MyD88通路關鍵因子IRAK1、IRAK4和TRAF6在尖銳濕疣組織中的表達

史毓杰，楊文林，林 立，陳惠勇，尹嘉文，陳嘉惠

尖銳濕疣是由HPV感染導致的性傳播疾病，該病易反復發作難以治愈，研究發現其發生、發展及轉歸與人體的免疫功能密切相關[1]。Toll樣受體(Toll-like receptor, TLR)通過識別病原相關分子模式激活機體免疫反應，其中MyD88是TLR信號轉導通路中最重要的銜接蛋白。本課題組前期實驗發現髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88, MyD88)在尖銳濕疣患者中表達上調，且MyD88表達與血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、白細胞介素(interleukin, IL)-10呈正相關[2-4]。本實驗進一步探討MyD88通路下游關鍵因子白介素-1受體相關激酶-1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1, IRAK1)、白介素-1受體相關激酶-4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4, IRAK4)和腫瘤壞死因子受體相關因子6(TNF receptor associated factor 6, TRAF6)在尖銳濕疣患者皮損組織中的表達，進一步明確HPV感染是否可以激活MyD88依賴的信號傳導通路。

1 材料與方法

1.1一般資料選取2014年5月～2017年5月廣州醫科大學第二附屬醫院收治的尖銳濕疣患者60例，均符合尖銳濕疣診斷標準[5]，并經病理檢查確診。其中男性48例，女性12例，年齡24～62歲，平均(42.25±1.33)歲；病程時間1.2～18.3個月，平均病程(3.85±1.40)個月，所有患者于就診前2周內無抗病毒及免疫制劑治療史。取男性患者包皮、冠狀溝及肛周皮損組織，女性患者外陰及肛周皮損組織作為病損組織，同時選取我院行包皮環切術后的正常包皮組織60例作為對照組織，年齡25～60歲，平均(43.00±1.25)歲。所有組織經10%中性福爾馬林固定后用石蠟包埋切片。

1.2方法IRAK1、IRAK4和TRAF6抗體由北京博奧森生物公司提供。采用丹麥Dako公司生產的通用型EnVision兩步法免疫組化試劑盒進行檢測，所有檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書要求進行。依據免疫組化染色陽性細胞比例計分：無陽性細胞染色為(-)，陽性細胞數1%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()。

1.3統計學處理采用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，計數資料采用率(%)表示，等級資料采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

60例尖銳濕疣患者和對照組在性別、年齡上差異無統計學意義(P>0.05)。

免疫組化檢測結果顯示IRAK1、IRAK4和TRAF6在對照組中多呈無表達(-)或低表達(+)；而在尖銳濕疣組中普遍表達，且高表達()例數較多，陽性表達的棕色顆粒主要位于基底細胞和棘層細胞的細胞質和(或)細胞核內(圖1～3)。

對兩組免疫組化結果按染色程度進行統計分析：對照組中3種因子無表達或低表達的比例分別為IRAK1(96.7%)、IRAK4(98.3%)、TRAF6(100%)，均顯著高于尖銳濕疣組。而尖銳濕疣組中，3種因子呈高表達()的比例分別為IRAK1(80%)、IRAK4(83.3%)、TRAF6(91.7%)，也顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，表1)。

3 討論

尖銳濕疣是國內外目前較為常見的性傳播疾病，自20世紀80年代以來無論是發病率還是復發率均現顯著上升態勢，成為危害公共安全的重要疾病之一[6]。既往研究發現HPV進入人體后可形成持續性感染，而這種持續性感染與機體的免疫監視功能發生障礙有關。在TLRs信號傳導的途徑中，MyD88是關鍵的接頭分子，是啟動下游信號轉導的靶分子[7]。MyD88表達激活可促進下游包括NF-κb在內的多條免疫途徑活化，促進體內各種炎癥因子的釋放。

表1 尖銳濕疣組織中IRAK1、IRAK4、TRAF6的表達[n(%)]

①A①B②A②B③A③B

圖1對照組(A)和尖銳濕疣組(B)中IRAK1的表達，EnVision兩步法圖2對照組(A)和尖銳濕疣組(B)中IRAK4的表達，EnVision兩步法圖3對照組(A)和尖銳濕疣組(B)中IRAK6的表達，EnVision兩步法

房婕等[8]發現，初發和復發尖銳濕疣患者外周血CD3+T細胞內MyD88和TRAF6蛋白表達顯著增加，而咪喹莫特聯合ALA-PDT治療組尖銳濕疣患者外周血CD3+T細胞內MyD88和TRAF6蛋白表達顯著降低。本課題組前期實驗亦表明，MyD88在尖銳濕疣患者中表達上調，且MyD88表達與血清TNF-α、L-10呈正相關。本實驗進一步對MyD88通路的關鍵因子檢測發現，IRAK1、IRAK4和TRAF6在對照組中無表達或呈低表達，而在尖銳濕疣觀察組中普遍呈高表達，兩組相比差異均有統計學意義。MyD88與IRAK4結合后，會促進IRAK4介導的IRAK1磷酸化，高磷酸化的IRAK1進入胞質募集可溶性TRAF6，從而導致兩種不同信號途徑的激活[9-10]。因此，結合前期實驗[2-4]和本實驗結果，上述通路相關因子的激活可能與尖銳濕疣的發生、發展以及復發存在某種關聯性，提示在尖銳濕疣患者中，HPV感染可以激活MyD88依賴的信號傳導通路，MyD88可能通過IRAK1、IRAK4和TRAF6的激活實現對下游TNF-α、IL-10等各種免疫因子的調節，導致機體的免疫抑制和免疫損傷。

綜上所述，尖銳濕疣患者MyD88及其通路相關因子IRAK1、IRAK4、TRAF6的表達顯著高于常人，通過對其進行深入分析和研究將有助于臨床尋找預防及治療尖銳濕疣的新途徑。

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