AKT2在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中替莫唑胺化療耐藥的作用機(jī)制研究

崔勇，張風(fēng)林，應(yīng)奇，胡國漢，駱純，盧亦成

·論著·

AKT2在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中替莫唑胺化療耐藥的作用機(jī)制研究

崔勇，張風(fēng)林，應(yīng)奇，胡國漢，駱純，盧亦成

目的 研究AKT2基因在U251細(xì)胞株中對(duì)替莫唑胺化療耐藥中的作用機(jī)制。方法 體外將慢病毒介導(dǎo)的AKT2-shRNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞。應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK8)法檢測(cè)RNA干擾AKT2后U251細(xì)胞對(duì)替莫唑胺敏感性的變化情況。流式細(xì)胞儀測(cè)定沉默AKT2基因表達(dá)后各組細(xì)胞凋亡的改變情況。AKT2-shRNA干擾膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U251的AKT2表達(dá)，進(jìn)而采用Western blot實(shí)驗(yàn)方法，來進(jìn)一步分析和評(píng)價(jià)AKT2與MDR-1、MRP-1、MGMT、bcl-2、caspase-3、P53等相關(guān)蛋白表達(dá)情況和相互調(diào)控關(guān)系。結(jié)果 CCK8法檢測(cè)結(jié)果計(jì)算替莫唑胺對(duì)U251細(xì)胞的半數(shù)細(xì)胞抑制濃度(IC50)從U251空白對(duì)照組的(39.72±2.41)μg/ml、陰性對(duì)照組的(39.43±2.24)μg/ml降到(27.23±1.93)μg/ml，AKT2干擾組U251細(xì)胞對(duì)替莫唑胺藥物的IC50值顯著降低。流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡實(shí)驗(yàn)顯示，與空白對(duì)照的U251細(xì)胞[調(diào)亡細(xì)胞(16.95±1.32)%]和轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照的U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞[調(diào)亡細(xì)胞(17.93±2.29)%]相比，轉(zhuǎn)染AKT2 shRNA的U251細(xì)胞中早期、晚期調(diào)亡細(xì)胞明顯增加，總調(diào)亡細(xì)胞達(dá)(38.16±4.83)%，干擾組凋亡水平有顯著性增強(qiáng)(P<0.05)。AKT2-shRNA干擾U251后其凋亡明顯增加，Real-time PCR和蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示bcl-2、survivin、MGMT明顯下調(diào)，而caspase-3、PTEN、P53、beclin-1明顯上調(diào)。結(jié)論 AKT2可能參與調(diào)控bcl-2、caspase-3、P53、survivin、beclin1等凋亡自噬相關(guān)蛋白及DNA損傷修復(fù)蛋白MGMT的表達(dá)，從而介導(dǎo)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U251對(duì)替莫唑胺化療抵抗。

腦膠質(zhì)瘤；AKT2基因；替莫唑胺

替莫唑胺(TMZ)已成為臨床上腦膠質(zhì)瘤一線化療藥物。聯(lián)用替莫唑胺與生物靶向藥物以提高療效和降低毒性反應(yīng)是近年來最為活躍的研究領(lǐng)域之一。我們前期的實(shí)驗(yàn)研究表明替莫唑胺耐藥細(xì)胞株中大量凋亡相關(guān)蛋白和DNA損傷修復(fù)蛋白發(fā)生了明顯的變化，AKT2基因也在耐藥株中明顯上調(diào)[1]，進(jìn)而推斷AKT2在替莫唑胺膠質(zhì)瘤化療耐藥中起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究AKT2-shRNA對(duì)U251替莫唑胺藥物敏感性的作用調(diào)節(jié)機(jī)制。……