HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地五味子中4種木脂素類成分的含量Δ

沈曉君，劉玉翠，曲曉波，雷鈞濤，肖井雷#（.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 07；.吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，長(zhǎng)春 00；.吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林吉林 0）

HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地五味子中4種木脂素類成分的含量Δ

沈曉君1＊，劉玉翠2，曲曉波1，雷鈞濤3，肖井雷1#（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117；2.吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，長(zhǎng)春 130031；3.吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林吉林 132013）

目的：建立同時(shí)測(cè)定五味子中4種木脂素類成分的含量，并比較不同產(chǎn)地間的差異。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Hypersil ODS-C18，流動(dòng)相為乙腈-水（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為217 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素檢測(cè)進(jìn)樣量線性范圍分別為0.375 3～2.251 8 μg（r＝0.999 6）、0.056 8～0.341 1 μg（r＝0.999 8）、0.077 4～0.464 4 μg（r＝0.999 3）、0.310 5～1.863 0 μg（r＝0.999 8）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2.0%；加樣回收率分別為97.94%～100.30%（RSD＝0.98%，n＝6）、97.59%～99.61%（RSD＝0.73%，n＝6）、100.86%～103.10%（RSD＝0.83%，n＝6）、98.39%～101.03%（RSD＝1.03%，n＝6）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，可用于五味子中4種木脂素類成分含量的同時(shí)測(cè)定；不同產(chǎn)地五味子中上述4種木脂素類成分含量具有較大差異。

不同產(chǎn)地；五味子；木脂素；高效液相色譜法

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實(shí)。我國(guó)五味子資源豐富，家種也比較成熟，東三省是其主要產(chǎn)區(qū)，內(nèi)蒙古、河北、山西、北京也有少量產(chǎn)出[1]。現(xiàn)代研究表明，五味子主要含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、維生素、木脂素、三菇、倍半菇及多糖等多種化學(xué)成分，木脂素類成分為其最主要的活性成分，主要含有五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲等[2]。為了準(zhǔn)確評(píng)價(jià)五味子藥材的質(zhì)量，本課題組對(duì)第四次全國(guó)中藥資源普查和藥材市場(chǎng)流通的31份商品進(jìn)行了木脂素類成分的比較研究，以為五味子藥材商品的質(zhì)量評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)提升提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010AHT型高效液相色譜（HPLC）儀，包括二極管陣列檢測(cè)器（日本Shimadzu公司）；SB-3200D型超聲波清洗機(jī)（杭州法蘭特超聲波科技有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）；AL204型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 試劑

五味子醇甲對(duì)照品（批號(hào)：110857-201412）、五味子酯甲對(duì)照品（批號(hào)：111529-201411）、五味子甲素對(duì)照品（批號(hào)：110764-201312）、五味子乙素對(duì)照品（批號(hào)：110765-201312）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度均＞98%；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

筆者采集了22個(gè)產(chǎn)地五味子藥材，并收集了9個(gè)市售商品（見表1），經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)姜大成教授鑒定均為真品。

表1 五味子藥材來源Tab 1 Source of S.chinensis

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（洗脫程序見表2）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：217 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL[3-6]。

表2 梯度洗脫程序Tab 2 Gradient elution program

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 分別精密稱取各待測(cè)成分對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成單一對(duì)照品貯備液。精密量取上述單一對(duì)照品貯備液各適量，制成五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素質(zhì)量濃度分別為0.125 1、0.018 95、0.025 8、0.103 5 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品粉末約0.3 g（過3號(hào)篩），精密稱定，置于25 mL量瓶中，加甲醇約2.0 mL，超聲處理20 min，加甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。結(jié)果表明，理論板數(shù)以各待測(cè)成分峰計(jì)均＞4 000；分離度＞1.5，各成分基線分離良好。

2.4 線性關(guān)系考察

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液3、5、8、10、12、15、18μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分進(jìn)樣量（x，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程與線性范圍，詳見表3。

表3 回歸方程與線性范圍Tab 3 Regression equation and linear range

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.06%、0.11%、0.09%、0.08%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：2）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、18、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.07%、0.15%、0.11%、0.09%（n＝7），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品（編號(hào)：2）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為1.5%、0.9%、1.4%、1.2%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量樣品（編號(hào)：2）適量，共6份，分別加入一定質(zhì)量的待測(cè)成分對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 4 Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測(cè)定

取31批次樣品各適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量[7-10]，結(jié)果見表5。

表5 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3，%）Tab 5 Results of content determination of samples（n＝3，%）

續(xù)表5Continued Tab 5

3 討論

筆者比較了甲醇、乙酸乙酯和乙醇3種溶劑對(duì)木脂素提取率的影響，結(jié)果顯示甲醇提取效果最佳；同時(shí)考察了超聲提取法和加熱回流提取法，結(jié)果顯示超聲提取效率高，并以提取20 min效果最佳。

由結(jié)果可知，五味子醇甲的含量范圍在0.365 3%～0.818 3%，其中吉林省樺甸市沿河村產(chǎn)者含量最低，吉林省撫松縣松江河鎮(zhèn)產(chǎn)者含量最高；五味子酯甲的含量范圍在0.048 4%～0.263 4%，其中遼寧省丹東市寬甸縣寬甸鎮(zhèn)產(chǎn)者含量最低，吉林省撫松縣松江河鎮(zhèn)產(chǎn)者含量最高；五味子甲素的含量范圍在0.056 9%～0.365 1%，其中遼寧省丹東市寬甸縣寬甸鎮(zhèn)產(chǎn)者含量最低，河北省承德市熱河產(chǎn)者含量最高；五味子乙素的含量范圍在0.185 2%～0.438 6%，其中四川荷花池中藥材市場(chǎng)商品含量最低，黑龍江省虎林市產(chǎn)者含量最高。

通過對(duì)31份五味子藥材商品中4種木脂素類成分的分析，得出不同產(chǎn)地五味子中木脂素類成分含量具有較大差異性，品質(zhì)間存在一定的差異。本研究為多指標(biāo)成分控制五味子飲片質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，同時(shí)為進(jìn)一步研究五味子及其制劑的質(zhì)量控制、藥理活性以及臨床使用提供了一定參考。

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Simultaneous Determination of 4 Lignans in Schisandra chinensis from Different Habitats by HPLC

SHEN Xiaojun1，LIU Yucui2，QU Xiaobo1，LEI Juntao3，XIAO Jinglei1（1.School of Pharmacy，Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.Jilin Zixin Pharmaceutical Co.，Ltd.，Changchun 130031，China；3.School of Pharmacy，Jilin Medical University，Jilin Jilin 132013，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the simultaneous determination of 4 lignans in Schisandra chinensis，and compare the differences among different habitats.METHODS：HPLC was performed on the column of Hypersil ODS-C18with mobile phase of acetonitrile-water（gradient elution）at a flow rate of 1.0 mL/min，the detection wavelength was 217 nm，column temperature was 30℃ and injection volume was 10 μL.RESULTS：The linear range was 0.375 3-2.251 8 μg for schizandrol A（r＝0.999 6），0.056 8-0.341 1 μg for schisantherin A（r＝0.999 8），0.077 4-0.464 4 μg for deoxyschizandrin（r＝0.999 3）and 0.310 5-1.863 0 μg for schisandrin（r＝0.999 8）；RSDs of precision，stability and reproducibility were lower than 2.0%；recoveries were 97.94%-100.30%（RSD＝0.98%，n＝6），97.59%-99.61%（RSD＝0.73%，n＝6），100.86%-103.10%（RSD＝0.83%，n＝6），98.39%-101.03%（RSD＝1.03%，n＝6），respectively.CONCLUSIONS：The method is simple with good precision，stability and reproducibility，and can be used for the simultaneous determination of lignans in S.chinensis；there are quite large differences in the contents of 4 lignans in S.chinensis from different habitats.

Different habitats；Schisandra chinensis；Lignan；HPLC

R284.1

A

1001-0408（2017）03-0387-04

2016-02-25

2016-06-12）

（編輯：張 靜）

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)（No.201207002-05）；吉林省中醫(yī)藥科技項(xiàng)目（No.2014-Q37）；吉林省教育廳“十三五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（No.吉教科合字〔2016〕第25號(hào)）

＊講師，碩士。研究方向：藥物質(zhì)量分析。E-mail：3089028512 @qq.com

#通信作者：副教授，碩士。研究方向：中藥資源與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化。電話：0431-81104585。E-mail：cc-xjl@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.03.28