蒙古蕕組培快繁技術研究

李相儒　袁勤

摘要 以蒙古蕕一年生樹上的當年生嫩枝作為材料，研究了誘導、增殖、分化、生根培養基篩選、移栽等組培快繁技術，旨在為蒙古蕕工廠化育苗奠定技術基礎。結果表明：蒙古蕕誘導最適培養基為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.02 mg/L GA；最適增殖擴繁及生根培養基為MS，且培養基MS中加入20 mg/L矮壯素矮化促壯效果最好；組培苗移栽成活率可達85%以上。

關鍵詞 蒙古蕕；組培快繁；移栽

中圖分類號 Q943.1；S793.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）21-0116-02

蒙古蕕（Caryopteris mongolica Bunge）隸屬馬鞭草科（Verbenaceae）蕕屬（Caryopteris）旱生灌木，是國家三級保護稀有種，主要分布于我國和蒙古國的部分地區，常生長于海拔 1 100～1 300 m 的干旱草原和荒漠的石質山坡、沙地、干旱河床及溝谷等地。馬鞭草科中諸多植物具有較高的經濟價值，有廣闊的開發利用前景，蒙古蕕是其中的一種。蒙古蕕具有顯著的多種用途的特性使其成為我國干旱和半干旱地區生態脆弱帶極好的生態樹種[1-2]。近年來，我國學者對蒙古蕕的花粉形態、生物學特性生態學特性、營養成分、經濟價值、植物區系地理成分、形態組織、化學成分和引種栽培管理等方面進行了研究，但并未見到關于蒙古蕕組培方面的相關研究[3-5]。

蒙古蕕具有較高的科研及經濟價值，由于放牧破壞，加之人工砍伐燒柴，使之種群數量日益減少，種子較難獲取。本研究進行蒙古蕕組培快繁技術研究，一方面填補國內蒙古蕕組培方面無研究的空白，另一方面對稀有種起到保護繁育作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

蒙古蕕新梢于2015年8月采自億利資源集團沙旱生態科技園智能溫室苗床區，為一年生樹上的當年生嫩枝，將嫩枝剪成10 cm的小段，清水沖洗干凈后備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養基制備。選取4種配方不同的培養基作為誘導培養基，以MS為基礎培養基，各培養基中均添加30 g/L蔗糖、7 g/L瓊脂，培養基pH值在分裝前調至7，培養基在分裝后放在121～123 ℃的條件下滅菌20 min。4種培養基配方如下：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA（M1）、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.01 mg/L GA（M2）、MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.02 mg/L GA（M3）、MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA（M4）。

選取4種配方不同的培養基作為增殖培養基，各培養基中均添加30 g/L蔗糖、7 g/L瓊脂，培養基pH值在分裝前調至7，培養基在分裝后放在121～123 ℃的條件下滅菌20 min。4種培養基配方如下：

1/2MS（S1）、MS（S2）、1/2MS+0.1 mg/L 6-BA（S3）、MS+0.1 mg/L 6-BA（S4）。

1.2.2 外植體的建立與啟動培養。取新抽生的未木質化的嫩莖作為外植體，從葉柄處剪去葉片，再用蒸餾水沖洗4～5遍，浸泡在蒸餾水中，移到超凈臺上，在75%酒精中浸泡30 s，再用0.1%氯化汞溶液浸泡9 min，其間不斷震搖，使材料和消毒液充分接觸，消毒后用無菌水沖洗4～5次，將新梢分別剪成帶1個腋芽的莖段，接種到4種誘導培養基中，每瓶接種1個莖段。然后放在培養室中培養，要求溫度24～26 ℃，光周期12 h，培養室光照強度2 000 lx，每天光照13～15 h。接種30 d后，調查外植體的啟動生長狀況。每個處理分為3組，每組80瓶[6]。

1.2.3 增殖培養及生根培養。選取啟動培養基成活率高且玻璃化率低的一組組培苗，將初培養的健壯瓶苗植株切成每段含1～2個腋芽的莖段，轉入以上4種增殖培養基中進行增殖培養，觀察其生長狀況。每個處理分為3組，每組50瓶。

1.2.4 瓶苗矮化促壯。以MS為基礎培養基，分別加入10、20、30、40、50、70 mg/L 6種不同濃度的矮壯素，每個處理分為3組，每組30瓶。將生長情況基本一致的蒙古蕕組培苗轉接至6種培養基中，觀察生長情況。

1.2.5 瓶苗的馴化移栽。將生長60 d的組培苗和生長30 d的組培苗同時進行煉苗，閉瓶煉苗5 d左右，移栽前2～3 d開蓋煉苗，每天對瓶苗噴水1次，以保持瓶內足夠的濕度。3 d后取出組培苗，用清水洗凈根上的培養基，分別栽入用MS營養液與蛭石基質按1 L∶1.5 kg的比例混合的基質和溫室裸地栽培區。栽后用棚膜遮蓋進行保溫、定時噴水保濕。待幼苗開始生長后揭去棚膜。蛭石基質栽培苗30 d后移入溫室裸地栽培區，定期噴水。每個處理分為3組，每組30株。

2 結果與分析

2.1 外植體在不同培養基上的誘導分化效果

由表1可知，同一新梢的外植體在不同的培養條件下其成活率及玻璃化率明顯不同，處理M3誘導蒙古蕕外植體成活率高達96.77%，且玻璃化率只有20.00%；其次是處理M1，成活率高達81.25%，且玻璃化率為26.92%；處理M2、M4成活率在55%～70%，但其玻璃化率較高。因此，培養基M3可作為誘導分化的最佳培養基。

2.2 不同濃度激素配比對蒙古蕕生根的影響

試驗表明，蒙古蕕的增殖培養與生根培養可在同一培養基下進行，且蒙古蕕在增殖培養過程中無愈傷組織出現，可大大加快繁殖速度，降低生產成本。由表2可知，將瓶苗放到增殖培養基中，7 d左右開始生根，4種增殖培養基中，以1/2MS為基礎培養基的S1、S3生根率較低，都在5%以下；以MS為基礎培養基的S2、S4生根率較高且以培養基S2為最好，可作為增殖生根的最佳培養基。

2.3 矮壯素梯度試驗結果

由表3可知，矮壯素的加入，對株高有明顯的抑制作用。濃度越高，株高迅速下降。矮壯素的濃度從0～40 mg/L，平均株高逐漸變小，但濃度從30 mg/L開始植株葉片開始發育不良；矮壯素濃度在50、70 mg/L時株高明顯降低且生長緩慢，矮而不壯，此時植株的上部及葉片發育不良。因此，高濃度的矮壯素，不利于蒙古蕕的矮化促壯。附加20 mg/L矮壯素的生根培養基，苗矮壯，葉片肥厚，起到矮化植株的作用，為后期無菌苗的移栽成活提供了保障。

2.4 不同移栽方法及苗木質量對移栽效果的影響

根據觀察結果，蒙古蕕組培苗的緩苗期為5～8 d。蒙古蕕煉苗后成活率為90.68%，顯著高于未煉苗處理（72.31%）。將生長30 d煉苗后的蒙古蕕組培苗栽入蛭石基質中成活率較高，成活率可達到88.89%，而直接移栽至大田里成活率很低，只有10%～20%；生長60 d的組培苗在基質及大田中成活率都很低。總體來看，蒙古蕕組培苗生長30 d經過煉苗后先移栽到基質里進行培養，可大大提高成活率。

3 結論

優良的快繁體系是利用組織培養實現工廠化育苗的保障，在組織培養中無菌苗的建立是組培快繁的基礎，而外植體的快速啟動是再生體系建立的關鍵。因此，用培養基MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.02 mg/L GA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂，pH值=7.0培養后誘導分化效果最好，適合作為啟動培養基；繼代增殖培養及生根培養中使用MS培養基較為合適，生根率也較高；培養基MS中加入20 mg/L矮壯素矮化促壯效果最好，可為后期無菌苗的移栽成活提供保障；蒙古蕕組培苗生長30 d經過煉苗后先移栽到基質里進行培養，成活率可達85%以上。

移栽馴化是工廠化育苗能否成功的關鍵，優質的苗木是移栽成活的關鍵，因此在基質內移栽成活較高外還需摸索其他移栽方法，提高移栽成活率，達到工廠化育苗的要求。

4 參考文獻

[1] 王曉江，李愛平.生態灌木蒙古蕕的生物生態學特性及其經濟價值評價[J].干旱區資源與環境，2006，20（2）：191-194.

[2] 郭春燕.蒙古蕕生殖生物學研究[D].呼和浩特：內蒙古農業大學，2009.

[3] 謝乾瑾.蒙古蕕抗旱生理生態特性的研究[D].北京：北京林業大學，2011.

[4] 李勃，高鴻永.基質和沙土不同配比對蒙古蕕容器苗生長的影響[J].草原與草業，2015，27（1）：54-56.

[5] 高建平.蒙古蕕的胚胎學研究[D].呼和浩特：內蒙古農業大學，2010.

[6] 陳翠林，李芳，王麗，等.蕕屬（Caryopteris）植物研究進展[J].林業調查規劃，2008（4）：31-35.