隱性乳房炎病牛乳清中IL-8及TNF-α含量的變化

尹柏雙， 王秋竹， 付連軍， 郝景鋒， 沙萬里， 王 奔， 鄭洪娟， 苗玉輝

(1.吉林農業科技學院動物科技學院，吉林吉林 132101；2.吉林正業生物股份有限公司，吉林吉林 132101；3.吉林省汪清縣動物疫病預防控制中心，吉林汪清 133200)

隱性乳房炎病牛乳清中IL-8及TNF-α含量的變化

尹柏雙1， 王秋竹1， 付連軍1， 郝景鋒1， 沙萬里1， 王 奔1， 鄭洪娟2， 苗玉輝3

(1.吉林農業科技學院動物科技學院，吉林吉林 132101；2.吉林正業生物股份有限公司，吉林吉林 132101；3.吉林省汪清縣動物疫病預防控制中心，吉林汪清 133200)

旨在探討奶牛隱性乳房炎發病與乳清中IL-8和TNF-α含量變化的關系。選取24頭患有不同程度隱性乳房炎的奶牛和8頭健康奶牛作為試驗動物，采集64份乳樣并分離乳清，利用ELISA法檢測乳清中IL-8和TNF-α含量。結果表明，患有輕、中、重度隱性乳房炎的奶牛乳清中，IL-8和TNF-α含量與健康對照組相比均極顯著或顯著升高(P<0.01或P<0.05)，且乳清中IL-8和TNF-α含量隨著隱性乳房炎病情的加重呈升高趨勢。乳清中 IL-8 和TNF-α含量與奶牛隱性乳房炎的發病程度呈正相關性，IL-8和TNF-α含量隨著乳腺炎癥的加劇而升高。

奶牛；隱性乳房炎；乳清；白細胞介素-8(IL-8)；腫瘤壞死因子-α(TNF-α)

奶牛乳房炎是危害奶牛養殖業最嚴重的疾病之一，其中隱性乳房炎發生率最高。隱性乳房炎可引起泌乳奶牛產奶量下降、牛奶品質降低、養殖成本增加、產后發情延長、妊娠時間推遲，為奶牛養殖業帶來巨大經濟損失[1-2]。白細胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是全身性炎癥反應急性期非特異性標志物之一[3]。IL-8主要由單核吞噬細胞產生，在某些細胞因子誘導下，單核細胞、淋巴細胞、內皮細胞等也能合成并釋放IL-8，IL-8具有趨化中心粒細胞、促進黏附能力、增強中心粒細胞溶酶體酶活性及吞噬功能的作用[4]。TNF-α由活化的單核巨噬細胞產生，具有誘導中性粒細胞趨化和局部浸潤、啟動炎癥反應的作用，同時可激活中性粒細胞及內皮細胞表面黏附受體，引起組織細胞損傷[5]。本研究探討奶牛隱性乳房炎發生與乳清中IL-8和TNF-α含量變化的關系，以期為奶牛隱性乳房炎的臨床診斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

通過乳汁體細胞計數監測后，選取年齡、胎次、產奶量、泌乳期等指標相近的8頭健康奶牛和24頭患有不同程度隱性乳房炎的奶牛。奶牛由吉林省吉林市某奶牛場提供。

1.2 主要試劑與儀器

IL-8和TNF-α檢測試劑盒購自南京建成生物試劑研究所。Fossmatic 5000型體細胞計數儀(丹麥FOSS公司)，Varioskan型酶標儀(美國Thermo公司)，離心機(美國Sigma公司)。

1.3 試驗動物分組

通過乳汁體細胞數(SCC)監測，將試驗奶牛分為健康對照組(8頭，SCC﹤10×104個/mL)、輕度隱性乳房炎組(8頭，50×104個/mL﹤SCC﹤150×104個/mL)、中度隱性乳房炎組(8頭，150×104個/mL﹤SCC﹤500×104個/mL)、重度隱性乳房炎組(8頭，SCC>500×104個/mL)。

1.4 乳樣采集

采集試驗奶牛乳汁前對乳區進行清洗，并采用75%乙醇消毒乳區。棄掉頭3把乳汁，分別采乳10 mL裝入無菌試管中，每頭奶牛采集2個乳區，共采集64個乳樣。將采集的乳樣放到冰盒中，帶回實驗室進行檢測。

1.5 乳清制備

將采集的乳樣以3 000 r/min離心5 min，去除上層乳脂；再于16 000 r/min高速離心機中離心10 min，去除沉淀，保留上清，于4 ℃下保存待測。

1.6 檢測方法

采用體細胞計數儀進行乳汁體細胞計數。采用IL-8試劑盒測定乳清中白細胞介素-8(IL-8)含量，采用TNF試劑盒測定腫瘤壞死因子(TNF)含量，按照各試劑盒說明書進行操作并計算含量。

采用SPSS 17.0數據分析系統進行單因素方差分析，結果以“平均值±標準誤”表示。P<0.01為差異極顯著，P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 奶牛乳清中IL-8含量變化

由表1可知，患輕度隱性乳房炎的奶牛乳清中IL-8含量為(163.23±5.48) ng/L，與對照組相比升高顯著(P<0.05)；患中度隱性乳房炎的奶牛乳清中IL-8含量為(196.79±7.58) ng/L，與對照組相比升高極顯著(P<0.01)；患重度隱性乳房炎的奶牛乳清中IL-8含量為(223.27±6.73) ng/L，極顯著高于對照組(P<0.01)；隨著隱性乳房炎病情的加重，乳清中IL-8含量呈升高趨勢。

表1 奶牛乳清中IL-8含量變化結果

注：“*”“**”分別表示在0.05、0.01水平下與對照組相比差異顯著。下表同。

2.2 奶牛乳清中TNF-α含量變化

由表2可知，患輕度隱性乳房炎的奶牛乳清中TNF-α含量為(129.45±8.57) ng/L，與對照組相比升高顯著(P<0.05)；患中度隱性乳房炎的奶牛乳清中TNF-α含量為(146.72±10.37) ng/L，與對照組相比升高極顯著(P<0.01)；患重度隱性乳房炎的奶牛乳清中TNF-α含量為(206.79±23.43) ng/L，極顯著高于對照組(P<0.01)；隨著奶牛隱性乳房炎病情的加重，乳清中TNF含量呈升高趨勢。

表2 奶牛乳清中TNF-α含量變化結果

3 結論與討論

3.1 奶牛隱性乳房炎與乳清中IL-8含量的相關性

IL-8能趨化和激活中性粒細胞，促使中性粒細胞彈性蛋白酶釋放，生成活性氧化代謝物，引發組織浸潤反應，同時可有效調節黏附分子表達，增強白細胞與內皮細胞黏附，加劇炎癥的發展[6]。本試驗發現，隨著奶牛隱性乳房炎發病程度的加重，乳汁中IL-8含量逐漸升高，極顯著高于對照組(P<0.01)。其主要原因可能是隱性乳房炎發生時，病原微生物代謝產生的內毒素和代謝產物刺激機體炎性細胞產生IL-1、PHA、LPS等，誘導單核細胞、淋巴細胞、內皮細胞合成并釋放IL-8，從而引起乳汁中IL-8含量升高，導致乳腺局部炎癥反應加劇，起到殺菌作用并引起嚴重的乳腺細胞損傷[7]。

3.2 奶牛隱性乳房炎與乳清中TNF-α含量的相關性

腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是主要由單核巨噬細胞炎癥激活后分泌的一種細胞因子，通過增加血管通透性來增加黏附分子和趨化因子的表達，從而損害內壁細胞功能[8]。TNF-α作為細胞外刺激因子，可激活NF-κB并進一步放大炎癥反應[9]。本研究發現，隨著奶牛隱性乳房炎發病程度的加重，乳汁中TNF-α含量逐漸升高，與對照組相比差異極顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)。其主要原因可能是病原微生物進入乳腺組織后，刺激機體單核巨噬細胞活化，由活化的單核巨噬細胞產生大量TNF-α，TNF-α誘導中性粒細胞趨化和局部浸潤，啟動并加劇了炎癥反應，增加微血管壁通透性，激活中性粒細胞及內皮細胞表面黏附受體，引起乳腺組織細胞損傷[5]。

3.3 結論

患有隱性乳房炎的奶牛乳清中，IL-8和TNF-α含量變化與隱性乳房炎的發病程度呈正相關性，乳清中IL-8和TNF-α含量隨著乳腺炎癥的加劇而升高。奶牛乳清中IL-8和TNF-α含量的變化可作為奶牛隱性乳房炎的診斷指標。

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10.15889/j.issn.1002-1302.2017.02.042

2015-12-03

吉林省科技廳重點科技攻關項目(編號：20130206040NY)；吉林省教育廳“十二五”科學技術項目(編號：吉教科合字2013339)；吉林市科技局杰出青年培育專項(編號：2013625019)。

尹柏雙(1978—)，男，黑龍江哈爾濱人，博士，副教授，主要從事奶牛乳腺疾病研究。E-mail：ybs3421@126.com。

S858.237.2+6

A

1002-1302(2017)02-0143-02

尹柏雙，王秋竹，付連軍，等. 隱性乳房炎病牛乳清中IL-8及TNF-α含量的變化[J]. 江蘇農業科學，2017，45(2)：143-144.