中藥復方作為免疫增強劑在疫苗中的應用及可行性分析

姬星宇，焦金英，喬云龍，胡玉勝，李自波，李國輝，郭平霞

（商丘美蘭生物工程有限公司，河南 商丘 476000）

免疫佐劑是指當一種先于抗原或者與抗原混合或同時注射于動物體內，能非特異的改變或增強機體對該抗原的特異性免疫應答的物質。其作用特點是：能明顯增強多糖或多肽等抗原性微弱的物質誘導機體產生特異性免疫應答；用最少量的抗原和最少的接種次數刺激機體產生足夠的免疫應答和高滴度的抗體，在血液和黏膜表面能維持較長的時間，發揮持久效果［1］。

研究表明，許多單味中藥、中藥成分，乃至中藥復方都具有免疫增強作用，事實上，臨床上早已使用中藥方劑來提高免疫，如補中益氣湯、黃連解毒湯、四君子湯、四物湯、小柴胡湯、當歸散、玉屏風散、七補散、仙方活命飲和加減消毒飲等。中藥來源天然，安全可靠，與化合物免疫增強劑相比，具有毒副作用小、多效性、雙向調節性和無依賴性的特點，而且不易在畜產品中產生有害殘留，具有獨特優勢。

1 中藥復方免疫增強劑的研究進展

1.1 清熱解毒類

清熱解毒類中藥對畜禽感染性疾病的防治具有獨特的優勢，除能抑制大多數病原微生物生長繁殖外，還能增強動物的免疫功能。此類藥物中具有免疫增強的方劑有小柴胡湯、黃連解毒湯、清營湯、白虎湯等。長谷川格［2］探討了小柴胡湯對B細胞增殖與抗體產生系統有關的IL-4、誘導B細胞最終產生抗體的IL-6的影響，表明小柴胡湯能夠促進抗體生成，同時，小柴胡湯可作用于B細胞，使多克隆抗體增加，表明小柴胡湯具有免疫激活作用。王學斌［3］以黃連、黃芩、板藍根、黃芪、山茶葉、甘草等6種中藥組方，與法氏囊病毒疫苗混合后作為佐劑使用，可明顯促進抗體產生，提高脾臟和法氏囊指數以及E-玫瑰花環形成率。

1.2 補益類

此類藥物大多能提高機體免疫功能，且大多具有多糖成分。常用的方劑有補中益氣湯、四君子湯、玉屏風散等。復方四君子湯比單味人參煎液更能顯著提高紅細胞的免疫黏附能力及清除免疫復合物對抗抑制因子等作用。四君子湯有明顯的抗突變作用。在新城疫Lasota系凍干苗免疫試驗雞時，用加味四君子湯（人參、白術、茯苓、炙甘草、黃芪、當歸）煎劑，給雞自由飲水，連用4d，結果表明，加味四君子湯能有效提高雞的特異性免疫和非特異性免疫水平，在14、28和42日齡均可極顯著提高雞的淋巴細胞數和血液中新城疫的抗體水平［4］。劉倩嫻［5］等研究發現補中益氣湯20 g/kg、40 g/kg時對脾虛小鼠低下的IL-2、INF-γ活性有提高作用，進一步研究發現補中益氣湯整方提高INF-γ活性的作用明顯大于拆方。

1.3 活血化瘀類

常用方劑如四物湯、生化湯、當歸補血湯、白術散等。四物湯煎劑對小鼠單核巨噬細胞系統的吞噬功能具有明顯促進作用，能刺激提高小鼠特異性抗體的產生，能促進T細胞的轉化功能。給小鼠灌胃四物湯后，其脾臟、胸腺重量與對照組相比都明顯增加，且隨藥物劑量的增高而增加。四物湯能提高小鼠酸性酯酶陽性細胞的百分率，顯著促進自發性和ConA刺激的脾淋巴細胞增殖，提高抗體滴度和巨噬細胞吞噬雞紅細胞的百分率。當歸補血湯能顯著抑制小鼠肝癌Hca-F25/16A3淋巴結轉移率和淋巴結轉移程度，其作用機制是通過抑制脾細胞凋亡、增加淋巴細胞免疫活性來實現的［6］。

2 中藥復方免疫增強劑在疫苗中的應用

單味中藥可以增強免疫，但是，不同中藥對機體免疫系統增強的側重點不同，并非每味中藥都可以全面提高機體的免疫功能；另外，對不同的疫苗，中藥的免疫增強效果存在著差異，正是單味中藥成分在免疫增強方面的局限性，使得多種中藥成分組成的中藥復方作為免疫增強劑引起人們的重視。孫峻嶺［7］等分別用淫羊藿多糖加蜂膠黃酮、黃芪多糖加人參皂苷制成2個中藥成分復方，同時用相應的淫羊藿、蜂膠、黃芪和人參的提取物制成相應成分含量相同的2個中藥復方。試驗1用2個中藥成分復方分別配合兔瘟滅活苗免疫家兔，于免疫后用血凝抑制試驗法測定血清抗體效價的動態變化；試驗2將4個復方分別與滅活的新城疫強毒混合制成疫苗免疫雛雞，以白油佐劑苗、無佐劑苗和生理鹽水為對照，于免疫后用MTT法和血凝抑制試驗法檢測外周血淋巴細胞增殖和血清抗體效價的動態變化。結果表明，2個中藥成分復方能顯著提高家兔血清的兔瘟抗體效價，4個復方均能顯著促進雛雞淋巴細胞增殖和提高血清抗體效價，效果與白油佐劑苗相當。劉瑞生［8］等將黃芪多糖、淫羊藿多糖、左旋咪唑、維生素E及亞硒酸鈉制備成緩控釋復方免疫增強劑，在給雞注射ND-IB二聯弱毒疫苗時，配合使用緩控釋復方免疫增強劑，結果表明，緩控釋復方免疫增強劑可以顯著提高ND和IB的抗體效價；極顯著升高T淋巴細胞ERFC形成率。李星艷［9］等將由黃芪、茯苓、熟地、補骨脂、何首烏、淫羊藿、當歸、黨參、川芎、山楂、麥冬等中藥組成的復方，制備復方總多糖，連續給雞注射7 d后，接種禽流感-新城疫重組二聯活疫苗，采用β-微量法測定AI抗體效價，結果顯示，相較于單糖，復方多糖可以促進抗體更早產生，并且快速達到高峰；紅細胞免疫功能檢測結果顯示，不同濃度的復方多糖均能不同程度的提高紅細胞-C3b花環率和紅細胞-IC花環率。顏新艷［10］等通過篩選的3個硫酸化多糖：硫酸化黃芪多糖sAPS、硫酸化淫羊藿多糖sEPS、硫酸化香菇多糖sLNT組 成 4 個 成 分 復 方 ，復 方 1（sEPS-sAPS）,復 方 2（sEPS-sAPS-sLNT），復 方 3（sAPS-sLNT），復 方 4（sEPS-sLNT）在給雛雞接種新城疫疫苗時，分別注射復方多糖，結果表明，各復方均能明顯或顯著提高新城疫疫苗的免疫應答，提高血清HI抗體效價，促進淋巴細胞增殖，降低攻毒后的發病率和死亡率，提高免疫保護率。黃雪泉［11］等將四君子湯提取液和滅活雞新城疫抗原混合成水相，制備成肉雞新城疫滅活油乳劑疫苗注射肉雞，研究引起的免疫反應。試驗結果表明：四君子湯提取液具有免疫調節作用的小分子多肽，促進B細胞的分化增殖；提高機體免疫功能，可明顯促進正常機體的抗體產生，提高肉雞新城疫抗體效價（P＜0.05），其中以四君子湯提取液含量為14%時效果最佳；四君子湯提取液能顯著提高血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，增強其清除自由基的能力，使機體內自由基的產生和清除保持平衡。

3 中藥復方作為疫苗免疫增強劑可行性分析

中藥復方是在中醫理論的指導下，以君、臣、佐、使的組方原則，通過方內諸藥配伍調節藥物之間的關系來調整組合藥力。復方中藥對動物疫苗具有協同作用，有研究表明中藥增強劑復方在多個時間點的抗體效價顯著高于無增強劑組，顯示中藥復方具有較好免疫增強作用。

3.1 中藥復方免疫增強劑對免疫器官的影響

動物免疫器官是動物機體產生免疫反應的主要場所。免疫器官主要由中樞免疫器官：骨髓、胸腺、腔上囊及外周免疫器官：脾臟、淋巴組織等組成。骨髓是造血干細胞生長、分化及發育的場所，可提供各種免疫細胞的前體細胞，B細胞、單核巨噬細胞、粒細胞、NK細胞、血小板和紅細胞也在此分化成熟。胸腺的免疫功能主要是誘導T細胞的分化和成熟，胸腺衍化的T細胞輔助B細胞產生抗體。腔上囊是鳥類特有的中樞免疫器官，來自骨髓的淋巴干細胞在其內誘導分化為成熟的B細胞，經淋巴和血液循環到外周淋巴器官參與體液免疫；脾臟是機體內最大的免疫器官，內含大量的免疫細胞，在體液免疫中的地位極其重要。因此中藥對機體免疫器官的作用是研究中醫藥免疫調節作用的一個重要方面。張樂萃［12］等給雞注射復方多糖（黃芪多糖和香菇多糖）增強劑油乳苗，能明顯增加試驗雞免疫器官的重量。呂殿紅［13］等由黃芪、靈芝、淫羊藿等按比例組成復方增強劑A，由黃芪、黨參等按比例組成復方增強劑B，與雞新城疫弱毒苗、法氏囊弱毒苗配合使用，結果表明，兩個復方增強劑均在不同程度上提高了ND和IBD疫苗的免疫反應，促進免疫器官的發育，增強了T淋巴細胞的活性。

3.2 中藥復方免疫增強劑對細胞免疫的影響

細胞免疫主要由T細胞介導。機體通過致敏階段和反應階段，T細胞分化成效性淋巴細胞并產生細胞因子。T細胞能抵抗細胞內寄生的細菌、病毒、真菌及原蟲的感染；T細胞具有免疫監視作用，被腫瘤抗原致敏的T細胞通過直接殺傷和釋放細胞因子等可直接或間接地殺傷腫瘤細胞。一定程度上中藥提高機體免疫的途徑之一就是促進T淋巴細胞分化。四物湯煎劑對小鼠單核巨噬細胞系統的吞噬功能具有明顯促進作用，能刺激提高小鼠特異性抗體的產生，能促進T細胞的轉化功能。給小鼠灌胃四物湯后，其脾臟、胸腺重量與對照組相比都明顯增加，且隨藥物劑量的增高而增加。范云鵬［14］選擇淫羊藿多糖、淫羊藿黃酮、淫羊藿提取物、蜂膠黃酮、蜂膠提取物等組成藿蜂酮復方免疫增強劑，并制備中藥復方禽流感滅活苗及中藥復方新城疫滅活苗，試驗結果顯示，藿蜂酮復方增強劑滅活苗能夠顯著促進淋巴細胞增殖，提高血清抗體效價，效果優于無增強劑組和有增強劑組。

3.3 中藥復方免疫增強劑對體液免疫的影響

體液免疫是由B細胞介導的免疫應答，是由B細胞通過對抗原的識別、活化、增殖，最后分化成漿細胞并分泌抗體來實現的，抗體是介導體液免疫的重要分子，在體內可發揮多種免疫功能。許多研究表明中藥免疫增強劑可以促進抗體的產生。以當歸多糖、黃芪多糖、板藍根多糖和淫羊藿多糖等組成的中藥復方成分增強劑可以顯著提高新城疫弱毒苗免疫雛雞的抗體效價。四君子湯提取液和滅活雞新城疫抗原混合成水相，制備成肉雞新城疫滅活油乳劑疫苗注射實驗肉雞可明顯促進正常機體的抗體產生，提高肉雞新城疫抗體效價［11］。

4 結語

“防重于治”一直是我國養殖生產秉持的理念，怎樣有效提高抗體水平，一直是人們普遍關注的一個問題，而免疫佐劑是提高疫苗免疫水平不可或缺的一個成分。此外，隨著生活品質的提高，食品安全問題也得到人們的重視，逐漸形成了“高品質、低藥殘、無公害”的消費理念。傳統的鋁膠佐劑、白油佐劑、黏膜佐劑、微生物佐劑等佐劑，都會或多或少地產生一些毒副作用，因此，尋找安全可靠的新型免疫增強劑是解決疫苗免疫效果的一個必要之舉。中藥免疫增強劑經研究表明，確實具有一定的免疫促進效果，但是單一的中藥免疫增強劑作用有限，而把許多單味中藥合理配伍，可形成具有免疫增強效果的方劑。此外，一些經典方劑，如四君子湯、四物湯、小柴胡湯、玉屏風散等，都可以被開發成中藥復方免疫增強劑，不僅是對新型免疫增強劑種類的一個補充，也是對我國寶貴的中草藥資源、經典方劑的充分利用。

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