石榴皮中黃酮類化合物提取工藝優化及含量測定

牛俊樂+黃斌+黃秋月

摘 要：該試驗以胭脂紅石榴果皮為原料，采用乙醇提取法，借助于正交試驗結果分析對其果皮黃酮類化合物提取工藝進行優化方案分析，并用最優提取工藝測定其黃酮類化合物的含量。結果表明：黃酮類化合物最適提取工藝條件為乙醇體積分數70%，提取時間40min，料液比1∶40，此時提取的石榴皮黃酮類化合物的含量為148.09mg/g。

關鍵詞：石榴皮；黃酮類化合物；提取工藝；優化

中圖分類號 TS201 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）04-0074-02

石榴（Punica granatum L.），又稱為安甘石榴、安石榴[1]等，石榴果肉中具有很高的營養價值和醫用保健價值，含有大量的糖類物質、氨基酸、必需微量元素及各種維生素等[1]；石榴皮含有蘋果酸、枸椽酸以及大量的黃酮類化合物[2]。而黃酮類化合物既有保健功能，又有藥理價值，無論是在清除自由基方面，還是在抗癌、防癌方面都有著到不容小覷的作用。

隨著科研技術的發展，黃酮類化合物的提取測定方法也多種多樣，其中可以單獨使用的方法有超聲提取法、微波法、有機溶劑浸提法及超臨界提取等[3-6]。目前，紫外分光光度法、高效液相色譜法及顏色判別法是黃酮分離及鑒定的重要途徑[7]。經過科學研究證明，超聲波乙醇法提取黃酮的得率最佳[8-9]，本試驗即采用超聲波乙醇法并結合分光光度來測定黃酮含量。本試驗對石榴皮的黃酮類化合物進行提取測定和工藝優化，為今后石榴皮中黃酮類化合物的提取提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 試驗材料為新鮮采摘的普通胭脂紅石榴。挑選無病蟲害的洗干凈進行人工去皮，去隔瓤后切成小片，置于烘箱中70～80℃下3～5h烘干、碾碎，再用過濾網過濾，最后密封保存于干燥避光處待用。試驗儀器：FAI204B電子分析天平、KQ-200KDB型高功率數控超聲波清洗器、電熱恒溫鼓風干燥箱、16s紫外可見分光光度計、石英比色皿、具塞比色管、容量瓶、研缽、漏斗、具塞三角瓶等。

1.2 試驗方法

1.2.1 黃酮類化合物的提取 采用超聲波乙醇提取法。蘆丁標準曲線的制備：精密吸取0.032mg/mL的蘆丁標準溶液0、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別放至6個10mL的具塞刻度試管中（帶標簽），用60%乙醇定容至10mL，輕輕震蕩使其均勻。用標準管在紫外分光光度計進行吸收光譜掃描（掃描波長范圍為190～400nm），測出蘆丁的最大吸收波長為258nm，因此本實驗在258nm下直接測定吸光值。數據記錄見圖1。

1.2.2 石榴果皮黃酮類化合物的測定方法

1.2.2.1 石榴皮中黃酮類化合物提取的單因素試驗 精確稱取1.000 0g石榴皮粉末，對乙醇體積分數、提取時間、料液比3個因素設計不同水平進行單因素試驗，在258nm下測定吸光值，考察各因素對總黃酮含量影響。各因素水平如表1所示。

1.2.2.2 石榴皮中黃酮類化合物提取的正交試驗 在單因素試驗的基礎上，選擇合適的乙醇體積分數、料液比、提取時間，設計3因素3水平，進行L9（33）正交試驗并進行方差分析；選取最優方案進行驗證試驗，通過計算則可得出石榴皮在最佳條件下的黃酮類化合物含量。

1.3 數據處理 采用SPSS進行試驗數據分析。

2 結果與分析

2.1 正交試驗結果分析 由表2可知：以測得其吸光值為參考指標時，影響石榴皮中黃酮類化合物提取因素的主次順序為：乙醇體積分數>提取時間>料液比。而在提取時間40min、料液比1∶40、乙醇體積分數70%時，提取的石榴皮的黃酮類化合物含量最高。由表3方差分析結果可以看出，在山胭脂紅石榴黃酮類化合物提取過程中，A提取時間對黃酮類化合物提取影響顯著；C乙醇體積分數對黃酮類化合物提取有極顯著影響；而B料液比則無顯著影響。這與表2極差分析結果一致。

2.2 驗證試驗 以最適工藝A3B3C2，即提取時間40min、料液比1∶40、乙醇體積分數70%，進行石榴皮中黃酮類化合物提取優化工藝驗證試驗。由表4可知：石榴皮中黃酮類化合物的提取在最優工藝下均高于正交試驗中任何一組試驗，說明通過正交試驗優化的提取工藝參數比較穩定，重現性好，適用于石榴皮中黃酮類化合物的提取。用紫外分光光度計測定得出其平均吸光值為0.601，黃酮類化合物的含量為148.09mg/g。

3 結論與討論

本試驗以胭脂紅石榴果皮為原料，采用乙醇超聲提取法，借助于正交試驗對其黃酮類化合物提取工藝進行優化，并用最優提取工藝測定其黃酮類化合物含量。研究結果表明：最優提取工藝條件為：乙醇體積分數70%，提取時間40min，料液比1∶40，測得黃酮類化合物的含量為148.09mg/g。

關于黃酮類化合物的測定方法有多種，本試驗采用的是乙醇超聲提取法。許宗運[10]等研究發現石榴皮中平均總黃酮含量為66.5mg/g；劉素果[11]等采用了優化條件提取石榴皮中的黃酮類物質，研究發現石榴皮黃酮含量為131.74mg/g。與許宗運等的研究相比，本試驗石榴皮黃酮類化合物含量偏高，可能是由于石榴品種、產地、成熟期、試驗條件、儀器及人為因素誤差等不同的影響所導致的。本試驗測得的數據則對今后石榴皮黃酮的提取研究測定提供了一定的理論依據。

參考文獻

[1]賀小賢.石榴酒的加工技術[J].農產品加工，2003，9（8）：18-19.

[2]李海霞，王釗，劉延澤.石榴科植物化學成分及藥理活性研究進展[J].中草藥，2002，33（8）：765-766.

[3]周光理.食品分析與檢驗技術[M].北京：化工工業出版社，2010.

[4]葉春.對40種新鮮蔬菜中總黃酮含量的測定[J].同地農業生物學報，2000，19（2）：121-124.

[5]孫玲.黑米資源的黃酮含量及其與粒形性狀的相關性[J].湖北農學院學報，2000，20（1）：l-6.

[6]侯玉澤，丁曉雯.食品分析[M].鄭州：鄭州大學出版社，2011.

[7]朱思明，于淑娟，扶雄.橙皮苷提取方法的研究[J].食品研究與開發，2009，30（7）：17-20.

[8]朱遠平，牟利輝.紫外分光光度法測定金柚柚皮中總黃酮的含量[J].嘉應學院報，2006，3（6）：51-54.

[9]廖彪，魯緒會.紫外分光光度法測定柑橘皮中總黃酮的含量[J].安康學院學報，2009，22（1）：88-89.

[10]許宗運，蔣慧，吳靜，等.石榴皮和石榴渣總黃酮含量的測定[J].中國農學通報，2003，19（3）：73-75.

[11]劉素果.石榴果皮總黃酮的提取工藝[D].合肥：安徽農業大學，2010.