飛龍掌血醇提物藥理作用研究及急性毒性試驗(yàn)

趙春梅+劉發(fā)梅+楊和金

摘要：目的 觀察飛龍掌血醇提物的藥理作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭體法、小鼠二甲苯耳廓腫脹、小鼠剪尾法及玻片法止血實(shí)驗(yàn)，以及急性毒性試驗(yàn)。結(jié)果 飛龍掌血醇提物能減少醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，促進(jìn)小鼠凝血時(shí)間，但不能促進(jìn)小鼠剪尾止血時(shí)間。飛龍掌血醇提物最小致死量為10.56 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥245.58 g/kg.bw），死亡率為10%。最大耐受量為9.50 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥220.93 g/kg.bw），死亡率為0%。結(jié)論 提示飛龍掌血醇提物具有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用，且具有一定毒性。

關(guān)鍵詞：飛龍掌血醇提物；鎮(zhèn)痛；抗炎；止血

中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2017）02-0080-03

【Abstract】Objective： To observe the pharmacological action and acute toxicity of alcohol extract from Asiatic Toddalia Root. Methods： The experiments were conducted by mouse acetic acid writhing method， mouse xylene ear swelling， mouse tail cut method and slide method hemostasis test and acute toxicity test. Results： The ethanol extract from Asiatic Toddalia Root could decrease the number of writhing reaction induced by acetic acid， decrease the ear swelling of mice induced by xylene and promote the clotting time of mice， but could not promote the hemostasis time of mice. The minimum lethal dose of the ethanol extract was 10.56 g/kg. bw （equivalent to crude drug 245.58 g/kg.bw）， and the mortality was 10%. The maximum tolerance was 9.50 g/kg.bw （equivalent to 220.93 g/kg.bw of crude drug）， and the mortality was 0%. Conclusion： The study presents alcoholic extract from Asiatic Toddalia Root has obvious analgesic， anti-inflammatory and hemostatic effects， with certain toxicity.

【Key words】alcohol extract from Asiatic Toddalia Root， analgesic， anti-inflammatory， hemostasis

飛龍掌血為蕓香科植物飛龍掌血Toddalia asiatica（L.）Lam.[Paullinia asiatica L.]的根或根皮。全年均可采收，挖根，洗凈，鮮用或切段曬干。功效：祛風(fēng)止痛；散瘀止血；解毒消腫。主風(fēng)濕痹痛；腰痛；胃痛；痛經(jīng)；經(jīng)閉；跌打損傷；勞傷吐血；衄血；瘀滯崩漏；瘡癰腫毒[1]。對飛龍掌血的藥理作用研究極少，因此，本文對飛龍掌血的乙醇提取物進(jìn)行了藥理研究，探討其在鎮(zhèn)痛、抗炎、止血方面的藥理作用，為將來開發(fā)應(yīng)用飛龍掌血提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下：

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物 飛龍掌血醇提取物，由云南省藥物研究所提供，70%乙醇提取3次，減壓回收，干燥。提取率為46.1%。使用時(shí)用純水配制。藥效試驗(yàn)給藥劑量以急性毒性試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)確定。阿司匹林腸溶片，100 mg/片，Bayer Schering Pharma生產(chǎn)，批號：BJ10778；云南白藥，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號：ZAA1323；冰醋酸，天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠，批號：020112；二甲苯，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，批號：20090831。

1.2 動(dòng)物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號：SCXK（粵）2013-0002。小鼠分性別飼養(yǎng)于空調(diào)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，室溫25±2℃，相對濕度40～70%，喂顆粒標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水和攝食。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（x±s，n）表示，n是每組動(dòng)物數(shù)目。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行“Independent-Samples T Test”檢驗(yàn)。

2 方法

2.1 鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 取小鼠48只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，組別及劑量如表1，按照表1劑量ig給藥，每日1次，連續(xù)8天。末次給藥后45min，ip0.6%冰醋酸0.1mL/10 g/只，記錄15min內(nèi)的扭體反應(yīng)（小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹、軀干與后肢伸張，臀部抬起反應(yīng)為準(zhǔn)）次數(shù)，并計(jì)算其抑制率。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

飛龍掌血醇提取物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相當(dāng)于生藥69.77 g/kg，139.53 g/kg）的劑量連續(xù)灌胃給藥3天，2組均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，抑制率分別為：53.16%、47.88%，尤以3.0 g/kg，6.0 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出鎮(zhèn)痛作用。

2.2 抗炎試驗(yàn) 選用小鼠48只，按體重隨機(jī)分為4組，每組雌雄各6只，分組及給藥情況見表2。各組均預(yù)先每日灌胃給藥1次，連續(xù)9天，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20 mL/kg體重。末次給藥后30 min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂為對照。致炎后1h脫頸椎處死動(dòng)物，用直徑6 mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，取耳片稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。實(shí)驗(yàn)見表2。

飛龍掌血醇提取物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相當(dāng)于生藥69.77 g/kg，139.53 g/kg）的劑量連續(xù)灌胃給藥4天，2組均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，抑制率分別為：45.84%、41.14%，尤以3.0 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出抗炎作用。

2.3 止血試驗(yàn)（剪尾法） 取小鼠48只，體重（20±2）g，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，按照劑量ig給藥，每日1次，連續(xù)4天。末次給藥后45 min，將小鼠四肢固定在操作臺(tái)上用剪刀將小鼠尾尖剪斷2 mm，待血液溢出時(shí)，用秒表開始計(jì)時(shí)，每隔30 s用濾紙吸去血滴直至血液不再溢出為止，計(jì)算止血時(shí)間，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)見表3。

飛龍掌血醇提物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相當(dāng)于生藥69.77 g/kg，139.53 g/kg）的劑量連續(xù)灌胃給藥4天，2組均能不同程度促進(jìn)小鼠剪尾止血時(shí)間，促進(jìn)率分別為：29.41%、38.24%，但與空白對照組相比較沒有顯著性差異。未顯示出止血作用。

2.4 止血試驗(yàn)（玻片法） 選用18～22 g小鼠48只，按體重隨機(jī)分為4組，每組雌雄各6只，各組均預(yù)先每日灌胃給藥1次，連續(xù)5天，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20 mL/kg體重。末次給藥 45 min后毛細(xì)管眼眶取血，滴于載波片，血滴直徑約 5 mm，立即用秒表記時(shí)。每隔30 s用清潔的7號注射針頭自血滴邊緣向里輕輕撥動(dòng)，觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止即為凝血時(shí)間。見表4。

飛龍掌血醇提物以3.0 g/kg，6.0 g/kg（相當(dāng)于生藥69.77 g/kg，139.53 g/kg）的劑量連續(xù)灌胃給藥5天，2組均能不同程度縮短小鼠摘眼球凝血時(shí)間，抑制率分別為：49.32%、53.29%，與空白對照組相比較具有顯著性差異（P<0.05，P<0.05）。顯示出止血作用。

2.5 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.5.1 正式實(shí)驗(yàn) 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，將KM小鼠，60只隨機(jī)分為3組，即溶媒對照組和飛龍掌血10.56、9.50 g/kg.bw2個(gè)劑量組，每組20只，♀♂各10只。動(dòng)物禁食不禁水約6～6 h 21 min后，按40 mL/kg體重一次灌胃給予相應(yīng)供試品，觀察其急性毒性反應(yīng)和死亡情況，以后每天觀察1次，連續(xù)14天；于給藥第4、7、14天稱量體重；觀察結(jié)束處死動(dòng)物，大體解剖觀察各動(dòng)物臟器、器官的體積、顏色、質(zhì)地等有無明顯異常。

2.5.2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.5.2.1 毒性反應(yīng) 小鼠灌胃給予供試品飛龍掌血醇提物后，在4 h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)減少、俯臥等，死亡動(dòng)物出現(xiàn)驚厥、抽搐、角弓反張等反應(yīng)。至第2天恢復(fù)。給藥組動(dòng)物的毒性反應(yīng)見表5。

2.5.2.2 死亡情況 觀察期內(nèi)10.56 g/kg.bw雌性小鼠死亡1只，雄性小鼠死亡1只，死亡率為10%；9.50 g/kg.bw劑量組無小鼠死亡，死亡率為0%。

2.5.2.3 體重 試驗(yàn)期間，給藥后第3、7、14天，各劑量組小鼠體重持續(xù)增長，與溶媒對照組比較無顯著性差異（P>0.05）。見表6。

2.5.2.4 解剖觀察 觀察14天結(jié)束后脫頸椎處死的動(dòng)物進(jìn)行大體解剖觀察，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔，各組織和器官的體積、顏色、質(zhì)地等，飛龍掌血醇提物各劑量組、溶媒對照組各小鼠器官均無肉眼所見異常。

2.5.3 評價(jià)與結(jié)論 在本實(shí)驗(yàn)條件下，對飛龍掌血醇提物不同劑量進(jìn)行24 h內(nèi)小鼠單次灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)，可見動(dòng)物于4 h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)減少、俯臥等，死亡動(dòng)物出現(xiàn)驚厥、抽搐、角弓反張等反應(yīng)。至第2天恢復(fù)。試驗(yàn)結(jié)束對存活動(dòng)物進(jìn)行大體解剖觀察，各組動(dòng)物臟器、器官的體積、顏色、質(zhì)地等均未見明顯異常。飛龍掌血醇提物24 h內(nèi)小鼠灌胃給藥最小致死量為10.56 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥245.58 g/kg.bw），死亡率為10%。最大耐受量為9.50 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥220.93 g/kg.bw），死亡率為0%。

3 討論與小結(jié)

飛龍掌血是云南民間常用藥。具有祛風(fēng)止痛；散瘀止血；解毒消腫的功效。飛龍掌血藥理作用的活性成分及其作用機(jī)制研究較少。為了探討和開發(fā)飛龍掌血的藥用價(jià)值，本文對其進(jìn)行了鎮(zhèn)痛、抗炎、止血藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果表明，急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示，飛龍掌血醇提物24 h內(nèi)小鼠灌胃給藥最小致死量為10.56 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥245.58 g/kg.bw），死亡率為10%。最大耐受量為9.50 g/kg.bw（相當(dāng)于生藥220.93 g/kg.bw），死亡率為0%。表明其具有一定毒性。飛龍掌血能抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，可顯著縮短小鼠凝血時(shí)間，說明飛龍掌血具有鎮(zhèn)痛作用、抗炎作用、止血作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為飛龍掌血將來產(chǎn)品研發(fā)和臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

（收稿日期：2016-10-11）