紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基清除能力的比較

朱月+鐘尉+趙雪梅

摘要：用鄰二氮菲-Fe2+氧化法研究紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基的清除作用，并以多糖對羥自由基清除率為50%時所需的多糖濃度為比較參數，比較了幾種紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基的清除能力。研究結果表明，6種紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基均有清除作用，且呈明顯的量效關系。清除能力從大到小依次為品種紫冠玉珠、奧運圣火、紫樓閃金、藍荷、青春、實生苗，且清除能力差異顯著。

關鍵詞：紫斑牡丹葉片；多糖；羥自由基；清除能力

中圖分類號：R284.1 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2016）11-0341-02

紫斑牡丹（Paeonia suffruticosa）別稱甘肅牡丹、西北牡丹，原產于中國，為毛茛科（Ranunculaceae）芍藥屬（Paeonia）植物，紫斑牡丹是中國牡丹家族中的重要成員之一，因花瓣基部有一個明顯的色斑得名。主要分布在甘肅、青海、陜西、寧夏等省（自治區）[1]。經過多年的選育、引種、馴化，紫斑牡丹表現出良好的適應性，在許多地區已引種栽培成功[1]。

2006年赤峰學院生命科學學院趙雪梅副教授從甘肅省蘭州市引入11個紫斑牡丹品種，并帶領課題組成員圍繞引種栽培管理與生長發育觀測[1]、抗寒性指標測定[2-4]等方面展開了研究，取得了階段性成果。

紫斑牡丹不但具有很好的觀賞價值，而且隨著引種馴化不斷成功，種植栽培面積不斷擴大，許多學者對紫斑牡丹的藥用、油用等方面也展開了研究。

目前關于紫斑牡丹葉片多糖清除羥自由基能力方面的研究報道較少。本研究以赤峰地區從甘肅省蘭州市引種的藍荷、奧運圣火、紫冠玉珠、紫樓閃金、青春、實生苗6種紫斑牡丹葉片為研究材料，提取6種紫斑牡丹葉片多糖，采用鄰二氮菲-Fe2+氧化（Fenton法）體系，研究紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基的清除作用，比較不同品種紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基的清除能力，旨在為紫斑牡丹的進一步開發利用提供參考，從而提高其經濟價值、藥用價值、實用價值，促進紫斑牡丹的產業化形成。

1 材料儀器與試劑

1.1 材料

紫斑牡丹葉片采摘自赤峰學院試驗基地。

1.2 儀器與試劑

飛利浦迷你攪拌機、CS101-AB電熱鼓風干燥箱（重慶試驗設備廠），SHA-C恒溫水浴振蕩器、HHS數顯式恒溫水浴鍋（上海博訊實業有限公司），DD-5M離心機、RE-52A旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠），LRH-250A生化培養箱（廣東省醫療器械廠），UV-9600紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器有限公司）等。

無水乙醇、蒸餾水、苯酚、濃硫酸、葡萄糖、鄰二氮菲、鄰苯三酚、硫酸亞鐵、過氧化氫、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉等，以上試劑均為分析純。

2 方法

2.1 紫斑牡丹葉片多糖的提取[5-7]

將秋季采摘的紫斑牡丹葉片自然干燥，粉碎過篩，收集粉末烘至恒質量。以去離子水為溶劑，按1 g ∶30 mL的料液比混勻，在70 ℃恒溫水浴振蕩器中以300 r/min振動，浸提 30 min 后，離心，分別收集上清液。再濃縮上清液至一定體積，醇析濃縮的上清液，離心收集沉淀得多糖。

2.2 紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基清除作用的研究[5]

配制不同的紫斑牡丹葉片多糖溶液。按表1構建鄰二氮菲-Fe2+氧化法反應體系。并將各管混勻于37 ℃恒溫水浴鍋中水浴保溫1.5 h。反應結束后，A1、A2管以空白管調零，A3管以相對應濃度的樣品空白管調零，在536 nm波長下測吸光度。根據公式計算每種紫斑牡丹葉片多糖在不同濃度下對羥自由基的清除率。計算清除率為50%時所對應的紫斑牡丹葉片多糖濃度。采用Excel和SPSS軟件進行生物統計學分析，比較每種紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基清除的趨勢及清除能力的差異性。

清除率=（A3管吸光度-A2管吸光度）/（A1管吸光度-A2管吸光度）×100%。

3 結果與分析

從圖1至圖6的曲線趨勢及表2的相關系數及清除率為50%時對應的多糖濃度可知，每種紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基均有清除作用，并且在一定的濃度范圍內，隨著紫斑牡丹葉片多糖濃度的增加，對羥自由基的清除率也增大，二者的相關系數均在0.9以上，線性關系較好。表明紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基清除能力的大小均與多糖的濃度有關，在一定濃度范圍內呈明顯的量效關系。并且，當清除率達到50%時，所需的6個品種紫斑牡丹葉片多糖濃度不同，表明各個品種紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基的清除能力不同。清除能力從大到小依次為品種紫冠玉珠、奧運圣火、紫樓閃金、藍荷、青春、實生苗，且品種間的清除能力存在顯著差異（表2、表3）。

紫斑牡丹葉片多糖能有效清除羥自由基，說明具有一定的抗氧化作用，在藥用、醫療保健等領域具有很好的開發利用前景。

參考文獻：

[1]趙雪梅，成仿云，唐立紅，等. 赤峰地區紫斑牡丹的引種與抗寒性研究[J]. 北京林業大學學報，2011，33（2）：84-90.

[2]唐立紅，趙雪梅，朱 月，等. 不同品種紫斑牡丹葉片結構與耐寒性的關系比較[J]. 江蘇農業科學，2011，39（6）：283-285.

[3]朱 月，趙雪梅，唐立紅. 低溫對幾種引種紫斑牡丹葉片可溶性糖含量的影響[J]. 北方園藝，2012（2）：62-64.

[4]唐立紅，趙雪梅，朱 月，等. 自然降溫過程中紫斑牡丹葉片結構與抗寒性關系的研究[J]. 北方園藝，2012（11）：64-66.

[5]朱 月，畢曉丹，趙雪梅. “洛陽紅”牡丹葉片多糖提取條件的研究[J]. 北方園藝，2011（4）：149-151.

[6]朱 月，段蕊曄，畢曉丹. 杏鮑菇多糖提取條件研究[J]. 江蘇農業科學，2013，41（5）：276-278.

[7]王搖琳，趙荷娟，魏啟舜，等. 雙孢蘑菇子實體多糖的響應面法優化提取及其純化[J]. 江蘇農業學報，2014，30（5）：1139-1146.