農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性研究

胡能+楊帥+雷志火+涂曉嶸+涂國全+黃林

摘要：為探討農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性，分別采用稻瘟病易感水稻品種陸兩優(yōu)996和農(nóng)抗702為試驗材料，首先在水稻3葉1心時，將不同濃度的供試農(nóng)抗702分別進行噴施，進行誘導水稻抗瘟性作用最佳濃度的篩選；然后在水稻7個不同生長發(fā)育期進行噴施藥液，進行誘導抗瘟性的水稻最佳生長期和抗瘟性持續(xù)時間的測定。各試驗處理噴施藥液后4 d后分別接種稻瘟病菌孢子液，7 d后分別調(diào)查不同試驗處理的病情指數(shù)和發(fā)病率及誘抗效果。結(jié)果表明：供試6種不同濃度的農(nóng)抗702均能誘導水稻產(chǎn)生抗瘟性，且抗瘟性作用的較佳濃度為15 μg/mL；在水稻7個不同生長發(fā)育期分別噴施濃度為15 μg/mL的農(nóng)抗702，均能誘導水稻抗瘟性，誘導抗瘟性較佳生長期為水稻3葉1心期，其誘抗效果達到56.56%；且水稻抗瘟性作用最佳時期為噴施后48～96 h，其誘導水稻抗瘟性的持續(xù)時間超過144 h。研究為農(nóng)抗702進一步研發(fā)和防治水稻稻瘟病方法的應用提供有益的試驗數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：農(nóng)抗702；水稻；稻瘟病；誘導抗瘟性

中圖分類號： S432.2+6文獻標志碼：

文章編號：1002-1302（2016）08-0158-04

水稻稻瘟病（Magnaporthe oryzae）是威脅全球水稻種植區(qū)域的三大病害之一。目前，稻瘟病的防治措施主要包括化學防治、抗病品種選育和栽培管理；化學藥劑長期大量使用造成環(huán)境、食品安全以及病菌產(chǎn)生耐藥性或抗藥性等問題；選育抗病品種雖然不會造成環(huán)境污染，但是容易喪失抗病性，大面積栽培時抗病性的喪失將會造成農(nóng)作物的巨大損失[1-2]。誘導抗性（induced resistance）是指利用物理、化學或生物因子預先處理植物，激活植物對病蟲害和逆境的反應而產(chǎn)生的局部抗性（過敏性抗性）或系統(tǒng)抗性[3]。植物誘抗劑又稱激發(fā)子（elicitor），是一類能誘導寄主植物產(chǎn)生防衛(wèi)反應的特殊化合物的總稱，且具有使用劑量小、易降解、廣譜性和系統(tǒng)性等優(yōu)勢，可利用激發(fā)子誘導水稻抗瘟性防治水稻稻瘟病，引起國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注；陳桂華等利用前胡作為激發(fā)子[5]，Ueno等利用吲哚衍生物作為激發(fā)子對水稻進行誘導[6]，均可有效增強水稻抗瘟性，從而達到防治水稻稻瘟病的目的。農(nóng)抗702是由江西農(nóng)業(yè)大學生物科學與工程學院應用微生物研究室從土壤中分離篩選到的鏈霉菌702所產(chǎn)生的新型多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素[7]。杜亞楠等研究表明，農(nóng)抗702能夠誘導水稻激活水稻防御酶系統(tǒng)，進而增強水稻抗病能力[8]。本研究以農(nóng)抗702作為激發(fā)子，對水稻誘導抗瘟性作用的最佳誘導濃度、最佳生長發(fā)育時期及誘導水稻抗瘟性的持續(xù)作用時間進行研究。

1材料與方法

1.1供試材料

1.1.1供試藥劑（1）農(nóng)抗702：90%農(nóng)抗702為筆者研究室自行制備；（2）井岡霉素：60%井岡霉素可濕性粉劑，購自江蘇擎宇化工科技有限公司。

1.1.2供試水稻陸兩優(yōu)996，由北京金色農(nóng)華種業(yè)技術(shù)股份有限公司提供。

1.1.3供試菌水稻稻瘟病病菌（Magnaporthe grisea），由江西省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所提供。

1.2試驗方法

1.2.1不同濃度農(nóng)抗702的配制準確稱取702 111.11 mg 90%農(nóng)抗 置于100 mL容量瓶中并用100 mL無水乙醇定容，即成濃度為1 mg/mL的農(nóng)抗702母液，4 ℃冰箱避光保存。試驗時用無菌蒸餾水稀釋成試驗所需濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2不同濃度井岡霉素的配制方法準確稱取60%井岡霉素可濕性粉劑166.67 mg，加無菌蒸餾水定容至100 mL容量瓶配制成1 mg/mL母液，4 ℃冰箱避光保存。試驗時用無菌蒸餾水稀釋成所需濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.3水稻稻瘟病菌培養(yǎng)與孢子懸浮液的制備參照文獻[9-10]。

1.2.4供試水稻培育方法將水稻種子浸于75%乙醇 3 min，用無菌蒸餾水沖洗3次，28 ℃培養(yǎng)箱浸種24 h，催芽48 h。待露白后播種于水稻盆并放于水稻房，水稻生長期間適當施肥。水稻3葉1心期及之前時期播種于小水稻盆，每盆12株，間隔2 cm×2 cm，每個處理4盆；3葉1心期之后移栽于大水稻盆，每穴3株，每盆4穴，穴間隔10 cm×20 cm，每個處理4盆。

1.2.5農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟試驗試驗在控溫控濕的光照玻璃栽培實驗室中進行，均采用單因素的對比試驗設(shè)計。各試驗處理噴施藥液4 d后分別接種稻瘟病菌孢子液。7 d后分別調(diào)查不同試驗處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗效果。同時，分別以15 μg/mL井岡霉素為陽性對照和蒸餾水為陰性對照作同樣處理。

1.2.5.1農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性作用濃度的篩選為了篩選農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性較佳噴施濃度，在水稻幼苗長至3葉1心期，分別用5、10、15、20、30、40 μg/mL農(nóng)抗702進行秧苗噴霧處理。

1.2.5.2農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性較佳作用時期研究為了研究農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性較佳作用時期。試驗采用篩選出的農(nóng)抗702誘導抗瘟性的較佳作用濃度，分別在種子幼芽期、幼苗期（3葉期）、成苗期（4葉期）、返青期、分孽期、孕穗期和結(jié)實期等7個不同生長發(fā)育期進行噴藥處理。

1.2.5.3農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性持續(xù)作用時間研究為了研究農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性持續(xù)作用時間，采用 15 μg/mL 農(nóng)抗702藥液在水稻幼苗期（3葉期）進行噴施后，分別在24、48、72、96、120、144 h時接種稻瘟病菌孢子液。

1.2.6稻瘟病菌接種方法將稻瘟病菌孢子懸浮液加入噴霧器中，對水稻葉片噴霧接種稻瘟病菌孢子懸浮液，直到葉面有小水珠，葉面邊緣有液滴滴下為止；水稻孕穗期用注射器注射稻瘟孢子懸浮液至水稻孕穗或半抽穗的苞內(nèi)，每穗注射 1 mL；水稻結(jié)實期使用噴霧器將稻瘟孢子懸浮液均勻噴灑于水稻穗，直到水稻穗上有水霧但不形成水滴[11]。接種后水稻葉片保持濕潤遮光24 h，水稻房保持28 ℃，濕度不低于95%，7 d后分別調(diào)查各處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗相對效果。

2結(jié)果與分析

2.1農(nóng)抗702誘導水稻的抗瘟性作用濃度的篩選

2.2農(nóng)抗702對水稻不同生長發(fā)育時期的誘導抗瘟作用

采用15 μg/mL農(nóng)抗702分別對種子幼芽期、3葉期、成苗期、返青期、分孽期、孕穗期和結(jié)實期等7個不同生長發(fā)育期水稻進行噴藥試驗，結(jié)果見表2、圖1。

由表2、圖1可知，在陸兩優(yōu)996水稻7個不同生長發(fā)育期分別采用15 μg/mL農(nóng)抗702和井岡霉素進行噴施，均能誘導水稻抗瘟性，且農(nóng)抗702誘導抗瘟性的效果優(yōu)于井岡霉素；農(nóng)抗702誘導抗瘟性較佳生長期為水稻成苗期，其誘抗效果達到56.56%。

2.3農(nóng)抗702對水稻誘導抗瘟性持續(xù)作用時間試驗結(jié)果

采用15 μg/mL農(nóng)抗702在陸兩優(yōu)996水稻3葉1心期噴施并分別在24、48、72、96、120、144 h時分別接種稻瘟病菌孢子液。7 d后分別調(diào)查不同試驗處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗相對效果，詳見表3、圖2。

性均能持續(xù)6 d（144 h）以上，且15 μg/mL農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性的誘抗相對效果從24～144 h均強于相同濃度的井岡霉素；15 μg/mL農(nóng)抗702誘導水稻抗瘟性作用最佳時期為噴施藥液后48～96 h，96 h后抗瘟性逐漸遞減。

3討論與小結(jié)

魏賽金等研究表明，新型多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素農(nóng)抗702在防治水稻紋枯病、稻瘟病和稻曲病試驗中，農(nóng)抗702對水稻防御紋枯病、稻瘟病和稻曲病的保護效果大于其防治效果，農(nóng)抗702對水稻具有誘導抗病性[14-15]。本試驗分別采用稻瘟病[CM（25]易感品種陸兩優(yōu)996水稻和農(nóng)抗702為試驗材料，在水稻[CM）]

3葉1心期，首先采用6種不同濃度的農(nóng)抗702分別噴施，進行誘導水稻抗瘟性作用最佳濃度的篩選；然后在水稻7個不同生長發(fā)育期進行噴施，進行誘導抗瘟性的水稻最佳生長期和抗瘟性持續(xù)時間的測定。各試驗處理噴施藥液4 d后分別接種稻瘟病菌孢子液，7 d后分別調(diào)查不同試驗處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗相對效果。結(jié)果表明：供試6種不同濃度的農(nóng)抗702均能誘導水稻產(chǎn)生抗瘟性，且抗瘟性作用的較佳濃度為15 μg/mL；在水稻7個不同生長發(fā)育期分別噴施濃度為15 μg/mL的農(nóng)抗702，均能誘導水稻抗瘟性，誘導抗瘟性較佳生長期為水稻3葉1心期，其誘抗效果達到56.56%；且水稻抗瘟性作用最佳時期為噴施后48～96 h，其誘導水稻抗瘟性的持續(xù)時間超過144 h。農(nóng)抗702誘導抗瘟性較佳生長期為水稻三葉一心期，本試驗為農(nóng)抗702進一步研發(fā)和在防治水稻稻瘟病的應用方面提供有益的試驗數(shù)據(jù)。

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