丹參素在加溫加速條件下的含量測定的教學體會

謝曉燕

長春中醫藥大學附屬醫院藥學部，吉林長春 130021

丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，主要化學成分為水溶性酚酸和酯溶性二萜醌，藥理作用為活血通經、祛瘀止痛、清心除煩。丹參素是丹參中含量較多的水溶性酚酸類化合物，具有改善冠脈循、抗血小板凝集、抗感染、拮抗鈣等功效，廣泛應用于心、腦、肝等疾病的活血化瘀治療[1-3]。丹參注射液是臨床常用丹參藥物，主要成分為為鄰苯二羥基類化合物丹參素，丹酚酸A、B、C，迷迭香酸，原兒茶醛、原兒茶酸、四甲基丹酚酸等。其中丹參素常作為預測、評價丹參注射液穩定性的參考指標。有研究發現丹酚酸A、B、C和迷迭香酸在加溫條件下可發生酯鍵水解生成丹參素進而對丹參素含量測定造成干擾。臨床實習教學工作是培養優秀的醫務人才的重要步驟，該文選擇2016年8月—2017年8月來該院實習的實習生14名作為研究對象，參與加溫加速條件下丹參注射液中含量測定對照教學，效果良好，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取來該醫院實習的實習生14名作為研究對象，將其隨機分為試驗組和對照組，每組7名。試驗組：女性 4 名，男性 3 名，年齡 20～22 歲，平均（21.0±1.1）歲；對照組：女性3名，男性4名，年齡19～22歲，平均年齡（21.5±1.4）歲。兩組實習生在年齡、性別、專業基礎等基礎資料方面差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 儀器與試劑

高效液相色譜儀（山東金普分析儀器有限公司）、超級恒溫水浴箱(重慶)、電子天平、TGL216G高速臺式離心機(上海安亭科儀器廠)、DVW210紫外檢測器、Hypersil2ODS2色譜柱(4.6 mm×150 mm ，5 μm)；丹參注射液(自制，規格2 mL/支)；丹參素鈉對照品(含測用)；其余試劑均為分析純。

1.3 方法

對照組學生采用傳統的教學模式進行教學，由帶教老師按照臨床實習教學大綱進行丹參素含量測定相關理論知識的講授，并定期對學生進行考核，并聽取學生和領導的教學反饋。試驗組實習生參與帶教老師的藥品含量測定對照研究教學。①供試品的制備知識：丹參素對照品溶液的制備，稱取150 mg丹參素鈉對照品，溶于100 mL容量瓶，加水定容至刻度，搖勻灌封于2 mL安瓿中；丹參注射液，該實驗室擬定工藝制備的1 g/mL丹參藥材(規格2 mL/支)的注射液。②丹參素含量測定：采用HPLC進行丹參素含量測定，以甲醇0.2 mol/L醋酸銨(12∶88，H2SO4調節 pH=2.2)為流動相于280 nm下檢測③恒溫加速試驗：取供試樣品分別置于80、85、90、95℃的恒溫水浴(溫差±1℃)內加熱。不同時間間隔定時取樣，每次2支，迅速冰水浴冷卻，混勻，依法測定含量。實習結束后，對兩組實習生進行考核，考核內容包括理論知識治療方法及對教學滿意度等情況。

1.4 觀察指標及判定標準

①丹參素含量變化。②實習生的考核成績比較[4-7]。

1.5 統計方法

比較兩組數據用SPSS 19.0統計學軟件分析，計數資料采用百分比（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料用均數±標準差表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 丹參素對照品、丹參注射液加溫加速實驗含量測定結果

2 結果

2.1 兩組測定丹參素含量變化

該研究中丹參素含量在加溫加速條件下含量變化見表1。在試驗各溫度下，試驗組丹參素含量隨加速時間的延長而增加，且溫度愈高，加速時間愈長，含量增加愈多。

2.2 兩組實習生考核成績比較

試驗組考核成績明顯好于對照組，試驗組最高分為96分，最低分80分；對照組最高分83分，最低分76分，差異有統計學意義（t=1.67，P=0.002），見表 2。

表2 兩組實習生考核平均成績比較[（±s），分]

表2 兩組實習生考核平均成績比較[（±s），分]

組別平均分對照組（n=7）試驗組（n=7）t值 P值75.06±5.45 88.21±5.13 1.67 0.002

3 討論

丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，主要化學成分為水溶性酚酸和酯溶性二萜醌，具有活血通經、祛瘀止痛、清心除煩的藥理作用。丹參制劑是臨床常用的于心、腦、肝等疾病的活血化瘀治療，其內含有的丹參素，是一種水溶性酚酸類化合物，具有明顯的改善冠脈循、抗血小板凝集、抗感染、拮抗鈣等功效。但是，丹參制劑容易受外界條件影響發生降解或者制劑中其他成分在加溫加速條件下其他物質發生反應生成丹參素，進而影響藥物制劑中丹參素的含量。測定丹參素的含量是臨床評價預測丹參制劑質量及穩定性的重要參考指標。

在該研究中，試驗組丹參素含量隨加速時間的延長而增加，且溫度愈高，加速時間愈長，含量增加愈多。分析其原因可能為加溫加速條件下丹參注射液中含有的丹酚酸A，B，C及迷迭香酸等酚酸類化合物易發生酯鍵水解生成丹參素，從而使注射液中丹參素測定含量增加，此外，也要注意到加溫加速條件下丹參素為酚酸類化合物，含鄰苯二羥基，在水溶液中易解離形成氧負離子自動氧化而生成有色醌類物質，丹參素也會發生降解，故實際生成的丹參素含量會比測定值更高。故而在臨床評估預測丹參制劑穩定性中，要綜合考慮溫度、時間的影響。丹參制劑教學方面，相較于對照組傳統教學模式，試驗組的教學方法更加深入、具體、全面，實習生對于丹參素含量測定相關理論知識掌握更充分、全面，對測試方法、注意事項、原理機制的理解也更具象，自主學習能力也有很大提升。該研究中試驗組平均成績為（88.21±5.13）分，對照組平均成績為（75.06±5.45）分，實驗組成績明顯優于對照組，經統計學分析，差異有統計學意義(P＜0.05)。

綜上所述，加溫加速條件，丹參制劑中丹參素含量增加，且溫度愈高，時間愈長，含量愈多，在預測、評價丹參制劑的穩定性時要綜合考慮溫度時間的影響。在臨床教學中，指導實習生積極參與藥物含量測定的對照研究中，實習生對于藥物基本知識、藥理作用機制、藥物間相互影響等相關理論的掌握更系統全面，臨床操作技能明顯提升，值得廣泛推廣應用。

[1]蔡薇.研究丹參藥材中丹參素含量測定的不同提取方法[J].中醫臨床研究，2015，7(9):41.

[2]吳燕燕，薛俊超，曹蔚斌，等.維生素C和pH值對丹參酚酸B穩定性的影響[J].浙江中醫雜志，2014，49(8):618．

[3]唐娜，杭太俊，葉正良，等.丹參提取物中酚酸類成分穩定性及降解動力學研究[J].時珍國醫國藥，2013，24(7):1631．

[4]李愛勇，昊寶，劉紅旭，等.廖元益氣活血膠囊中丹參素的測定及藥物代謝動力學研究[J].北京中醫藥，2015，31(3)：180.

[5]余曉峰.復方丹參滴丸中丹參素的含量測定[J].中國醫藥指南，2013，11(17):85.

[6]劉敏彥，趙韶華，蓋瀟榫，等.丹參不同提取方法中水溶性成分含量的比較研究[J]．時珍國醫國藥，2013，18(5)：1188.

[7]王蓉.丹酚酸B藥理作用的研究概況[J].中醫藥導報,2011(4):198.