羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏實驗研究

宗衛峰，汪玉馨，劉 洋，王 瑤，張微峰，陸益紅

(江蘇省食品藥品監督檢驗研究院，南京 210008)

羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏實驗研究

宗衛峰，汪玉馨，劉 洋，王 瑤，張微峰，陸益紅*

(江蘇省食品藥品監督檢驗研究院，南京 210008)

目的 評價羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏安全性。方法 進行了主動全身過敏反應試驗、體內過敏指標測定與篩查及被動皮膚過敏反應試驗的方法，考察樣品的過敏安全性。結果 我們對3個企業45批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液進行了豚鼠全身過敏反應和被動皮膚過敏試驗,均未發生過敏反應。通過對血漿中過敏性指標，組胺(HIS)、IgG、IgM和IgE進行測定和比較,發現IgM和IgE在各組間均無明顯變化；組胺及IgG陽性組與陰性組及樣品組間均有差異。結論 建議羥乙基淀粉40氯化鈉注射液安全性評價應包括過敏反應，還可在羥乙基淀粉臨床應用時進行組胺及IgG這兩項過敏指標的監測。

羥乙基淀粉40氯化鈉注射液;過敏反應;組胺；IgG

羥乙基淀粉為羥乙基化支鏈淀粉的水解產物，其制劑是一種良好的血漿代用品，具有降低血液黏度、改善血流動力學、擴充血容量、提高組織供氧、進而改變微循環、抑制炎癥等作用[1]。羥乙基淀粉40氯化鈉注射液作為血容量補充藥，有抑制血管內紅細胞聚集作用，用于改善微循環障礙，臨床用于低血容量性休克，如失血性、燒傷性及手術中休克等；少數患者使用本品可出現過敏現象，表現為眼瞼水腫、蕁麻疹及哮喘等。為進一步弄清羥乙基淀粉40氯化鈉注射液過敏反應情況，我們進行了主動全身過敏和被動皮膚過敏試驗研究，以期進一步明確羥乙基淀粉40氯化鈉注射液不良反應的真正原因，為確保安全用藥提供依據。同時，優選過敏方法指標，為羥乙基淀粉40氯化鈉注射液安全性研究提出合理化建議。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

普通級豚鼠，體重280～310 g，來源于無錫市惠山江南實驗動物場[SCXK(蘇)2015-0004]。實驗環境室溫度20～24 ℃，相對濕度為45%～60%，實驗于江蘇省食品藥品監督檢驗研究院設施內進行[SYXK(蘇)2012-0043]。并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關懷。

1.2 試劑與儀器

41批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液(企業A、B)、4批高滲氯化鈉羥乙基淀粉40注射液(企業C)、2批羥乙基淀粉130/0.5氯化鈉注射液(企業D)。氯化鈉注射液(江蘇四環生物制藥有限公司，批號：15070410，規格：100 mL:0.9 g)；新生牛血清(浙江天杭生物科技有限公司， 批號：141011)。

豚鼠組胺ELISA 試劑盒(96T 批號：BPE40015)；豚鼠IgE ELISA 試劑盒(96T 批號：BPE40020)；豚鼠IgG ELISA 試劑盒(96T 批號：BPE40003)；豚鼠IgM 試劑盒(96T 批號BPE40022)，均購自朗頓生物公司。

L-550離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；全自動酶標儀(Synergy H1,BIOTEK公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 豚鼠全身主動過敏試驗

將豚鼠按體重隨機分組(每組6只)，分別為：氯化鈉注射液組、10%小牛血清組、羥乙基淀粉40注射液組、羥乙基淀粉130注射液組。取豚鼠6只，隔日給藥一次，給予每只動物0.5 mL相應的供試藥液,連續3次，然后分別于末次給藥后的14 d和21 d,給予每只動物前肢靜脈注射各組1.0 mL相應的供試藥液激發注射。觀察各組動物在激發注射后15 min內是否出現過敏反應(有無豎毛、發抖、干嘔、連續噴嚏3 聲、連咳3 聲、紫癜、呼吸困難、二便失禁、步態不穩或倒地、抽搐、休克、死亡等過敏反應癥狀)。21 d給藥后15 min 取血漿檢測組胺、總IgE、IgG、IgM 水平[2]。

1.3.2 被動皮膚過敏試驗[3]

1.3.2.1 劑量組別

設陰性、陽性對照組、受試藥組。陰性對照組用氯化鈉注射液，陽性對照組用新生牛血清10倍稀釋液。

1.3.2.2 每組動物數

普通級豚鼠，雌雄各半。致敏每組 6只，激發每組 6只 , 均為雌雄各半。

1.3.2.3 致敏方法及抗血清的制備

取上述豚鼠，隨機分組，每組6只，雌雄各半，分別為受試藥組、小牛血清組和氯化鈉注射液組，按無菌操作方法，隔日腹腔注射上述三種藥品致敏，0.5 mL/只，共計注射3次，然后于最后一次致敏注射后第10日，股動脈采血，分離血清, 將各組6只豚鼠的血清分別混合, -20℃保存，2周內備用。

1.3.2.4 PCA反應的激發

取上述各組抗血清用生理鹽水稀釋成1∶2、1∶8、1∶32。然后取上述豚鼠，隨機分組，每組6只，雌雄各半,在豚鼠兩側背部預先剪毛,再取受試物組、新生牛血清組和氯化鈉注射液組的稀釋抗血清，于剪毛處皮內注射各0.1 mL。經48 h后，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發抗原加等量的1%依文思蘭染料溶液，1 mL/只。30 min后麻醉處死各組動物，剪取背部皮膚，測量皮膚內層的斑點大小，直徑大于5 mm者判定為陽性。

1.4 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件處理組間差異，實驗數據以均數±標準差(±s)表示，用雙側t檢驗進行統計學計算,P< 0.05 表示有統計學意義。

2 結果

2.1 豚鼠全身主動過敏試驗

取3個企業45批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液原液，致敏并激發豚鼠，結果均未發生豚鼠主動全身過敏反應。 羥乙基淀粉130/0.5氯化鈉注射液(企業D)1412042批號的其中一只豚鼠出現連續咳嗽現象，小牛血清組攻擊3 min后即出現步態不穩，咳嗽，抽搐，倒伏等強陽性反應。

通過對血漿中過敏性指標組胺(HIS)、IgG、IgM和IgE進行測定和比較發現IgM和IgE在各組間均無明顯變化，而組胺及IgG在小牛血清陽性組內有比較明顯的升高，見圖1、2及表1。用雙側t檢驗進行統計學計算發現，陽性組與陰性組及樣品組間均有差異，陽性結果成立。組胺及IgG在羥乙基淀粉40各組間無顯著差異，與陰性對照組無顯著區別。

2.2 豚鼠被動皮膚過敏試驗

我們對3個企業45批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液,取原液，致敏并攻擊豚鼠，考察豚鼠被動皮膚過敏反應，結果均未發生豚鼠被動皮膚過敏反應。

圖1 各組間IgG均值比較Fig.1 Comparison on average of IgG in each group.

圖2 各組間HIS均值比較Fig.2 Comparison on average of HIS in each group.

組別批號激發后出現國過敏反應及組胺和IgG的含量(第21天激發)癥狀發生數(只)主要癥狀組胺(ng/mL)IgG(mg/mL)結果判斷陰性陰性0922±21．6286±123-2A1504230501003±12．1388±109-等滲40(企業A)2A150527050750±27．9269±267-2A1506140501030±15．9781±098-14112832030963±15．7289±096-等滲40(企業B)15072432010895±15．6185±133-15070432030804±15．9472±224-14123001020897±23．7588±180-高滲40(企業C)15060301010979±28．4271±144-14101701010959±11．3688±409-等滲130(企業D)141204211156±6．5291±128-15031610980±15．5180±113-陽性陽性31342±4．95??116±091??+

注：與陰性相比較，**P< 0.05。

Note.Compared with the negative control ,**P< 0.05.

3 討論

本研究對企業A和B的41批羥乙基淀粉40氯化鈉注射液、企業C的4批高滲羥乙基淀粉氯化鈉注射液、企業D的羥乙基淀粉130/0.5氯化鈉注射液，用豚鼠進行了全身主動過敏和被動皮膚過敏實驗，結果顯示，羥乙基淀粉40氯化鈉注射液等滲和高滲溶液均無明顯過敏反應。目前羥乙基淀粉40氯化鈉注射液質量標準中未制定過敏反應檢查項，但因藥物在臨床不良反應中有過敏反應現象，故建議企業增加過敏反應發生的質量監控。另外因《中國藥典》中過敏反應檢查是用豚鼠全身主動過敏檢查法，僅是對動物行為學指標進行觀察，也受試驗者主觀因素影響，存在誤差。而在臨床上出現的一些超過敏反應癥狀在此檢查法中也不能體現出，故可對過敏實驗敏感動物模型方面作進一步研究。

本次研究中羥乙基淀粉130組中有1只豚鼠出現咳嗽癥狀，該組組胺及IgG水平比陰性及羥乙基淀粉40組也略有升高，雖統計學分析無顯著性差異，但結合前期不良反應檢索結果提示我們分子量大小與過敏反應存在一定的正相關，中、高分子量的羥乙基淀粉存在過敏反應的風險，其作為代血漿使用時，為急救用藥且用量大，所以安全性尤為重要。故有必要對羥乙基淀粉130、羥乙基淀粉200進行進一步過敏研究，同時在其臨床應用時收集組胺及IgG這兩項過敏指標與不良反應相關性的數據，對易過敏病人提高警惕，以減少不良反應的發生，保障用藥的安全。

[1] 陳燕，駱喜寶，潘云． 羥乙基淀粉的藥理作用和臨床應用研究進展[J]． 醫學綜述，2012，18(4):593-595．

[2] 張美玉，李貽奎，張嘉，等.魚腥草注射液過敏及類過敏實驗研究[J].中國現代應用藥學雜志，2009，26(8)：610-614.

[3] 國家食品藥品監督管理總局.藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則(2014年版)[OL].http://www.sfda.gov.cn/WS01/CL1616/101018.html

Experimental Study on Anaphylactoid Reactions of Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection

ZONG Wei-feng,WANG Yu-xin,LIU Yang,WANG Yao,ZHANG Wei-feng,LU Yi-hong*

(Jiangsu Institute for Food and Drug Control，Nanjing 210008,china)

Objective To evaluate the sensitizations of Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection. Methods Active systemic anaphylaxis(ASA) test, internal sensitive index’s determination and screening and Passive Cutaneous Anaphylaxis(PCA) test are carried out. Observe the allergy safety of the samples. Results We use guinea pigs to carry on ASA test and PCA test with Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection from 45 batches of 3 companies and no changes have occurred. Measuring and comparing the sensitive index of HIS,IgG, IgM and IgE in plasma, IgM and IgE are not obvious variation; HIS and IgG positive group and negative group and sample groups are different.Conclusions It is suggestion that Hydroxyethyl Starch 40 Sodium Chloride Injection safety evaluation should include allergic reactions, HIS and IgG sensitive index monitoring in clinical application of hydroxyethyl starch.

Hydroxyethyl starch 40 sodium chloride injection;Anaphylactoid reactions; HIS; IgG

宗衛峰(1978-)，男，副主任藥師，研究方向：藥品藥理毒理研究、實驗動物檢測。E-mail：wfzong@sina.com

陸益紅，主任藥師，研究方向：藥品藥理毒理研究、實驗動物檢測。E-mail：yihonglu@163.com

研究報告

R-332

A

1671-7856(2017) 01-0064-03

10.3969.j.issn.1671-7856.2017.01.013

2016-06-14