結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中TAZ表達(dá)的關(guān)系及臨床意義研究*

王愛軍，王紅鈺，徐晉珩，鄭寶軍，吳 肖，程 健，張 超，施 華，馮俊偉

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬唐山市工人醫(yī)院：1.腫瘤外科；2.病理科 063000)

結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中TAZ表達(dá)的關(guān)系及臨床意義研究*

王愛軍1，王紅鈺1，徐晉珩2，鄭寶軍1，吳 肖1，程 健1，張 超1，施 華1，馮俊偉1

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬唐山市工人醫(yī)院：1.腫瘤外科；2.病理科 063000)

目的探討轉(zhuǎn)錄共激活因子(TAZ)在結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中表達(dá)，分析其關(guān)系及臨床意義。方法選取經(jīng)病理確診為結(jié)直腸癌并行根治性手術(shù)患者85例為手術(shù)組，手術(shù)后確診復(fù)發(fā)的患者35例作為復(fù)發(fā)組，同時選取年齡性別相匹配的健康人50例為對照組。取結(jié)直腸癌患者腫瘤組織及正常黏膜組織石蠟標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)染色檢測TAZ表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組外周血中TAZ的水平。結(jié)果手術(shù)組患者術(shù)前外周血中TAZ水平明顯高于對照組(P<0.05)，手術(shù)后TAZ水平較對照組無明顯變化(P>0.05)，復(fù)發(fā)組患者外周血TAZ水平明顯高于手術(shù)組術(shù)前(P<0.05)。手術(shù)組患者腫瘤組織中TAZ表達(dá)明顯高于正常黏膜組織(P<0.05)，復(fù)發(fā)組患者腫瘤組織中TAZ表達(dá)高于手術(shù)組(P<0.05)。手術(shù)組和復(fù)發(fā)組患者腫瘤組織與外周血TAZ水平呈正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論監(jiān)測TAZ水平對及時了解腫瘤復(fù)發(fā)有明顯的參考價值。

結(jié)直腸腫瘤；TAZ；復(fù)發(fā)；腫瘤標(biāo)志物

結(jié)直腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，占我國惡性腫瘤的第四位，胃腸道腫瘤的第二位，近年來發(fā)病率不斷升高，嚴(yán)重威脅了人們的健康。由于結(jié)直腸癌早期發(fā)現(xiàn)困難，因而手術(shù)之后患者仍有復(fù)發(fā)的風(fēng)險，目前腫瘤復(fù)發(fā)的概率也有上升的趨勢。雖然已有癌胚抗原(CEA)等指標(biāo)用于復(fù)發(fā)預(yù)測，但效果并不能令人滿意[1]。因此，尋找新的腫瘤相關(guān)分子預(yù)測結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)有重要臨床意義。轉(zhuǎn)錄共激活因子(TAZ)是通過與轉(zhuǎn)錄因子和染色體重構(gòu)蛋白相結(jié)合來調(diào)節(jié)下游基因的轉(zhuǎn)錄。有研究顯示，TAZ在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、多發(fā)性骨髓瘤等多種惡性腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移預(yù)后有關(guān)[2-5]。但目前關(guān)于TAZ與結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)的報道還不多見。本研究通過檢測結(jié)直腸癌患者、復(fù)發(fā)患者外周血及腫瘤組織TAZ表達(dá)情況，對不同組織中TAZ的關(guān)系進(jìn)行分析，為結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的機(jī)制及預(yù)測提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014-2015年于本院行根治性手術(shù)的結(jié)直腸癌患者85例為手術(shù)組，其中男57例，女28例，年齡26～74歲，平均(61.4±18.3)歲，均有術(shù)后病理確診。同時選取性別、年齡相匹配的健康體檢者50例為對照組，同期手術(shù)后復(fù)發(fā)結(jié)直腸癌患者35例為復(fù)發(fā)組，均有活檢病理證實，并有影像學(xué)資料確定為復(fù)發(fā)。所有入選者均自愿簽署知情同意書，并得到本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2主要試劑及儀器 全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(羅氏E601)，TAZ試劑盒購自美國TPI公司，酶免之星全自動免疫分析儀。TAZ兔抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，其他免疫組化試劑及試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)公司。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有入選者晨起空腹抽取靜脈血5 mL，室溫靜置30 min后，3 500 r/min離心15 min，分離血清。手術(shù)組在術(shù)前1 d、術(shù)后1個月各采血1次，復(fù)發(fā)組及對照組均采血1次。腫瘤組織石蠟標(biāo)本取自本院病理科，標(biāo)本均經(jīng)HE染色確診，連續(xù)4 μm切片后進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測；同時自病理科取結(jié)直腸癌患者正常黏膜組織標(biāo)本30例作為TAZ組織檢測的對照(標(biāo)本來自結(jié)腸鏡活檢組織，證實無癌及不典型增生組織存在)。

1.3.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測TAZ在外周血中的表達(dá) 各組血清嚴(yán)格依據(jù)試劑盒的說明書操作，檢測TAZ表達(dá)水平。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,用酶免之星全自動酶標(biāo)儀檢測讀數(shù)。

1.3.3免疫組織化學(xué)檢測及結(jié)果判斷 將石蠟標(biāo)本進(jìn)行4 μm連續(xù)切片，進(jìn)一步脫蠟水化，按免疫組織化學(xué)試劑盒(SP法)說明書進(jìn)行染色操作，結(jié)果由病理專業(yè)醫(yī)師判斷。根據(jù)陽性細(xì)胞的百分率結(jié)合染色強(qiáng)度對免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行分析。TAZ以細(xì)胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽性。在400倍顯微鏡下隨機(jī)計數(shù)10個視野，每視野計數(shù)100個細(xì)胞，計算陽性率(0%～20%為0分，>20%～50%為1分，>50%～75%為2分，≥76%為3分)；再按染色強(qiáng)度進(jìn)行計分：無陽性染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。陽性率及染色強(qiáng)度計分之和結(jié)果評分：0～1分為(-)，2～3分為(+)，≥4分(++)。

2 結(jié) 果

2.1各組外周血TAZ表達(dá)水平 手術(shù)組患者術(shù)前外周血TAZ水平為(3.69±1.02)ng/mL，術(shù)后為(0.13±0.08)ng/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對照組外周血TAZ水平為(0.11±0.09)ng/mL，明顯低于手術(shù)組術(shù)前(P<0.05)，而與手術(shù)組術(shù)后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)發(fā)組外周血TAZ水平為(5.94±1.85)ng/mL，明顯高于手術(shù)組術(shù)前(P<0.05)。

2.2結(jié)直腸癌患者腫瘤組織與正常黏膜組織中TAZ表達(dá)水平 手術(shù)組患者腫瘤組織中TAZ表達(dá)陽性率為78.82%(67/85)，明顯高于正常黏膜組織的陽性率13.33%(4/30)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=40.26，P<0.01)；復(fù)發(fā)組患者腫瘤組織中TAZ表達(dá)陽性率為94.29%(33/35)，高于手術(shù)組(χ2=4.27，P=0.039)。

2.3結(jié)直腸癌患者外周血與腫瘤組織中TAZ表達(dá)的關(guān)系 Spearmann相關(guān)分析顯示，手術(shù)組外周血與腫瘤組織中TAZ表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.304 6，P=0.005)，復(fù)發(fā)組外周血與腫瘤組織中TAZ表達(dá)也呈明顯正相關(guān)(r=0.422 8，P=0.011)。

3 討 論

結(jié)直腸癌是我國常見消化道惡性腫瘤，隨著生活水平的提高，結(jié)直腸癌的發(fā)病率也逐漸上升，嚴(yán)重危害人民健康[6-8]。由于結(jié)直腸癌早期并無特異性癥狀，確診時患者多已處于進(jìn)展期，即使經(jīng)過手術(shù)、放化療等綜合治療，也存在較高的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移概率，導(dǎo)致患者預(yù)后不良[9-10]。因此，及時準(zhǔn)確地預(yù)測患者復(fù)發(fā)在結(jié)直腸癌的綜合治療中有重要意義。但目前常用的指標(biāo)尚不能令人滿意。由于TAZ在腫瘤中發(fā)揮較為廣泛的作用，故本研究對TAZ與結(jié)直腸癌的關(guān)系進(jìn)行了研究。

TAZ是由400個氨基酸構(gòu)成，內(nèi)含ww結(jié)構(gòu)域和PDZ結(jié)合序列。TAZ在許多組織和器官中都存在表達(dá)[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)，TAZ能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及誘導(dǎo)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化[13]。多項研究發(fā)現(xiàn)，TAZ蛋白在肺癌、乳腺癌、胃癌等許多惡性腫瘤中高表達(dá)，可以促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥形成等過程[2-5]。已有報道發(fā)現(xiàn)，TAZ在結(jié)直腸癌中存在過表達(dá)現(xiàn)象[14-15]，但具體作用還不明確。本研究發(fā)現(xiàn)，TAZ在腫瘤組織表達(dá)明顯比正常黏膜組織增強(qiáng)，提示TAZ可能參與結(jié)直腸癌的發(fā)生。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)患者的腫瘤組織TAZ表達(dá)更強(qiáng)，說明TAZ在復(fù)發(fā)過程中表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，提示TAZ在結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)過程中可能發(fā)揮了促進(jìn)作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)前結(jié)直腸癌患者外周血TAZ水平高于對照組，手術(shù)切除腫瘤后TAZ水平明顯降低，說明外周血TAZ水平與患者體內(nèi)的腫瘤負(fù)荷關(guān)系密切。對復(fù)發(fā)患者的外周血檢測還發(fā)現(xiàn)TAZ水平最高，也提示TAZ對結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)有促進(jìn)作用。相關(guān)分析還發(fā)現(xiàn)，手術(shù)前患者和復(fù)發(fā)患者的腫瘤組織和外周血TAZ水平存在明顯相關(guān)性，說明外周血TAZ檢測可以反映腫瘤狀態(tài)。監(jiān)測TAZ水平對及時了解腫瘤復(fù)發(fā)有明顯的參考價值。

[1]?？》?，李明，李虎林，等．聯(lián)合檢測血清腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用[J]．檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11(8)：1082-1083．

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RelationshipofTAZexpressionbetweenperipheralbloodandtumortissueinpatientswithcolorectalcanceranditsclinicalsignificance*

WangAijun1,WangHongyu1,XuJinheng2,ZhengBaojun1，WuXiao1,ChengJian1,ZhangChao1,ShiHua1,FengJunwei1

(1.DepartmentofOncologySurgery;2.DepartmentofPathology,AffiliatedTangshanMunicipalWorker′sHospital,HebeiMedicalUniversity,Tangshan,Hebei063000,China)

ObjectiveTo investigate the expression of TAZ in peripheral blood and tumor tissue of the patients with colorectal cancer and to analyze their relationship and clinical significance.MethodsEighty-five cases of pathologically verified colorectal cancer treated by radical operation were selected as the operation group,and 35 cases with postoperative relapse served as the recurrent group.Meanwhile 50 age and sex-matched healthy persons were selected as the control group.The immunohistochemical(SP) technique was adopted to detect the expression of TAZ in tumor tissues and expression of TAZ in peripheral blood was tested with enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).ResultsThe level of preoperative TAZ in peripheral blood of the operation group was significantly higher than that of the control group(P<0.05).The level of peripheral blood TAZ after operation in the operation group had no significant change compared with the control group(P>0.05).The level of peripheral blood TAZ in the recurrent group was significantly higher than preoperative level of operation group(P<0.05).The expression of tumor tissue TAZ was significantly higher than that of normal mucosal tissue(P<0.05);the expression of tumor tissue TAZ in the recurrent group was higher than that in the operation group(P<0.05).The tumor tissue TAZ level in the operation group and recurrent group had obvious correlation with peripheral blood TAZ level(P<0.05).ConclusionMonitoring the TAZ level has obvious reference value for predicting colorectal cancer staging and timely understanding tumor recurrence.

colorectal neoplasms;TAZ;recurrence;tumor markers

河北省科技計劃基金資助項目(16277702D)。

王愛軍(1967-)，主任醫(yī)師，碩士，主要從事胃腸腫瘤的基礎(chǔ)及臨床研究。

R735.3

A

1671-8348(2017)28-3915-02

2017-04-04

2017-06-30)

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.28.011