌，切斷侵染途徑；保護(hù)培養(yǎng)料，不接觸或少接觸雜菌。

接種過程的雜菌來源有6個方面，即料、種、空氣、人、用具、地面。我們編了一個易記口訣：“一料二種三空氣，接種人員和用具，地面塵埃大問題，六大來源要牢記”。消除菌源，防止栽培料雜菌污染，是保證接種成功的關(guān)鍵。成功的原因是綜合的，失敗的原因卻可能是單一的，6個因素同等重要，不能忽略任何一個。

2.1 栽培料

栽培料經(jīng)滅菌，安全性應(yīng)是保險的。又為什么將其排在6大雜菌來源之首？這是因?yàn)樵洗x開滅菌鍋后仍會染雜。一旦出鍋后料袋外表又嚴(yán)重染菌，后期用什么藥物補(bǔ)救都徒勞。

栽培袋出鍋后當(dāng)溫度降至30 ℃左右時最容易染菌，且屬于人為因素造成的繼發(fā)污染，或稱再次污染。污染源主要為空間和地面的塵埃，以及出鍋拉運(yùn)人員的手、衣服、裝卸動作和拉運(yùn)工具等。重在預(yù)防，從出鍋環(huán)節(jié)開始，直至接種結(jié)束，須落實(shí)全過程的每一環(huán)節(jié)的每一個細(xì)節(jié)。

預(yù)防工作始于開鍋門前：一是確保拉運(yùn)工具，包括工作人員的工作服、鞋、帽、口罩等的清潔、消毒，注重工作人員的個人衛(wèi)生。二是出鍋的栽培袋要遮蓋拉運(yùn)，蒸鍋門前的空間要霧化降塵，清洗除去地面塵埃，長期固定使用的地面，建設(shè)時力求涂布保護(hù)層，以減少起砂起灰。三是栽培袋降溫場所要提前數(shù)小時進(jìn)行空間霧化降塵，地面清洗除塵。四是栽培袋碼垛后，表層立即用無菌薄膜覆蓋，防止落塵。五是當(dāng)袋溫在鍋內(nèi)降到70 ℃左右時，搶溫出鍋拉運(yùn)，此溫度對菌袋仍有保護(hù)作用。

小結(jié)：徹底滅菌除根源，搶溫出鍋保安全，防護(hù)拉運(yùn)防污染，安全降溫最關(guān)鍵；無塵無菌嚴(yán)落實(shí)，開放接種無污染。

2.2 菌種

以固體菌種為例：菌種的不安全因素，一是自身帶隱性雜菌，二是棉塞、瓶（袋）壁帶雜菌，三是菌種質(zhì)量不佳，如菌齡不適、菌絲老化、細(xì)弱、不健壯等，活性差。

菌種防雜分接種之前和接種之時。要求做到，一不出：培養(yǎng)過程及培養(yǎng)室發(fā)出菌種時要逐瓶逐袋嚴(yán)格檢查，但凡有一絲懷疑的問題菌種，都不能流出培養(yǎng)室使用。二不進(jìn)：有問題的及未經(jīng)瓶外壁、棉塞消毒的菌種，均不能進(jìn)接種間。三次消毒：一是進(jìn)入接種車間前，所有菌種用消毒液無死角清洗外壁，用消毒液浸透棉塞，達(dá)到透而不滴；二是菌種進(jìn)接種間后，隨霧化降塵第二次消毒；三是取種前，對外壁再次消毒。四次把關(guān)：一是菌種出培養(yǎng)室前，逐瓶（袋）嚴(yán)格檢查，不放過可疑種瓶；二是進(jìn)接種間前，對菌種消毒時，再次逐瓶檢查；三是接種前開瓶（袋）取種時，對菌種各表面、底面全面檢查；四是掰塊接種時，高度警惕，發(fā)現(xiàn)問題菌種，立即停用。層層設(shè)防，謹(jǐn)防外觀不易發(fā)現(xiàn)的隱性感染，把風(fēng)險降到最低。

接種過程一旦發(fā)現(xiàn)感染菌種要用塑料袋包嚴(yán)，攜出室外處理。已接入可疑菌種的菌包另放，接種人員雙手重新嚴(yán)格消毒后再繼續(xù)接種。

2.3 空氣

空氣中的雜菌極易造成接種失敗，大面積污染。空氣里基本上是雜菌休眠體，抗逆性極強(qiáng)，體積小而數(shù)量大。制袋過程中最難防的微孔感染的原因就在于此。

體積大于10微米的浮塵容易快速沉降，數(shù)量少。體積小于10微米的浮塵，漂浮在空中，數(shù)量巨大，其中相當(dāng)比例是單細(xì)胞雜菌或者孢子、孢子團(tuán)，其中又以芽孢等最難對付，一般消毒藥物熏蒸等對其作用有限。試驗(yàn)證明：每立方米空間用15毫升甲醛熏蒸30分鐘，殺滅孢子的比例只有24%。所以接種間、接種箱僅用藥物熏蒸，成功率并不大。空氣中未殺滅的漂浮不定的雜菌及其孢子，隨意隨處降落，無孔不入。

采用層流罩等設(shè)備過濾凈化空氣，可達(dá)到無菌目的，但其可控范圍小，不便移動，使用受限。而接種車間范圍大，僅在接種一道工序上保持潔凈，難以保證全過程不染雜。我們通過長期的工作實(shí)踐，研發(fā)成功的霧化降塵凈化空氣技術(shù)，利用物理降塵，化學(xué)吸附、觸殺或抑制孢子，可達(dá)到無菌抑菌目的。其操作方便，可控范圍大。

2.4 接種人員

接種人員執(zhí)行接種操作，技術(shù)到位是重點(diǎn)。

一是接種人員要選拔，需做崗前培訓(xùn)，熟悉理論知識和操作技能，掌握接種技術(shù)的要領(lǐng)和精髓。無塵無菌，繼發(fā)性污染等概念必須讓操作者真正地理解。

二是接種操作前，嚴(yán)格搞好個人衛(wèi)生，盡量降低操作者帶入雜菌的幾率。流水洗手，剪指甲，戴帽、口罩，換消毒的工作服、工作鞋等。

三是人員組合恰當(dāng)，不誤工。接種過程不得講話笑談，動作要快，要專心、準(zhǔn)確、瞬間接入菌種。

四是盡量少走動，行走要輕慢，防止因動作劇烈震動空氣帶進(jìn)塵埃。

五是適當(dāng)增加菌種用量。穴播的要增加深度，面播覆蓋要嚴(yán)密，液體種要全覆蓋料面，一旦萌發(fā)便形成菌落優(yōu)勢而隔離環(huán)境，可以有效防止培養(yǎng)期間的繼發(fā)雜菌污染。

六是接種好的菌袋，要輕拿輕放，順便檢查扎口及蓋體是否嚴(yán)密，要安全轉(zhuǎn)運(yùn)。

七是接種結(jié)束要清理衛(wèi)生，達(dá)到接種前的標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 接種用具

固體菌種接種用于破瓶、破袋取種和打孔封口補(bǔ)破等的工具，有二三十種。用前必須徹底清洗消毒，否則不得帶進(jìn)接種場所。液體菌種接種用的管道、接種槍，須經(jīng)嚴(yán)格清洗滅菌，進(jìn)接種室前不能啟封，為安全起見，初進(jìn)入管道的液體種，最好排出一部分不用（200毫升以上），以沖洗管道和接種槍。

2.6 地面塵埃

地面土壤塵埃中微生物種群繁雜，是空間雜菌和孢子污染的主要來源。

（1）接種場所是硬化地面。提前清洗干凈，霧化降塵后，再及時用拖把、吸塵器、清洗機(jī)等把地面塵埃清除干凈，達(dá)到“空間沉浮降徹底，地面塵埃清出去”。保持地面濕潤而不積水，直至接種結(jié)束。

（2）接種場所為日光溫棚或其他栽培棚，是泥土地面。使用前應(yīng)將地面用塑料膜（地膜）覆蓋嚴(yán)密，確保無死角泄露。達(dá)到“棚上薄膜不漏氣，地下地面蓋嚴(yán)密”，霧化降塵后達(dá)到“空間浮沉降徹底，地面塵土揚(yáng)不起”，并保持到接種結(jié)束。干燥地面可以通過噴灑消毒劑或者石灰水，達(dá)到防止揚(yáng)塵和減少雜菌基數(shù)的雙重效果。如降溫、接種、養(yǎng)菌在同一棚內(nèi)進(jìn)行，無塵無菌應(yīng)保持到優(yōu)勢菌落形成（“封口”）。

3 霧化降塵

3.1 操作方法

選擇高壓電動噴霧器作為降塵工具，霧滴細(xì)、均勻、射程遠(yuǎn)、覆蓋面大，降塵效果好。

每一次接種開始前40分鐘左右，進(jìn)行噴霧降塵，接種環(huán)境要求密閉，每立方米噴灑無菌水40毫升，噴霧要到位，到頂、到角、到壁、不留死角、不漏空間。霧化降塵后，地面達(dá)到濕潤或略有積水。如有明顯積水，則要用拖把、吸塵器或清洗機(jī)等清洗地面，保持濕潤至接種結(jié)束。

根據(jù)環(huán)境凈化程度，用水量可適當(dāng)增減。若無高壓電動噴霧器，也可用普通噴霧器代替，但壓力要盡量高，若手柄短則應(yīng)加長。

3.2 檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)

霧化降塵后，空間的微塵一定要經(jīng)檢測達(dá)標(biāo)后，才可開始接種。

（1）檢測方法。檢測前關(guān)閉燈光，遮擋門窗光線，使環(huán)境黑暗，然后用檢測燈（便攜式探照燈）打出一束白熾強(qiáng)光，上、下、前、后、左、右不同方位全面照射，仔細(xì)觀察兩米左右距離內(nèi)光束內(nèi)的浮游塵埃顆粒數(shù)。

（2）檢測標(biāo)準(zhǔn)。兩米內(nèi)光柱若無任何塵埃顆粒折光，為完全無風(fēng)險環(huán)境，這種情況下的污染率可控制在萬分之一左右；若顆粒數(shù)在0～3個，為安全環(huán)境，污染率可控制在千分之一左右；若顆粒浮影數(shù)在3～5個或以上，可以半量水繼續(xù)降塵，直至達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。

（3）后續(xù)措施。隨接種時間延長、人員走動、空氣流通，空氣浮塵數(shù)量會上升。最好每隔2小時左右及時用半量水進(jìn)行霧化降塵，保持至接種結(jié)束。

接種完成是養(yǎng)菌的開始，接種后3～5天或5～7天內(nèi)，養(yǎng)菌環(huán)境應(yīng)保持接種環(huán)境的無菌標(biāo)準(zhǔn)，直至優(yōu)勢菌落形成。

4 討 論

經(jīng)過多年的應(yīng)用檢驗(yàn)，本技術(shù)被證實(shí)是一種簡單易行、穩(wěn)定可靠、安全環(huán)保的實(shí)用方法。在河南、河北、山西等多地的香菇、白靈菇菌棒制作生產(chǎn)中，唯有使用這項(xiàng)技術(shù)的企業(yè)菌棒的制作成功率最高且保持穩(wěn)定。

由于霧化降塵會導(dǎo)致環(huán)境持續(xù)高濕，南方地區(qū)接種過程使用這一方法沒有問題，但在養(yǎng)菌期使用可能有一定局限性。

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碼：B

：2095-0934（2017）04-259-03