雙孢蘑菇三級菌種生產關鍵技術

王靜靜 羅燕娜 李旭東 趙 亮 張愛萍

（新疆生產建設兵團第六師農業科學研究所，新疆五家渠831300）

雙孢蘑菇（Agaricusbisporus）是典型的草腐性真菌。新疆農副產品原料豐富，閑置日光溫室較多，使得雙孢蘑菇產業已逐漸成為當地農業結構調整的支柱產業。

目前，新疆主要利用種植蔬菜的日光溫室進行改造后生產雙孢蘑菇，菌包主要來自新疆九鼎天庫生物科技有限公司及健源食用菌專業合作社等加工廠，栽培的品種有A15、W192、As2796等。但菌種供應主要來自內地，部分菌種仍由國外控制生產。菌種是雙孢蘑菇產業鏈的首道關鍵環節，其質量好壞和成本高低直接決定了栽培成敗。筆者在進行各類試驗、示范及生產調研的基礎上，較為系統地總結出我區雙孢蘑菇的三級菌種生產關鍵技術，旨在為本地區菌種生產者提供技術參考。

1 母種制作關鍵技術

經多次試驗研究表明，雙孢蘑菇目前最優母種培養基仍為麥粒煮汁培養基。其關鍵點是優良菌株的選擇、組織分離部位的確定及培養基的制作。除從正規科研單位購買的母種外，凡經過分離培養獲得的菌株用作母種時必須進行出菇試驗，證明其具有優良性狀，方可用于生產。

1.1 母種培養基制作制作1 L麥粒煮汁培養基需麥粒 200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂 18～20 g，MgSO40.5 g，KH2PO42 g，蛋白胨1.5 g。操作要點是：將麥粒煮至透亮無白芯，表皮無破裂后，用4層紗布過濾。取濾液繼續加熱，并加入化學試劑、瓊脂和蛋白胨，先要用少量涼水攪勻再加入，邊加邊用玻璃棒攪拌，試劑全部加入后定容。制作的關鍵環節是麥粒煮的火候一定要掌握到位，煮的過久麥粒表皮破裂，淀粉外泄，造成麥粒結塊，滅菌不易徹底。此時，一些尚存活的抗熱性細菌，遇到外泄淀粉營養便會造成木霉菌污染。過生，麥粒種淀粉、脂肪等物質不能分解為麥芽糖等物質，不易于菌絲利用，這是造成菌絲生長速度變慢的主要原因。

1 L麥粒煮汁培養基可分裝試管80～90支，分裝試管時要注意流出的培養基不可粘在試管口的壁上，以防日后生霉。然后用101kPa高壓滅菌35 min，趁熱擺成斜面培養基，長度為試管長度的2/3左右，斜面上端距棉塞2～3 cm為宜。做好的培養基放置2～3 d確認無菌后，方可使用。

1.2 優良菌株的獲得

1.2.1 子實體選擇 最好是選取前兩潮菇形圓正、菌蓋肥厚、健康、具有本品種特性的子實體，一般是隨采隨處理，在4℃保存最多不超過1 d，將其切除菇根，用無菌水將菇面沖洗干凈，再用75%酒精棉對菇體表面進行消毒。

1.2.2 組織分離技術 在所選取的子實體的菇柄中部用解剖刀縱切一刀后，用手掰開菇體，再在菇蓋與菇柄交界處切五個小方塊，隨后挑取一小塊約0.5 cm大小的組織，迅速移接到試管培養基中間處并用棉塞封口。其關鍵技術，是如何判斷出生命力較強的離體組織。

1.2.3 母種培養 接種后，將試管置于20～25℃下恒溫遮光培養3～4 d后，可見到組織塊上長出白色茸毛狀菌絲體，周圍無雜菌污染，即說明分離成功。然后在菌落的邊緣，用無菌接種針挑取先端菌絲轉移到新的培養基斜面上，在20～25℃下經過5～7 d培養，菌絲長滿斜面而無雜菌污染的，即為純菌絲體菌種，可用來進行擴繁。1支純菌絲試管菌種一般可擴繁20～30支母種，1支母種可擴繁原種3瓶，擴繁時要先將老接種菌塊去掉。

2 原種制作關鍵技術

試驗研究表明，雙孢蘑菇原種麥粒培養基制作時，加入一些棉子殼、牛糞或糞草用作封口料，對菌絲生長能起引導作用，菌絲生長較均勻且較快。原種制作關鍵點是：要求所使用的封口料糞草須較碎、較短，以避免滅菌后麥粒與封口料出現斷層，影響菌絲生長速度；其次麥粒要保持適宜含水量。

2.1 封口料制作封口料用量約占麥粒培養基的10%～20%。用棉子殼、牛糞作原料，其比例按60%棉子殼、40%干牛糞、2%石膏、1.5%石灰，根據天氣情況決定發酵時間的長短，夏季一般需7～10 d，發酵期間需翻堆2～3次。也可選用發酵好的糞草作為封口料，使用前用0.1%石灰水預濕，含水量應保持在45%，pH8左右。

2.2 培養基制作制種前一天，先將麥粒淘洗干凈，然后在0.2%石灰水中浸泡10～12 h，瀝去水后用清水反復沖洗至pH8左右，然后煮沸至麥粒透亮無白芯表皮無破裂，約10 min后用笊籬瀝干水分，攤開，至麥粒表面水分晾干，含水量在45%左右，加入1.5%輕質碳酸鈣和1%石膏拌勻后裝瓶。一般用750 mL的瓶裝料，裝至瓶肩后再用封口料進行封口壓實，用抹布將菌種瓶內壁口擦干凈，要求加棉花塞至距料面1 cm以上，松緊度以棉塞能提起整個瓶身為宜，并在棉塞上面蓋上防水蓋，避免棉塞潮濕而造成雜菌污染。之后在101kPa高壓下滅菌3 h，待緩慢降壓后出鍋，搬至接種間進行臭氧滅菌。

2.3 接種與發菌接種時，先用接種針將試管中老接種菌塊去掉，然后迅速取出帶培養基的母種放入原種瓶內的培養料上，立即蓋好瓶口。

發菌場所要求干凈整潔，空氣清新，溫度23～25℃，空氣相對濕度60%～70%，遮光培養，擺放勿過擠，及時剔除污染瓶，培養25～30 d菌絲可布滿瓶，待用。一般1瓶原種（750 mL）可接40袋栽培種。

3 栽培種制作技術

栽培種培養基的配制，與原種培養基制作基本一致，只是不需加封口料，直接裝袋（13 cm×23 cm聚丙烯袋），用套環封口，高壓滅菌3 h，待自然降壓后將料包運至冷卻室，放至常溫后才能進行接種。其關鍵技術是：在接種前須挑選健壯無雜菌污染的原種，并將封口料清除后方可挖種轉接，要將菌種均勻覆蓋于培養料表面，可促使菌絲快速布滿料面，減少雜菌污染。

接種后在23～25℃下遮光培養，30 d菌絲可布滿袋。每袋栽培種約350 g，一般1 m2料床需播3袋栽培種。

4 菌種鑒定與保存

4.1 菌種質量鑒定菌種質量鑒定，一般是通過感官檢驗和栽培性狀檢驗來確定。感官檢驗，是從菌種的長勢、顏色、菌齡、均勻度等方面確定菌種活力，這需要一定的經驗值。栽培性狀，可通過出菇試驗，從菇形、出菇快慢、產量、品質等方面進行鑒定菌種種性。在菌種進行大量擴繁時，一定要對菌種的質量和種性做正規的栽培試驗。

優良母種要求菌絲濃白、粗壯，無干燥、收縮和發黃現象；原種和栽培種要求菌絲色澤潔白無雜色（菌）出現，菌種瓶（袋）內無黃色汁液滲出，接種后一般48 h后開始萌發。

4.2 菌種保存母種滿管后短期保存，可置于4℃冰箱，保藏期不超過90 d；長期保存，可采用液氮保存法、石蠟保存法等。原種和栽培種一般不做儲備菌種，根據栽培時間有計劃進行生產。母種轉管次數要少，最多不超過5次。原種和栽培種短時間保存，也可置于4℃冰箱保存，一般不超過30 d。

一般栽培400 m2的設施內需栽培種420 kg，依次可推算需原種11瓶，母種4支試管。