不同品種桑葉總黃酮含量的測定

張芳　王曉紅　羅澤虎

摘要 為了適應桑樹多元化發展對藥食專用品種的需求，采用了分光光度法對貴州省蠶業研究所貴陽桑園基地的60個桑品種桑葉中總黃酮含量進行了測定。結果表明：桑葉總黃酮含量分布在14.765～52.269 mg/g之間，平均含量為27.078 mg/g，品種間差異較大，變異系數為29%。其中道真桑、特優2號、川-16總黃酮含量高，生長優勢明顯，因而具有較高的藥食用途開發利用價值。

關鍵詞 桑葉；品種；總黃酮；紫外分光光度法

中圖分類號 R284 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）03-0223-01

長期以來，栽植桑樹主要被用來養蠶，隨著經濟的不斷發展，這種單純的栽桑養蠶形式已不符合農業多元化發展趨勢，隨著科研人員對桑樹研究的深入，桑葉的營養價值和藥用價值已越來越引起人們的關注，黃酮類物質是桑葉發揮功效的主要活性成分之一，具有多種生物學功能[1-4]。桑樹產品屬于藥食兩用食品，但藥食專用桑品種資源的缺乏嚴重制約了其開發和利用。因此，該試驗對不同桑品種總黃酮含量進行測定，旨在篩選出具有較高藥食開發價值的桑品種。

1 材料與方法

1.1 試驗材料、儀器與試劑

1.1.1 材料。桑葉采于貴州省農科院蠶業研究所貴陽桑園基地，采集時間為2016年7月19—25日，采摘部位為桑樹中部枝條葉片。采摘的桑葉用自來水沖洗，除去泥沙等雜物，再用雙蒸水沖洗干凈，風干后置于恒溫鼓風干燥箱中，105 ℃殺青 5 min，然后在60 ℃恒溫箱中烘至恒重，粉碎，過60 目篩，干燥桑葉粉分別裝入密封袋備用。

1.1.2 儀器。鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；JH電子精密天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；多功能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；紫外/可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）。

1.1.3 試劑。蘆丁標準品（成都曼思特生物科技有限公司、中國科學院成都生物研究所共同研制）；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇均為分析純試劑。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制。準確稱取蘆丁標準品10.40 mg（120 ℃烘至恒重），置于50 mL容量瓶中，用50%乙醇溶解、定容，配制成蘆丁標準溶液。分別準確吸取蘆丁標準溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，分別加入5%的NaNO2溶液0.5 mL搖勻，放置5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再過5 min后再加入4 mL 4%NaOH溶液，混勻，用50%乙醇稀釋至刻度。放置15 min，在510 nm下測定吸光度，以第一管溶液作為空白。以蘆丁濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線[5]。

1.2.2 桑葉中總黃酮的提取。精密稱取桑葉粉1.000 g于100 mL錐形瓶中，加體積分數70%乙醇40 mL，在60 ℃條件下以420 W功率超聲波提取40 min，過濾，將濾液轉移至100 mL容量瓶，濾瓶用70%的乙醇洗滌3～5次，加70%乙醇定容至刻度，振蕩搖勻為待測樣品液[6]。

1.2.3 桑葉中總黃酮含量的測定。準確吸取待測樣品液1 mL，放入10 mL容量瓶中，分別加入5%的NaNO2溶液0.5 mL搖勻，放置 5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再過5 min后再加入4 mL的4% NaOH溶液，混勻，用50%乙醇稀釋至刻度。放置15 min，在510 nm下測定吸光度。根據標準曲線計算總黃酮含量。

總黃酮含量（mg/g）=■（1）

式（1）中，Y是吸光度值，V1是樣品提取液定容體積（mL），V2是測定吸光度用樣液的定容體積（mL），V3測定吸光度用樣液的體積（mL），M 是樣品質量（g）。

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線和方程

以溶液質量濃度為X軸，吸光度為Y軸，制作標準曲線并得回歸方程與回歸系數（圖1）。回歸方程為Y=11.787X-0.003 1，計算得到回歸系數R2=0.999 4。

2.2 不同品種對桑葉總黃酮含量變化的影響

不同品種桑葉分別經烘干、超聲提取后，測得總黃酮含量見表1。60個品種的平均總黃酮含量為27.078 mg/g，品種間差異較大，變異系數為29%。其中，道真桑總黃酮含量最高，為52.269 mg/g，強桑1號總黃酮含量最低，僅為14.765 mg/g，其差異達3倍以上。

3 結論與討論

植物中提取的黃酮類化合物具有抗腫瘤、抗氧化、抗病原微生物、改善免疫功能、防治心血管疾病、改善繁殖性能、抗炎等作用[7]。桑樹是黃酮類物質含量較高的樹種之一，但其含量受桑品種、生長環境、桑葉部位等影響。在桑樹藥食開發過程中，桑品種應作為原材料選擇的一個重要因素。

通過對60個品種桑葉中部葉位總黃酮含量進行測定，發現不同品種對桑葉總黃酮影響顯著。60個桑品種的桑葉干物質中總黃酮含量在14.765～52.269 mg/g之間，平均含量為27.078 mg/g，其中道真桑總黃酮含量最高，為52.269 mg/g。此外，特優2號、澧桑24、川-16、鎮湖總黃酮含量也很高，含量分別為44.874、44.687、43.919、40.965 mg/g。對各品種進行形態學及生物學特征調查發現，道真桑、特優2號、川-16樹形直立、枝條長而直、節間距較短、產葉量多，表現出相對優勢，因而具有較高的藥食用途和開發利用價值[8]。

4 參考文獻

[1] 郭小補，廖森泰，劉吉平，等.不同桑品種的桑葉總黃酮含量與體外抗氧化活性的相關性[J].蠶業科學，2008，34（3）：381-386.

[2] 柴建萍，謝道燕.不同桑樹品種資源多酚及黃酮類物質測定[J].蠶桑通報，2007，38（3）：15-16.

[3] 李瑞雪，汪泰初，賈鴻英.桑葉活性成分、生物活性的研究及其開發應用進展[J].北方蠶業，2009，30（2）：1-3.

[4] 原愛紅，黃哲，馬俊，等.桑葉黃酮的提取及其降糖作用的研究[J].中國草藥，2004，35（11）：52-56.

[5] 穆建峰.桑葉總黃酮提取工藝研究[J].中國果蔬，2016，36（8）：12-15.

[6] 鄭夢嬌，陳清西.響應面優化扶桑葉黃酮超聲提取工藝[J].亞熱帶植物科學，2013，42（3）：205-210.

[7] 占今舜，劉明美，趙國琦.黃酮的作用及其在反芻動物上的應用[J].中國飼料，2014，23（4）：13-15.

[8] 王芳，喬璐，潘小艷，等.桑葉黃酮的提取及抗氧化研究[J].廣東農業科學，2011（15）：76-79.