大川芎口服液中天麻素在大鼠體內的藥動學研究

楊 洋 邵芳斐 陳 飛 印媛君*

大川芎口服液由川芎和天麻組成［1］，有活血化瘀、平肝熄風之功效。大川芎口服液用于瘀血阻絡，肝陽化風所致的頭痛、頭脹、眩暈、頸項緊張不舒、上下肢或偏身麻木、舌部瘀斑，是主治頭風及瘀血型頭痛的常用藥物。天麻是方中君藥，天麻素是天麻的主要活性成分，具有鎮靜、安神和鎮痛等中樞抑制作用［2］，臨床上主要用于治療神經衰弱、血管神經性頭痛、神經衰弱綜合征和恢復腦功能等。目前，天麻素的藥代動力學研究已有文獻報道［3-5］，但大川芎口服液中天麻素的藥動學以及配伍對天麻素藥動學性質的影響尚未見報道，本實驗將研究低、中、高劑量大川芎口服液中天麻素在大鼠體內的藥動學過程，探討配方成分對天麻素的吸收、分布、消除的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器 循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）、TC-15A型電子恒溫電熱套（海寧市華星儀器廠）、旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）、超聲波清洗器（上海躍進醫用光學器械廠）、臺式離心機（珠海黑馬醫學儀器有限公司）、液相色譜分析儀（島津企業管理有限公司）、分析天平（福州華志科學儀器有限公司）、HSC-12A氮吹儀（北京卓信偉業科技有限公司）。

1.2 實驗藥物 天麻（購于浙江中醫藥大學名中醫館）、大川芎口服液（遼寧東方人藥業）、天麻素標準品。

1.3 實驗材料與試劑 乙腈為色譜純（上海邁瑞爾化學技術有限公司），95%乙醇（東灣市東江化學試劑有限公司）、肝素鈉（山東萬邦塞諾康生化制藥股份有限公司）、間苯三酚（江蘇仲鼎化工有限公司）、磷酸（深圳市鑫三和環?？萍脊荆┑葹榉治黾?。

1.4 實驗動物 健康SPF級Wistar大鼠，雌雄各半，32只，體重（150±20）g，由浙江中醫藥大學動物實驗研究中心提供，手術、治療程序和動物福利的執行嚴格按照國家衛生機構的動物實驗保健守則和浙江中醫藥大學動物實驗中心使用指南。大鼠生存環境為12h光照和12h黑暗周期，相對濕度45%～50%，溫度（22±2）℃，適應5d。

1.5 實驗方法 （1）灌胃藥品制備：天麻的提?。?0℃下，采用6倍量的40%乙醇回流提取2 h，提取3次［6］。根據目前臨床推薦的大川芎口服液說明書，以及藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算和預實驗結果［4-5］，以低、中、高劑量比為1∶2∶4，本實驗最終確定大鼠灌胃大川芎口服液低劑量相當于天麻素的1.49mg/kg，中等劑量為2.98mg/kg，高劑量為5.96mg/kg。（2）分組：取32只健康雌雄各半的SPF級Wistar大鼠，體重（150±20）g，將大鼠隨機分成4組，包括大川芎口服液低、中、高劑量組和天麻素提取物組。每組8只，雌雄對半。（3）給藥：給藥前禁食12 h，自由飲水。低、中、高劑量的大川芎口服液組分別灌胃（劑量為1.49mg/kg、2.98mg/kg、高劑量為5.96mg/kg），天麻提取物組灌胃，劑量為相當于天麻素的2.98mg/kg。（4）采集血漿樣品：血漿采集：大鼠灌胃后，于5、10、15、30、45、60、90、120、180、240、360、480min眼底靜脈叢取血0.5 ml，置肝素處理的試管內，離心10min（10000r/min），精密吸取上層血漿0.2ml，置-20℃冰箱保存備用。進樣處理：血漿自然解凍后，精密吸取血漿200 μl，依次加入流動相100 μl，內標液間苯三酚100 μl，渦旋振蕩30 s后，加入乙腈1.0 ml，渦旋振蕩1 min，離心10 min（12000 r/min），取上清液1.2 ml，氮氣吹干，殘渣用流動相200μl溶解，離心10 min（12000r/min），取上清液20μl進樣高效液相色譜分析。（5）高效液相分析：色譜條件：Hypersil BDS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）內標為間苯三酚；流動相乙腈-0.05%磷酸（3∶97）；流速1.0ml/min；檢測波長220nm；柱溫30℃ ；進樣量 20μl。

1.6 數據分析 低、中、高劑量組與天麻提取物組實驗數據采用 WinNonlin 5.2.1 藥代動力學軟件處理，尋找合理的模型進行曲線擬合。灌胃給藥后天麻素的血藥濃度-時間數據采用WinNonlin.2.1代動力學軟件進行處理，計算藥動學參數。采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行統計分析，各參數采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 方法學考察 （1）線性考察：取空白血漿200μl 7份，依次加入不同濃度天麻素系列對照品溶液100 μl和內標溶液100μl，配制成系列質量濃度為0.1270、0.5078、2.0310、8.1250、32.5000、65.0000、130.0000 mg/L天麻素血漿樣品，照第4項下處理，進樣20μl測定以天麻素質量濃度為橫坐標，天麻素與間苯三酚面積比值為縱坐標，用加權最小二乘法進行回歸計算，得線性回歸方程y=0.0455x-0.423（r2=0.9997），線性范圍0.24～70μg/ml。（2）專屬性考察：分別取空白血漿、空白血漿加內標加天麻素對照品及口服液給藥血漿，分別進行處理并測定，圖1是不同來源樣品的色譜分離圖。結果表明，血漿中的內源性物質不干擾天麻素和內標物的測定，內標與天麻素峰形成良好，保留時間分別為15.148和18.115。（3）精密度考察：取采集的血漿樣品，進樣處理后，于1d內和3d內測定結果（日內精密度和日間精密度）。日內精密度（RSD）分別為7.77%、1.89% 和1.46%，日間精密度（RSD）分別為為8.59%、9.11% 和5.67%。（4）穩定性考察：取采集的血漿樣品，進樣處理并測定結果；血漿樣品冷凍（-20℃）保存15d，天麻素的RSD為2.49%；反復凍融3次，天麻素的RSD為7.49%。血漿樣品室溫放置4h，天麻素的RSD為2.13%；處理后的血漿樣品室溫放置12h，天麻素的RSD為2.92%。（5）相對回收率考察：采集血漿樣品，進行處理并測定，測得天麻素濃度與血漿中天麻素實際濃度的比值，計算得相對回收率85.75%（RSD=1.83%）。用水代替血漿樣品，再進行處理并測定，以每一濃度2種處理方法的峰面積比計算，得提取回收率為96.03%（RSD=0.77%）。

圖1 不同來源樣品的色譜分離圖

2.2 藥時曲線及藥動學參數 （1）藥時曲線：大鼠灌胃低、中、高3個劑量，大川芎口服液的平均血藥濃度-時間曲線見圖2，中劑量口服液組和含相同劑量天麻素的天麻提取物組的平均血藥濃度-時間曲線見圖2。（2）藥時曲線擬合及藥動學參數：低、中劑量口服液組天麻素在大鼠體內符合一級吸收非房室模型，高劑量口服液組天麻素在大鼠體內符合零級吸收非房室模型。見表1。

表1 低、中、高劑量組及天麻提取物組藥代動力學參數（

表1 低、中、高劑量組及天麻提取物組藥代動力學參數（

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圖2 低﹑中﹑高劑量組及天麻提取物組天麻的平均血藥濃度-時間曲線

3 討論

本實驗灌胃低、中、高劑量大川芎口服液后，所得的天麻素的藥動學參數存在一定的差異。低劑量組與中劑量組相比，T1/2、AUC0-∞隨給藥劑量增加線性增大，因此，推測天麻素在1.49～2.98mg/kg劑量時在大鼠體內為線性動力學過程，即符合一級吸收非房室模型，劑量＞5.96mg/kg時則為非線性動力學過程，即符合零級吸收非房室模型。

對比分析大鼠灌胃中劑量的大川芎口服液和天麻提取物時的藥動學參數，AUC0-∞、Tmax和Cmax顯著變?。≒＜0.01），T1/2增大，表明配方成分對天麻素的吸收、分布、消除、代謝均有一定程度的影響。天麻提取物組的Cmax顯著降低（P＜0.01），說明配伍有促進天麻素體內分布的趨勢。大川芎口服液組的T1/2相對延長，說明配伍可以降低天麻素的消除速率，增加半衰期，增加藥物在體內的作用時間，延長藥效。

灌胃大川芎口服液時，天麻素的藥-時曲線出現雙峰現象，天麻提取物對大鼠給藥未見雙峰。藥物的吸收出現多峰存在多種原因，如代謝過程中的腸肝循環、胃腸循環、多部位吸收、體內再分布、分布過程中的蛋白競爭、藥物的特殊劑型等［6］。天麻素的血漿蛋白結合率較低，因此蛋白結合并非引起雙峰現象的原因。與天麻提取物組相比，口服液組中天麻素的AUC0-∞無顯著差異，Cmax顯著變小，說明口服液中其他成分對天麻素在大鼠體內的分布產生了影響，引起藥物在某些組織器官的蓄積及緩慢釋放。

本實驗參數反映了大川芎口服液中天麻素的藥動學特征，可用于對該藥劑科學的評價分析；同時利用這些參數及臨床靶濃度可計算給藥劑量、給藥間隔時間和制定給藥方案，從而為臨床上指導合理用藥提供實驗依據。

［1］ 周耀群,張霄峰,黃力強,等．大川芎口服液臨床與實驗研究．中國科學技術協會﹑四川省人民政府．加入WTO和中國科技與可持續發展—挑戰與機遇﹑責任和對策(下冊)．中國科學技術協會﹑四川省人民政府:2002:2．

［2］ 王洪喜．天麻治療頭痛的藥對配伍規律．山東中醫雜志,2006,25(2):101-103．

［3］ 蔡錚,候世祥,劉中秋,等．灌胃天麻素小鼠腦組織中天麻苷元的藥動學研究．中草藥,2009,40(3):389-391．

［4］ 楊園,韓鳳梅,杜鵬,等．復方天麻顆粒在大鼠體內的藥動學研究．藥學學報,2010,45(4):484-488．

［5］ 華雯妍,朱藝芳,張全英．天麻素血藥濃度測定及藥動學研究．中國現代應用藥學,2010,27(7):634-636．

［6］ 郭增 軍,蘇紀蘭,王開,等．天麻提取 工藝 的研究．中藥材,2002,25(5):348-349．