Caveolin—1在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌中的表達及其與細胞增殖、新生血管的關系及意義

蔡奕川+姚友生+李迎東

【摘要】 目的：探討Caveolin-1在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌中的表達及其與細胞增殖、新生血管的關系。方法：檢測人膀胱移行細胞癌、腺性膀胱炎與正常膀胱黏膜組織中Caveolin-1、PCNA與VEGF的表達，并分析各指標間的相關性。結果：三組標本的Caveolin-1陽性率分別為0、7.27%與39.39%，比較差異有統計學意義（P<0.05），并且伴隨腫瘤病理分級與臨床分期的增高Caveolin-1陽性率不斷升高，差異有統計學意義（P<0.05），同時腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌中Caveolin-1表達與PCNA、VEGF具有密切相關性。結論：Caveolin-1可作為反映腺性膀胱炎向膀胱癌轉變的重要指標之一，與膀胱腫瘤細胞的增殖和新生血管生長有協同作用。

【關鍵詞】 膀胱移行細胞癌； 腺性膀胱炎； Caveolin-1

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.34.005

腺性膀胱炎與膀胱癌有密切關聯[1]，不少研究認為腺性膀胱炎是一種良性病變，但具有惡變傾向，認為其可能是膀胱癌癌前病變的一種表現形式[2-3]。目前，有關小窩蛋白-1（Caveolin-1）的相關研究表明，其與不同類型惡性腫瘤的發生、發展及轉移均存在關聯[4]，與其細胞的增殖、分化以及血管生成的信號傳導具有相關性[5-6]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年1月-2015年6月在潮州市中心醫院及中山大學孫逸仙紀念醫院泌尿外科住院接受手術治療的患者標本膀胱移行細胞癌66例，腺性膀胱炎55例及正常膀胱黏膜標本10例，全部組織均經福爾馬林固定，石蠟包埋處理，連續切片，制成4 μm厚度的切片備染。原發性膀胱移行細胞癌手術標本66例，包括行膀胱全切術25例，膀胱部分切除術17例和經尿道電切術24例；其中男52例，女14例；年齡34～83歲，平均（60.17±10.40）歲；初發者40例，復發者26例；WHO病理分級中G1級24例，G2級24例，G3級18例；按UICC-TNM標準進行臨床分期：淺表性腫瘤（Tis～T1）39例，浸潤性腫瘤（T2～T4）27例，所有病例術前均未行化療或放療。腺性膀胱炎手術標本55例均行經尿道電切，其中男6例，女

49例；年齡30～72歲，平均（54.75±12.41）歲。另取10例正常膀胱黏膜作為正常對照，取自TURP7例及開放性前列腺摘除術3例，年齡53～76歲，平均（59.65±9.58）歲。各組患者年齡比較差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 試劑及方法 SP系列試劑盒第一抗體為大鼠抗人Caveolin-1多克隆抗體，購自Cell Signaling 公司，小鼠抗人增殖細胞核抗原單克隆抗體購自CHEMICON公司，兔抗人血管內皮生長因子單克隆抗體購自北京中杉金橋公司，二抗為即用型，以PBS代替一抗作陰性對照，參照UltraSensitiveTM S-P試

劑盒使用說明。

1.3 結果判斷 Caveolin-1、血管內皮生長因子（VEGF）的陽性染色模式均為以細胞膜或細胞漿著色為陽性細胞信號，顯微鏡下每個切片隨機取5個高倍鏡視野，判定以染色強度和陽性細胞百分比的得分之和進行評估。（a）染色強度：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。（b）陽性細胞數：無陽性細胞數為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。以a+b之和評價：0分為（-）、1～3分為（+）、4～6分為（++）。PCNA陽性表達的判定：PCNA陽性著色定位于細胞核，以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性染色。隨機選擇5個高倍視野，計數1000個細胞，計算陽性細胞百分比，陽性比≥10%時為表達陽性。每張切片至少觀察到1000個細胞，計切片中每1000個腫瘤細胞中的陽性細胞數，取其平均值，按陽性細胞所占比例分為Ⅰ～Ⅳ級：0～10%為Ⅰ級，10%～25%為Ⅱ級，26%～50%為Ⅲ級，51%～100%為Ⅳ級。

1.3 統計學處理 使用SAS 9.0統計學軟件進行分析，計量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗，各指標之間的相關性分析用 字2趨勢檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組標本的Caveolin-1表達 三組標本的Caveolin-1陽性率分別為0、7.27%與39.39%，比較均有統計學意義（P<0.05），并且伴隨腫瘤病理分級與臨床分期的增高其陽性率不斷升高（P<0.05），見表1～2，圖1～2。

2.2 Caveolin-1與PCNA、VEGF的相關性 腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌的Caveolin-1與PCNA、VEGF具有密切相關性，見表3～6。

3 討論

腺性膀胱炎是一種膀胱黏膜上皮反應性增生改變[7]，目前隨著對其認識及診斷手段的提高，其發病率、復發率有增高的趨勢，但其具體病因仍不甚清楚[8]，相關研究認為是移行上皮在慢性刺激因素如感染、梗阻、物理刺激和化學致癌物等作用下，化生為腺上皮并通過分泌黏液而達到自身保護目的，其發生屬于機體的一種防御機制[9-10]。小窩蛋白-1（Caveolin-1）是微囊蛋白的一種主要組成蛋白[11]，目前多數研究表明Caveolin-1在癌細胞中表達上調，并與腫瘤發生、轉移以及病理分級有關[12]，提示Caveolin-1促進腫瘤的發生、發展和轉移，與細胞的增殖、分子的信號傳導有關[13]。膀胱癌及前列腺癌中，Caveolin-1均能以分泌型形式存在，且Caveolin-1的缺失能導致表皮細胞的過度增殖進而加速皮膚癌的發生[14]。

本組實驗結果顯示Caveolin-1在正常黏膜、腺性膀胱炎、膀胱癌有遞增的趨勢，腺性膀胱炎可能有潛在的惡變傾向，或者是正常膀胱黏膜惡變為膀胱癌的中間階段。腺性膀胱炎與膀胱上皮腫瘤關系密切，人類尿路復層移行上皮生物學行為具有多變性，它可以在某些特定的間質影響下分化為前列腺上皮，也可以在某些條件下發生為鱗狀上皮、腺上皮等，出現臨床上的膀胱白斑、腺性膀胱炎、膀胱鱗狀細胞癌、膀胱腺癌、尿路移行細胞癌等一些與分化相關的疾病。而腺性膀胱炎Caveolin-1陽性多見于結構紊亂且細胞異型增生較明顯者[15]，因此，筆者考慮其可能具有惡變潛能。腺性膀胱炎Caveolin-1表達為陽性者，當注意其可能具有惡變的潛能。雖然本研究發現腺性膀胱炎組的陽性表達率不高，且與正常黏膜組間比較差異無統計學意義（P>0.05），提示Caveolin-1對于區分腺性膀胱炎和正常組織可能沒有意義。筆者考慮其一是標本量有限或者陽性率不高的原因，其二是與腺性膀胱炎標本的病理類型有關。此外，在膀胱移行細胞癌中Caveolin-1陽性率陽性表達率隨腫瘤病理分級及臨床分期的增高而增加。

血管內皮生長因子（VEGF）是目前已知的一族最強的促血管形成物質，在許多惡性腫瘤組織中呈高表達。本組實驗結果發現：腺性膀胱炎組中VEGF陽性表達率為29.09%，膀胱移行細胞癌組中VEGF陽性表達率為66.67%，正常黏膜中無表達，三組間比較差異有統計學意義（P<0.01），并且正常黏膜組與腺性膀胱炎組、腺性膀胱炎組與膀胱移行細胞癌組間比較差異有統計學意義（P<0.01）。說明VEGF表達陽性對于區別正常黏膜、腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌有一定的意義，在腺性膀胱炎向膀胱移行細胞癌過渡的過程中新生血管也起到一定的作用。腫瘤的浸潤伴隨著腫瘤新生血管的形成，其關鍵環節在于血管形成誘導因子與抑制因子間平衡狀態的改變[16]。黃隨富等[17]發現VEGF在膀胱移行細胞癌中呈高表達與腫瘤的病理分級和臨床分期相關，部分腺性膀胱炎也有表達，即VEGF陽性可能是腺性膀胱炎一種惡性變的危險信號，與大多數實體腫瘤一樣，膀胱移行細胞癌也具有血管依賴性。

腫瘤的發生、發展和轉移是涉及多種分子機制的極其復雜的過程，受許多特殊基因的調控[18]。本實驗結果顯示：Caveolin-1與PCNA在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌中的表達呈正相關，說明Caveolin-1和PCNA對腫瘤細胞的增殖可能有協同作用。Caveolin-1可能在某些環節改變PCNA的信號傳導有關，但具體機制還有待進一步研究。而且，腺性膀胱炎Caveolin-1染色陽性的4例中，有2例PCNA染色也陽性，其膀胱鏡下表現為乳頭狀瘤樣型（1例）和絨毛樣水腫型（1例），組織切片上也有少數的異質性細胞。本實驗表明：腺性膀胱炎惡變與其分型有一定關系，乳頭狀瘤樣型惡變的潛能較大，而慢性炎癥型、黏膜無顯著改變型等其他類型惡變幾率較小。所以對于濾泡水腫型，乳頭狀瘤樣型腺性膀胱炎，特別是Caveolin-1與PCNA染色皆陽性的患者，存在惡變的潛能，應視為癌前病變，予以積極外科治療，更應注意隨訪。

有研究認為Caveolin-1調節內皮細胞分化和促進血管生成[19-20]。趙醒等[21]發現在食管鱗癌中Caveolin-1促進腫瘤微血管生成。本實驗結果顯示：Caveolin-1與VEGF在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌中的表達呈正相關，說明在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌中Caveolin-1和VEGF的表達對腫瘤血管生成可能有協同作用。而且腺性膀胱炎中，Caveolin-1陽性表達的4例，有3例VEGF也出現陽性表達，其膀胱鏡下表現為乳頭狀瘤樣型（2例）和絨毛樣水腫型（1例）。這提示對于濾泡水腫型，乳頭狀瘤樣型腺性膀胱炎，特別是Caveolin-1與VEGF染色皆陽性的患者，更應注意隨訪。

綜上所述，Caveolin-1可作為反應腺性膀胱炎向膀胱癌轉變的重要指標之一，與膀胱腫瘤細胞的增殖和新生血管生長有協同作用。同時，Caveolin-1、PCNA和VEGF可作為反映腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌生物學行為和預后的指標。

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