高效液相色譜-熒光檢測法同時分析沼液中4種喹諾酮類抗生素

林曉旭何世妍葉永盛陳偉雪

(1廣東省測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）,廣東 廣州 510070)

(2廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司,廣東 廣州 510130)

高效液相色譜-熒光檢測法同時分析沼液中4種喹諾酮類抗生素

林曉旭1何世妍2葉永盛1陳偉雪1

(1廣東省測試分析研究所（中國廣州分析測試中心）,廣東 廣州 510070)

(2廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司,廣東 廣州 510130)

檢測沼液中的喹諾酮抗生素，可以避免抗生物污染問題。本文主要采用高效液相色譜-熒光檢測法分析沼液中4種喹諾酮抗生素藥物的含量。檢測發現，沼液中喹諾酮含量最高可達478μg/L，說明沼液抗生素污染已經成為重點問題，需要加強關注和治理。

沼液；喹諾酮類抗生素；高效液相色譜；熒光檢測法

動物由于難以吸收大部分抗生素，導致藥物以代謝的形式流入到環境中，對環境及生物的成長造成了巨大的影響。喹諾酮類抗生素具有抗菌、結構簡單以及低毒性等特點，目前已經廣泛的應用于禽畜的飼養中[1]。但是在目前的研究中，動物糞便中的喹諾酮抗生素殘留研究較多，而對沼液中的藥物鮮有研究，因此，探究沼液中的喹諾酮抗生素具有重要的價值。

1 實驗材料與方法探究

1.1 實驗儀器

高效液相色譜儀；色譜柱（250*4.6mm，Shim-Pack，VPODS）；真空泵；十二孔固相萃取裝置；超聲波清洗儀；固相萃取柱；抽濾裝置；玻璃纖維微膜（0.7μm）[2]

1.2 實驗試劑

環丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星以及恩諾沙星；四丁基溴化銨；氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸、檸檬酸、鹽酸等。

1.3 配置實驗溶液

緩沖液：配置0.1、0.2和0.4mol/L濃度的Na2EDTA、檸檬酸以及Na2HPO4混合溶液。之后配置McIIvaine緩沖液，采用0.1mol/L濃度的檸檬酸以及Na2HPO4混合。將兩種緩沖液混合，制作成Na2EDTA-McIIvaine緩沖液，PH為4.0.

1.4 樣本收集

取3個地區的沼液，在室溫下保存，運用濾紙過濾懸浮物，之后通過玻璃纖維過濾，取50ml，加入鹽酸調節PH到4.0，以1ml/min速率通過固相萃取柱，之后用甲醇洗脫至離心管，40℃下蒸發后用2ml超純水復溶，再過濾后存儲待測。

1.5 色譜條件及標準溶液配制

色譜柱溫度為30℃，流動相為10.1mol/L，熒光檢測波長為280nm，發射波長設置為450nm。

標準溶液分別配制成0.002、0.005、0.1、0.2、1、2和5mg/L溶液。

回收率（%）=（抗生素濃度-對照濃度）/加標劑量*100%。

2 結果與分析

2.1 選擇提取劑

經過綜合分析，發現使用Na2EDTA可以降低雜質，且成本較低。

2.2 色譜分離條件

實驗波長為280nm，發射波長為450nm，探究PH為2.0-4.0的分離效果。研究發現，PH=2.5-3.0時，可以較好的確定基線分離，出峰時間為25min左右。

在流速的確定方面，本次研究選擇了0.6、0.8以及1.0ml/ min三個流速，經研究，發現1.0ml/min為最佳流速。

2.3 回收率

在樣品中分別添加0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0mg/L溶液，每個樣本取三份樣品進行試驗，探究樣品回收率及偏差水平，發現4種喹諾酮抗生素的回收率在81.2%-104.6%之間，標準差＜10%，說明試驗成功。

2.4 實際檢測成果

利用上述試驗對收集的樣本進行喹諾酮抗生素檢測，檢驗成果說明豬糞發酵的沼液中，喹諾酮抗生素含量約為478μg/L；牛糞發酵的沼液中，喹諾酮抗生素含量約為182.6μg/L；雞糞發酵的沼液中，喹諾酮抗生素含量約為201.2μg/L；其可能是與獸藥以及動物的消化系統相關，導致研究結果存在差異。另外，環丙沙星的濃度為7-18μg/L，恩諾沙星為62-161μg/L；諾氟沙星為59-201μg/L；標準差＜10%。其可能是由于諾氟沙星的水溶性較好，容易排出，因此在沼液中的含量相對較高。具體檢測數值如表1所示。

表1 沼液中4種喹諾酮抗生素含量表

3 結語

采用固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測方式，可以較好的探究沼液中喹諾酮抗生素藥物的類型，檢測范圍可以達到0.004-0.01μg/ml，準確性較高，采用該方式對以雞糞、牛糞和豬糞發酵的沼液中發現，諾氟沙星在豬糞發酵中最高，恩諾沙星在牛糞發酵沼液中最高，氧氟沙星在雞糞發酵沼液中最高。

[1]王橋軍，亦如瀚，莫測輝.固相萃取-高效液相色譜-熒光法測定水中喹諾酮類抗生素[J].安徽農業科學，2011，12:7272-7274.

[2]戴曉虎，薛勇剛，劉華杰，等.基于固相萃取及高效液相色譜-熒光檢測分析的污泥中氟喹諾酮類抗生素研究方法的開發[J].環境科學，2016，04:1553-1561.