老年慢性乙型肝炎患者基因多態性與其耐藥變異的相關性

趙正斌 范文海

(蘭州大學第一醫院傳染科，甘肅 蘭州 730000)

老年慢性乙型肝炎患者基因多態性與其耐藥變異的相關性

趙正斌1范文海2

(蘭州大學第一醫院傳染科，甘肅 蘭州 730000)

目的 研究老年慢性乙型肝炎患者基因多態性與其耐藥變異的相關性。方法 選取接受抗病毒治療的老年慢性乙型肝炎患者188例。檢測患者在使用不同核苷類抗病毒藥物后血清樣本，進行基因測序和分型。結果 C基因型占比顯著高于B基因型、D基因型；且B基因型占比高于D基因型(均P<0.05)。C基因型YIDD突變占比顯著高于B基因型(χ2=7.918，P=0.005)，而B基因型的YVDD突變高于C基因型(χ2=8.965,P=0.000)。B基因型與YVDD突變存在顯著正相關(r=0.783，P=0.000)，同樣C基因型與YIDD突變存在顯著正相關(r=0.819，P=0.000)。單一耐藥中阿德夫韋耐藥率顯著高于拉米夫定與恩替卡韋，在共同耐藥中拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定共同耐藥率顯著高于拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定+恩替卡韋、拉米夫定+阿德夫韋、拉米夫定+替米夫定以及拉米夫定+恩替卡韋。阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥均與B基因型YIDD突變、C基因型YVDD突變顯著正相關(r=0.748，P=0.000；r=0.583，P=0.000；r=0.673，P=0.000；r=0.617，P=0.000)。結論 乙型肝炎病毒(HBV)基因型中B基因型與YVDD突變、C基因型與YIDD突變均正相關，阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥與B基因型YIDD突變、C基因型YVDD突變正相關。通過對HBV基因分型以及耐藥位點的檢測，對臨床及時調整用藥方案有一定幫助。

慢性乙型肝炎；基因多態性；耐藥變異

乙型肝炎病毒(HBV)是引發病毒性肝炎、肝硬化以及肝癌的主要因素〔1，2〕。目前臨床上應用較為廣泛的抗HBV藥物包括拉米夫定、阿德夫韋以及恩替卡韋等。上述抗病毒藥物的應用可有效降低HBV感染風險，但長期使用會導致耐藥性變異的產生，且耐藥后會導致患者HBV-DNA水平顯著升高，肝臟功能也會受到嚴重影響，甚至會導致患者肝衰竭，危及患者生命健康〔3～5〕。因此，明確基因型與耐藥性變異之間的相關性尤為重要。目前臨床上針對該問題研究報道較少。本文研究老年慢性乙型肝炎患者基因多態性與其耐藥變異的相關性。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選取從2014年5月至2016年4月，在我院接受抗病毒治療的老年慢性乙型肝炎患者188例，在治療中出現病毒學反彈，男123例，女65例，年齡61～85〔平均(73.5±4.2)〕歲。納入標準〔5〕：所有患者均符合《乙型肝炎防治指南》所制定的診斷標準。排除標準：①伴有抗丁型肝炎病毒(HDV)、丙型肝炎病毒(HCV)、HBV陽性者；②合并肝臟疾病或HBV攜帶者；③此前接受免疫抑制劑治療者。其中B基因型患者42例，男28例，女14例，年齡63～84〔平均(72.9±4.0)〕歲。C基因型患者137例，男89例，女48例，年齡61～85〔平均(73.7±4.3)〕歲。D基因型患者9例，男6例，女3例，年齡63～84〔平均(73.4±4.3)〕歲。三組患者年齡、性別對比無顯著差異(P>0.05)。

1.2 研究方法 吸取所有患者血清100 μl，置入1.5 ml離心管，隨后加入100 μl DNA提取液Ⅰ液進行混勻，室溫13 000 r/min離心10 min，棄上清液；然后加入25 μl DNA提取液Ⅱ液按照上述過程進行操作，提取上清液，置于-20℃下保存待測。采用核酸擴增技術聯合熒光標記探針雜交方法進行HBV-DNA定量檢測，如定量檢測中患者血清樣本中HBV-DNA高于5×103拷貝/ml，則取3 μl PCR產物與2 μl堿性磷酸酶進行混勻、反應。反應條件分別為37℃60 min，80℃15 min，最后放置于4℃條件下保存。采用PCR純化試劑盒并按照操作規程進行，使用ABI3100自動測序儀行基因測序。對比MegAlign儀(美國DNASTAR公司)所測定的序列，將患者HBV進行基因分型。

1.3 觀察指標 患者HBV不同基因型分布情況(B、C、D基因型)、同基因型YMDD基因突變情況(包括YIDD、YVDD)以及者血清樣本HBV耐藥情況(拉米夫定、阿德夫韋、替米夫定、恩替卡韋)。

1.4 統計學方法 通過SPSS19.0統計軟件進行χ2檢驗。

2 結 果

2.1 患者HBV不同基因型分布情況 C基因型占比(72.87%)顯著高于B基因型(22.34%，χ2=96.231，P=0.000)和D基因型(4.79%，χ2=183.454，P=0.000)；且B基因型占比高于D基因型(χ2=24.704，P=0.000)，說明HBV患者以C基因型為主，B基因型次之。

2.2 不同基因型YMDD基因突變情況及相關分析 C基因型YIDD突變占比顯著高于B基因型(χ2=7.918，P=0.005)，而B基因型的YVDD突變高于C基因型(χ2=8.965,P=0.000)。B基因型與YVDD突變存在顯著正相關(P=0.000)，同樣C基因型與YIDD突變存在顯著正相關(P=0.000)。見表1，表2。

表1 不同基因型YMDD基因突變情況〔n(%)〕

與B基因型比較:1)P<0.05

表2 不同基因型突變情況相關性分析

2.3 患者血清樣本HBV單一耐藥、共同耐藥情況 單一耐藥中阿德夫韋耐藥率(13.83%)顯著高于拉米夫定(1.06%)與恩替卡韋(0.53%)，在共同耐藥中拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定共同耐藥率(34.04%)顯著高于拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定+恩替卡韋(3.72%)、拉米夫定+阿德夫韋(1.60%)、拉米夫定+替米夫定(1.60%)以及拉米夫定+恩替卡韋(0.53%)(P<0.05)。相關性分析顯示阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥均與B基因型YIDD突變(r=0.747,P=0.000;r=0.673,P=0.000)、C基因型YVDD突變顯著正相關(r=0.583,P=0.000;r=0.617,P=0.000)。

3 討 論

拉米夫定等常用的核苷類似藥物作為臨床上應用最廣泛的抗HBV藥物，其主要作用機制是通過對HBV多聚酶的逆轉錄活性進行抑制，從而降低HBV的復制，進一步促進了乙型肝炎e抗原的血清學轉換，最終達到消除病毒，改善患者肝臟組織病理的作用〔6～8〕。由于慢性乙型肝炎患者的治療周期較長，同時為了避免在病情沒有得到徹底緩解的情況下停藥易引發病毒耐藥的發生，導致病情加重，通常情況下在未得到醫師的同意前需長期用藥〔9〕。但長期不間斷用藥不可避免地會提高耐藥發生率，且HBV具有一定的突變率，而變異病毒株可通過改變免疫原性以及致病性，從而導致患者出現免疫應答的相應變化，最終使得患者病情加重〔10〕。

本研究發現，HBV基因型分布從高到低分別是C基因型、B基因型、D基因型。其中D基因型屬于我國北方地區較為少見的基因型，而B與C混合基因型則是沒有檢出，這可能是與地區性差異有關〔11〕。進一步將YMDD基因突變率按照從高到低的順序進行排列，依次是C基因型、B基因型、D基因型，其中YVDD突變顯著高于YIDD突變。其中C基因型在乙型肝炎患者中屬于優勢基因型，這也導致了感染C基因型HBV的患者相比感染其他基因型HBV的患者病情更易進展加劇。與此同時，B基因型與YVDD突變存在顯著正相關，而C基因型與YIDD突變存在顯著正相關。這表明了基因型突變與患者臨床病情發展存在一定相關性。臨床也有其他研究報道證實C基因型HBV與肝硬化、肝癌之間相關性最為顯著〔12〕。此外，本研究顯示阿德夫韋、拉米夫定+阿德夫韋+替米夫定耐藥均與B基因型YIDD突變、C基因型YVDD突變顯著正相關。究其原因，考慮這主要是由于不同基因型在病毒的結構、復制能力、病毒的變異以及對藥物不同程度的敏感性存在差異而導致的。同時也表明了隨著抗病毒藥物的長期應用，部分患者已經出現較為嚴重的共同耐藥情況，從而使得臨床治療難度加大。而通過基因分型及耐藥位點的檢測有利于臨床治療中抗病毒藥物的更加合理使用，有效地避免了大量人力、物力、財力的浪費，提高抗病毒藥物治療效果〔13～15〕。

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15 Lao X,Wang X,Liu Y,etal.Association of paraoxonase 1 gene polymorphisms with the risk of hepatitis B virus-related liver diseases in a Guangxi population:a case-control study〔J〕.Medicine (Baltimore),2015;94(48):2179-80.

〔2016-05-13修回〕

(編輯 曹夢園)

趙正斌(1974-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事肝病及傳染病臨床研究。

R512.6+2

A

1005-9202(2017)02-0417-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.02.071

1 蘭州大學第一醫院東崗院區傳染科 2 蘭州大學第一臨床醫學院