2015年新疆食源性金黃色葡萄球菌污染狀況及耐藥性分析

蘇 靜，武 運(yùn)，楊勤德，馬 鑫，于 烽，劉 艷，遠(yuǎn)雪梅

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，新疆烏魯木齊 830001）

2015年新疆食源性金黃色葡萄球菌污染狀況及耐藥性分析

蘇 靜1，2，*武 運(yùn)1，楊勤德2，馬 鑫2，于 烽2，劉 艷2，遠(yuǎn)雪梅2

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，新疆烏魯木齊 830001）

2015年從新疆地區(qū)14個(gè)地（州、市）市售7類940份食品中，共分離得到49株金黃色葡萄球菌，陽性率為5.21%。除調(diào)味品、烘焙及油炸類食品未檢出外，熟肉制品、肉與肉制品、餐飲食品、地方特色食品、乳與乳制品的檢出率分別為10.00%，7.89%，6.25%，5.00%，2.86%。同時(shí)，從分離得到的49株金黃色葡萄球菌菌株中共檢出36株耐藥菌，耐藥率為73.47%，其中1株為6重耐藥的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA），其余35株為單一或多重耐藥的甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）。對(duì)抗生素的耐藥率從高到低依次為紅霉素（ERY）57.14%，克林霉素（CLI）53.06%，四環(huán)素（TET）46.94%，環(huán)丙沙星（CIP）24.49%，慶大霉素（GEN）8.16%，苯唑西林（OXA）2.04%，頭孢西丁（CFX）2.04%，甲氧芐啶/磺胺甲噁唑（SXT）2.04%，萬古霉素（VAN）0，達(dá)托霉素（DAP）0，氯霉素（CHL）0。

食源性致病菌；金黃色葡萄球菌；污染狀況；耐藥情況；食品安全

0 引言

食品安全已成為全球重要的公共衛(wèi)生問題，食源性致病菌對(duì)健康危害越來越引起人們的關(guān)注。金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 是引起食物中毒的主要致病菌之一[1]。據(jù)報(bào)道，2006年在美國由于金黃色葡萄球菌引起的食物中毒有29起，在細(xì)菌性食物中毒事件中居第3位。我國每年發(fā)生的此類食物中毒事件也非常多，全國各地均有報(bào)道[2]。近年來，隨著各類廣譜、高效抗生素的大量臨床應(yīng)用，金黃色葡萄球菌的耐藥性也發(fā)生了很大變化。細(xì)菌的耐藥出現(xiàn)不僅給臨床及獸醫(yī)用藥帶來了麻煩，重要的是其耐藥性還可通過食物鏈傳播，臨床細(xì)菌的耐藥性與食物中細(xì)菌的耐藥性直接相關(guān)。多重耐藥金黃色葡萄球菌的出現(xiàn)，已危及到對(duì)該菌引發(fā)食源性疾病的控制[3]。目前，新疆地區(qū)在食品中金黃色葡萄球菌流行性情況尚缺乏充足的數(shù)據(jù)。為了了解新疆食源性金黃色葡萄球菌的污染狀況及耐藥趨勢(shì)，并為細(xì)菌性食源性疾病的治療、耐藥性傳播的防控提供科學(xué)依據(jù)。根據(jù)2015年國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)方案，對(duì)新疆14個(gè)地（州、市）市售的7類食品進(jìn)行金黃色葡萄球菌檢測(cè)，同時(shí)對(duì)分離到的金黃色葡萄球菌菌株進(jìn)行耐藥性分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品及標(biāo)準(zhǔn)菌株

樣品采自新疆地區(qū)14個(gè)地（州、市）的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、食品超市等市售食品，包括乳與乳制品、肉與肉制品、熟肉制品、調(diào)味品、烘焙及油炸類食品、餐飲食品、地方特色食品共7類940份食品樣品，采樣時(shí)間集中在2015年4月-11月。

質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌（ATCC 29213），為國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心配發(fā)。

1.1.2 主要儀器及試劑

VITEK 2 COMPACT型全自動(dòng)微生物生化鑒定儀、GP型革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡、Thermo型生物安全柜、SANYO MCO186T型恒溫培養(yǎng)箱、Leica型電子顯微鏡、Sensititre AIM型全自動(dòng)藥敏試驗(yàn)菌液接種儀、Sensititre Vizion型全自動(dòng)藥敏試驗(yàn)菌液判讀儀、Sensititre PRCFSRA型革蘭氏陽性非苛養(yǎng)菌的MIC藥敏板；Sensititre型CAMHBT肉湯、腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基、腦心浸液肉湯、血漿凝固酶試劑、Baird-Parker瓊脂平板、血瓊脂平板、7.5%氯化鈉肉湯。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 分離鑒定

金黃色葡萄球菌的分離鑒定，參照《2015年國家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序[4]。將樣品接種在7.5%氯化鈉肉湯中，于36℃條件下培養(yǎng)24 h。取增菌液劃種Baird-Parker平板及血平板，于36℃條件下培養(yǎng)24 h。挑取可疑菌落進(jìn)行涂片染色、溶血試驗(yàn)及血漿凝固酶試驗(yàn)，最后用全自動(dòng)微生物生化鑒定儀（VITEK 2 COMPACT型）進(jìn)行驗(yàn)證。

1.2.2 藥敏試驗(yàn)

根據(jù)臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI） 推薦的微量肉湯稀釋法，定量測(cè)定致病菌的最低抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）。將質(zhì)控菌株和備檢菌株分別接種于腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基，于36℃條件下純培養(yǎng)24 h。挑取3～5個(gè)純菌落，均勻懸浮于去離子水中制成0.5麥?zhǔn)暇鷳乙骸⒕鷳乙号cCAMHBT肉湯通過全自動(dòng)藥敏試驗(yàn)菌液接種儀接種在革蘭氏陽性非苛養(yǎng)菌的MIC藥敏板上，藥敏板用塑料膜封好，置于濕盒中，于36℃條件下純培養(yǎng)24 h。采用全自動(dòng)藥敏試驗(yàn)菌液判讀儀，對(duì)MIC藥敏板進(jìn)行判讀分析。參考國內(nèi)外常用抗生素種類、既往耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果，根據(jù)CLSI文件M100-S24推薦的藥敏試驗(yàn)抗生素選擇原則確定耐藥監(jiān)測(cè)的抗生素，確定了β-內(nèi)酰胺類、多肽類、林可霉素類、四環(huán)素類、脂肽類、大環(huán)內(nèi)酯類、酰胺醇類、氟喹諾酮類、磺胺類、氨基糖苷類共計(jì)10類抗生素中的11種，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）鑒定用頭孢西丁代替甲氧西林，耐頭孢西丁的金黃色葡萄球菌即是MRSA。

2 結(jié)果與分析

2.1 金黃色葡萄球菌檢出情況

檢測(cè)的940份樣品包括乳與乳制品、肉與肉制品、熟肉制品、調(diào)味品、烘焙及油炸類食品、餐飲食品、地方特色食品共7類食品，共檢出金黃色葡萄球菌49株，檢出率為5.21%。除調(diào)味品、烘焙及油炸類食品外，熟肉制品、肉與肉制品、餐飲食品、地方特色食品、乳與乳制品均檢出金黃色葡萄球菌，檢出率分別為10.00%，7.89%，6.25%，5.00%，2.86%。

2015年新疆地區(qū)金黃色葡萄球菌檢出情況見表1。

表1 2015年新疆地區(qū)金黃色葡萄球菌檢出情況

2.2 金黃色葡萄球菌耐藥情況

分離得到的49株金黃色葡萄球菌中共檢出36株耐藥菌，耐藥率為73.47%。對(duì)11種抗生素耐藥率從高到低依次為紅霉素（ERY） 57.14%，克林霉素（CLI）53.06%，四環(huán)素（TET）46.94%，環(huán)丙沙星（CIP）24.49%，慶大霉素（GEN）8.16%，苯唑西林（OXA）2.04%，頭孢西丁（CFX）2.04%，甲氧芐啶/磺胺甲噁唑（SXT）2.04%，萬古霉素（VAN）0，達(dá)托霉素（DAP）0，氯霉素（CHL）0。

49株金黃色葡萄球菌對(duì)11種抗生素耐藥情況見表2。

表2 49株金黃色葡萄球菌對(duì)11種抗生素耐藥情況

2.3 金黃色葡萄球菌耐藥譜結(jié)果

49株金黃色葡萄球菌中有1株為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA），48株為甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）。其中，1株的MRSA為6重耐藥，占MRSA菌株數(shù)100%；48株MSSA中有13株對(duì)所選11種抗生素都敏感，其余35株為單一或多重耐藥。其中，2株為5重耐藥，占MSSA菌株數(shù)4.16%；6株為4重耐藥，占MSSA菌株數(shù)12.5%；10株為3重耐藥，占MSSA菌株數(shù)20.83%；9株為雙重耐藥，占MSSA菌株數(shù)18.75%；8株為單一耐藥，占MSSA菌株數(shù)16.67%。

49株金黃色葡萄球菌對(duì)11種抗生素耐藥譜見表3。

表3 49株金黃色葡萄球菌對(duì)11種抗生素耐藥譜

3 結(jié)論與討論

通過對(duì)國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)方案選定的市售7類940份食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)新疆地區(qū)市售食品中存在金黃色葡萄球菌的污染，且不同來源之間金黃色葡萄球菌檢出率存在差異。在乳與乳制品、肉與肉制品、熟肉制品、餐飲食品、地方特色食品中均有檢出，而在調(diào)味品、烘焙及油炸類食品中未檢出。其中，熟肉制品檢出率最高，為10.00%。隨著生活節(jié)奏的加快和生活方式的改變，在人們的日常膳食結(jié)構(gòu)中方便快捷的食物（如熟肉制品）所占比例越來越高[5]。熟肉制品由于大多為經(jīng)營(yíng)者自己制作，且在加工與消費(fèi)過程中，極易被致病菌污染。其次，肉與肉制品檢出率為7.89%，餐飲食品6.25%，地方特色食品5.00%，乳與乳制品2.86%，這些均為動(dòng)物源性食品，表明動(dòng)物性食品中金黃色葡萄球菌有較高的檢出率，這與國內(nèi)外有關(guān)報(bào)道相符[6]。由于新疆地區(qū)的飲食習(xí)慣以肉與肉制品為主，而肉制品中較高的金黃色葡萄球菌污染應(yīng)引起食品衛(wèi)生管理部門的高度重視。

食源性致病菌的耐藥性對(duì)食品安全及人類健康的影響已經(jīng)引起很多國家的警惕，細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，尤其是多重耐藥菌的出現(xiàn)并廣為傳播是當(dāng)今醫(yī)學(xué)界的難題，食物鏈?zhǔn)羌?xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與播散的重要環(huán)節(jié)之一[7]。大量抗菌藥作為疾病感染防治和激素被濫用于飼料中，從而影響了動(dòng)物腸道正常菌群并刺激耐藥菌的復(fù)制，動(dòng)物排泄物中的抗菌藥和耐藥菌株排入環(huán)境中通過食物鏈傳播[8]。通過對(duì)2015年新疆地區(qū)市售食品中分離到的49株金黃色葡萄球菌進(jìn)行耐藥性分析，結(jié)果顯示49株金黃色葡萄球菌中對(duì)11種抗生素共檢出36株耐藥菌，耐藥率為73.47%。其中，對(duì)四環(huán)素（TET）、克林霉素（CLI）、紅霉素（ERY）耐藥率均接近或超過50%，依次為46.94%，53.06%，57.14%。同時(shí)，也呈現(xiàn)出多重耐藥性，雙重及雙重以上耐藥菌株28株，占耐藥菌株總數(shù)的77.78%；出現(xiàn)1株6重耐藥，為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）。眾所周知，MRSA感染的治療是臨床十分棘手的難題之一，關(guān)鍵是其對(duì)許多抗生素有多重耐藥，因其耐藥機(jī)制是PBPs（青霉素結(jié)合蛋白）性質(zhì)的改變。因此，MRSA幾乎對(duì)所有的β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，且在同時(shí)還可能對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、氨基糖苷類抗生素等多種抗菌藥物表現(xiàn)出耐藥性。長(zhǎng)期以來，萬古霉素是治療MRSA感染的基石和金標(biāo)準(zhǔn)，耐萬古霉素的MRSA被列為未來10年的超級(jí)耐藥細(xì)菌，而此次研究中雖然沒有萬古霉素（VAN）耐藥株出現(xiàn)，但出現(xiàn)的1株萬古霉素（VAN）中介株也應(yīng)當(dāng)引起研究人員的重視。

此次研究為新疆地區(qū)食源性金黃色葡萄球菌污染狀況分析及耐藥性趨勢(shì)研究積累了數(shù)據(jù)，同時(shí)也為相關(guān)部門為做好食源性疾病的預(yù)防和控制工作提供一定指導(dǎo)意義。

[1]李光偉，潘孝仁，Lillioja S，等.檢測(cè)人群胰島素敏感性的一項(xiàng)新指數(shù) [J].中華內(nèi)科雜志，1993，32（10）：656-660.

[2]吳劍閣，劉英豪，樓萍，等．一起由金黃色葡萄球菌腸毒素引起群體性食物中毒的病原學(xué)分析 [J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（8）：1 424-1 425．

[3]王迪，張曉媛，陳倩，等.北京市食源性金黃色葡萄球菌耐藥及分子分型研究 [J].中國食品衛(wèi)生雜志，2014，26（5）：428－434.

[4]楊大進(jìn)，李寧，蔣定國，等.2015年國家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè) [M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2015：754-772.

[5]聞劍，梁輝，戴光偉，等.2008-2011年廣東省熟肉制品中常見食源性致病菌污染狀況分析 [J].中國食品衛(wèi)生雜志，2013，25（1）：68－70.

[6]賀連華，王瑞端，陳妙玲，等.食品中金黃色葡萄球菌的腸毒素檢測(cè)及耐藥性 [J].職業(yè)與健康雜志，2006，22（15）：1 173-1 174.

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Pollution Condition and the Analysis of Drug Resistance of Foodborne Staphylococcus Aureus in Xinjiang in 2015

SU Jing1，2，*WU Yun1，YANG Qinde2，MA Xin2，YU Feng2，LIU Yan2，YUAN Xuemei2

（1.School of Food Science and Pharmacy，Xinjiang Agricultrual University，Urumqi，Xinjiang 830052，China；2.Xinjiang Uygur Autonomous Region Center for Disease Control and Prevention，Urumqi，Xinjiang 830001，China）

There are 49 Staphylococcus aureus strains are isolated from 940 foods in 7 kinds groceries from 14 areas in 2015，and the，positive rate is 5.21%.In addition to the condiments，baked and fried foods have no pollution，cooked meat products，meat and meat products，food，local characteristics food，milk and dairy products are 10.00%，7.89%，6.25%，5.00%，2.86%.At the same time，36 strains of drug-resistant bacteria detection resistant rate of 73.47%are isolated from the 49 strains of Staphylococcus aureus strains.1 for 6 drug-resistant strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus（MRSA），and the remaining 35 for single or multiple drug-resistant strains of methicillin sensitive Staphylococcus aureus（MSSA）.Irologic resistance to antibiotics from high to low are erythromycin（ERY）57.14%，clindamycin 53.06%（CLI），tetracycline（TET） and ciprofloxacin（CIP） 46.94%to 24.49%，gentamicin（GEN） 8.16%，benzene azole westwood（OXA）and cefoxitin provided（CFX）are 2.04%，2.04%，methyl benzyl oxygen organism/sulfamethoxazole（SXT）2.04%，vancomycin（VAN）0，toxin（DAP）0，chloramphenicol（CHL）0.

foodborne pathogenic bacteria；Staphylococcus aureus；pollution condition；drug resistance；food safety

TS201.3

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.01.018

1671-9646（2017）01a-0066-03

2016-11-21

新疆自治區(qū)科技支撐項(xiàng)目（201431113）。

蘇 靜（1981— ），女，在讀碩士，主管技師，研究方向?yàn)槭称钒踩?

武 運(yùn)（1965— ），女，碩士，教授，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。