實驗室能力驗證技術要點

能力驗證是指認可機構為確保實驗室維持較高的校準和檢測水平而對其能力進行考核、監督和確認的一種活動，是評價實驗室檢測結果真實水平的有效手段，也是實驗室質量管理體系持續改進和不斷提高的有效措施。要做好農產品農藥殘留能力驗證實驗需要把握好幾個關鍵點。

一、 能力驗證前的準備工作

1、 標準溶液的配置

對照標準物質證書、確認有效期、純度、結構和分子量、根據標識的純度等內容進行換算。選擇合適的標準溶液線性范圍，線性范圍的設置會影響定量結果的準確性和線性系數。通常選擇3-4個濃度點，標準曲線的最低點為檢測限濃度點的二分之一左右，待測樣品的濃度最好在曲線的中間位置，這樣定量會更準確，具體線性范圍則根據需要檢測的樣品濃度決定。

2、 試劑、器皿的處理

為確保實驗過程中對所用試劑的進行控制，必須做樣品空白實驗，確保試劑空白的峰面積在檢測限以下，否則需要更換試劑，或將試劑重熏蒸后使用。配置溶液應使用檢定過的移液管或經計量合格后準確無誤的移液槍。使用前將所用的實驗器皿按照要求進行清洗，若按照NY/T 761-2008標準操作實驗，玻璃器皿在清洗后，需要用乙腈溶液進行潤洗，盡量減少引入外來的污染因素，所用到的器皿必須在檢定周期內。

3、 儀器條件的優化

對實驗過程中涉及的儀器設備進行核查，確保在檢定或校準有效期內，并且滿足實驗要求。特別是要對檢測儀器的精準度和靈敏度進行確認，如達不到檢測要求需對儀器進行調整。同時將新配置的標準溶液與以前的標準溶液同時上機測定，比較響應值，正常情況下響應值應一致，或有所提高，若新配標準溶液靈敏度不如以前，需要查找原因并優化儀器。

4、 樣品前處理方法的確定

重點把握方法的原理和關鍵點，明確每個步驟的目的，應該怎樣進行正確的操作，同時保證操作的穩定性和一致性。對檢測限和定量限進行加標測定，準確度和精密度要滿足方法的要求。如未能達到，需對操作的每個步驟進行分解查找原因，是方法問題還是操作問題，該怎樣解決，確保這一環節的準確無誤。

在NY/T 761-2008蔬菜水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥殘留的測定中要注意一下幾點：1、提取步驟的過濾用的濾紙應用定性濾紙。2、提取步驟的靜止時間不能過長，不能超過40分鐘。3、凈化步驟的水浴溫度要嚴格按照方法要求的溫度。4、要控制好凈化步驟的氮吹切記不要吹的太干，吹到潮乎乎為宜。

二、 能力驗證實驗中的質量控制

在做實際樣品時同步做質控樣品是為了保證檢測結果的可控性，達到預定的精確程度，為達到這一預定的目的所采取的工作步驟都必須是事先規劃好了的。過程中需要注意兩點：

1、 同步做質控樣品

質控樣品和待檢樣品必須同時操作，質控樣品的添加濃度通常選擇2-5倍定量限的添加水平，濃度水平盡量與所測樣品的濃度保持一致，不能相差過大。質控樣品可以選擇在空白樣品的基礎上進行加標，也可以采用已知量值得陽性樣品來進行檢驗。同時確保質控樣品和待檢樣品檢測時每個步驟操作的一致性，降低誤差。

2、 雙人負責制

樣品檢測需要按照一人主檢，一人監督復核的模式操作。雙人負責可以避免偶然誤差的發生。檢驗人員必須為有經驗，長期從事農產品檢測的技術人員擔任，熟悉檢驗方法，能把握操作中的關鍵步驟，對于檢驗過程中的突發事件能正確應對處理。

3、 基質效應的消除

所謂基質，是指樣本中除分析物以外的組成，基質常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，因為響應值的專屬性不強，即響應值可能是其他物質的響應，可能會減少響應，也可能會增加響應，不可預測，因此會影響分析結果的準確性，需要采取方法消除基質效應。在水產品農殘檢測中，通常可以采用標準添加法，也就是通過標準添加法做標準曲線，即在篩選出的空白樣品（基質最好與能力驗證樣品一致）中添加3-4濃度的標準溶液，同待測樣品一樣進行前處理，上機測定后作為定量標準曲線使用。

4、 能力驗證樣品的處理

能力驗證樣品到達實驗后，充分解凍，加入內標（內標最好使用同位素內標）后在避光冷藏處放置半小時后再按照規定的檢測方法操作，保證待測物和內標物的一致性。

5、 規范樣品測定順序

為防止待測液衰減，在前處理結束后樣品需及時上機操作并處理數據。樣品的測定順序按照先測試劑空白和樣品空白，再測低濃度樣品。最后測高濃度樣品的順序，防止高濃度樣品污染儀器，對后續樣品造成影響。在樣品測定序列穿插標準溶液的測定，根據標準溶液的響應值，可以掌握儀器的工作狀態。每個樣品需要上機平行測定兩次，可以降低因儀器不穩定造成數據存在誤差。如果發現數據不正常，需要進幾針試劑或更換離子傳輸管，先進行這些簡單步驟的操作來清潔儀器，若無法恢復正常，再進一步排查。

三、 數據上報前的結果分析

1、 結果須取平均值

取平均值的目的是避免偶然誤差，降低操作誤差，提高可信度。在檢測過程中有時會發現三個能力驗證樣品中有兩個的結果平行性較好，有一個數值偏離一些，在我們無法確認哪一個數值更接近真值時，就必須取數據的平均值，減少誤差。忌諱人為剔除平行性差的樣品結果，將自認為平行性號的樣品重復測定多次后取平均值上報，這樣操作的后果有時反而將真實結果排除在外了。

2、 分析質控樣品數據

根據質控樣品的回收率和精密度數據，分析此次檢驗過程的質量。必要時對比質量控制圖進行分析，明確此次能力驗證檢測結果的整體水平是偏低還是偏高，對數據的把控做到心中有數。

3、對能力驗證樣品結果的判別

仔細分析樣品檢測過程，譜圖、計算及結果數據，特別是對于能力驗證樣品中添加濃度含量低的化合物，著重比較試劑空白和樣品空白的譜圖，盡量防止出現漏判、誤判的可能性。