人類抗病毒因子APOBEC3H的研究進(jìn)展

吳小霞

(瓊臺(tái)師范學(xué)院 數(shù)理系，海南 海口 571100)

?

·綜 述·

人類抗病毒因子APOBEC3H的研究進(jìn)展

吳小霞

(瓊臺(tái)師范學(xué)院 數(shù)理系，海南 海口 571100)

人類22號(hào)染色體編碼了7個(gè)具有抗反轉(zhuǎn)錄病毒和抗反轉(zhuǎn)錄元件功能的胞嘧啶脫氨酶，可以使病毒反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中產(chǎn)生的負(fù)鏈DNA上的胞嘧啶脫氨基變成尿嘧啶，導(dǎo)致正鏈DNA上出現(xiàn)G→A的突變，即APOBEC3。APOBEC3都有一個(gè)或兩個(gè)催化域，而每個(gè)催化域都有保守基序HX1EX23- 24CX2- 4C。APOBEC3H是唯一一個(gè)含有Z3 APOBEC脫氨酶域的蛋白。在外周單核細(xì)胞，肝臟、皮膚等不同組織均已檢測(cè)到APOBE3H的單倍型，包括HapⅠ、HapⅡ、HapⅢ、HapⅣ、HapⅤ、HapⅥ和HapⅦ。不同的APOBEC3H單倍型具有不同的抗病毒功能。APOBEC3H可顯著地抑制HIV- 1的復(fù)制，優(yōu)化APOBEC3H的體內(nèi)表達(dá)水平，可成為一種治療HIV- 1的新對(duì)策。

載脂蛋白BmRNA催化樣蛋白； 載脂蛋白BmRNA催化樣蛋白3H； 病毒感染因子； 綜述

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1，HIV- 1)是反轉(zhuǎn)錄病毒，在宿主細(xì)胞內(nèi)利用反轉(zhuǎn)錄酶將病毒RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，cDNA進(jìn)入細(xì)胞核被整合到細(xì)胞染色體，因宿主不能有效控制HIV- 1復(fù)制，導(dǎo)致宿主CD淋巴細(xì)胞減少及免疫功能的紊亂，產(chǎn)生獲得性免疫缺乏綜合征(acquired immune deficiency syndrome，AIDs)[1]。人類22號(hào)染色體編碼7個(gè)載脂蛋白BmRNA催化樣蛋白3(apolipoprotein B mRNA editing enzyme- catalytic polypeptide like3，APOBEC3)，即APOBE3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3DE、APOBEC3F、APOBEC3G及APOBEC3H[2- 3]。它們利用其胞嘧啶脫氨酶活性將HIV- 1反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的負(fù)鏈cDNA中的C脫氨基變?yōu)閁，導(dǎo)致正鏈DNA上出現(xiàn)G→A突變，從而使基因組發(fā)生超突變，因此具有強(qiáng)大的抗反轉(zhuǎn)錄病毒和抗反轉(zhuǎn)錄元件的功能[2- 6]。另外，APOBEC3還能對(duì)抗人T細(xì)胞白血病病毒(human T- cell leukemia virus，HTLV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)、人類乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)、人皰疹病毒(human herpers viruses，HHV)等引起的感染[7]。APOBEC3G是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的APOBEC3成員[8]，APOBEC3H是APOBEC3家族最特殊的成員。APOBEC3H在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)較少，一旦APOBEC3H表達(dá)，可使HIV- 1的感染性降低150倍[2]，這說(shuō)明APOBEC3H具有極為強(qiáng)大的抗病毒功能，若優(yōu)化APOBEC3H的體內(nèi)表達(dá)水平，可為HIV- 1的治療提供新的對(duì)策。已有研究顯示APOBEC3也對(duì)癌癥治療有一定作用。這些都說(shuō)明研究并揭示APOBEC3H的特征將為人類治療這些疾病帶來(lái)新的希望。

1 APOBEC3H概述

人類APOBEC3H基因位于22q13.1，位于APOBEC3G的基因下游，編碼6個(gè)外顯子。由于最后一個(gè)外顯子上的早熟終止密碼子(premature termination codon，PTC)嚴(yán)重破壞了mRNA的表達(dá)，導(dǎo)致APOBEC3H在活體細(xì)胞中表達(dá)較弱，而修復(fù)PTC后卻在培養(yǎng)細(xì)胞中檢測(cè)到大量的APOBEC3H[2]。

人類APOBEC3H具有單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)，在此基礎(chǔ)上產(chǎn)生了5個(gè)單點(diǎn)氨基酸多態(tài)性，分別為N15△、R18L、G105R、K121D和E178D，使APOBEC3H產(chǎn)生了突變體，目前已檢測(cè)出7個(gè)單倍型。在人類外周血、單核細(xì)胞、肝臟、皮膚等[4]不同組織均檢測(cè)到APOBEC3H單倍型，命名為HapⅠ(NRGKE)、HapⅡ(NRRDD)、HapⅢ(△RRDD)、HapⅣ(△LRDD)、HapⅤ(NRRDD)、HapⅥ(△LGKD)和HapⅦ(NRRKE)[4]。HapⅠ在人群中普遍存在，HapⅡ主要是在非洲血統(tǒng)的人群中被發(fā)現(xiàn)，HapⅢ和HapⅣ人群中都有分布，但出現(xiàn)的頻率較低，而HapⅤ可在來(lái)自亞洲、非洲及高加索的人群中發(fā)現(xiàn)，HapⅥ在亞洲人群中出現(xiàn)，HapⅦ主要是在歐洲的高加索人群中發(fā)現(xiàn)[7，9- 10]。

人體APOBEC3H單倍型具有不同的細(xì)胞穩(wěn)定性，在3種穩(wěn)定的HapⅡ、HapⅤ和HapⅦ中，HapⅡ和HapⅤ在人群中出現(xiàn)最頻繁[11]。Refslan等[12]發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定的/不穩(wěn)定的表型是原發(fā)CD4+T細(xì)胞內(nèi)源APOBEC3H蛋白的本質(zhì)屬性，以依賴感染病毒的Vif蛋白的自然變異的方式產(chǎn)生抗HIV- 1感染的不同抵抗力。穩(wěn)定/不穩(wěn)定APOBEC的地理分布與一個(gè)重要的高/底功能的Vif氨基酸殘基的分布有關(guān)。

Cagliani等認(rèn)為在非洲之外由于自然選擇產(chǎn)生了大量的減弱酶穩(wěn)定性的突變，如105G；而N15△在所有人群中性進(jìn)化[13]。這可能是由于古老非洲環(huán)境中的選擇壓力保持了APOBEC3H的多樣性，包括HapⅡ[7，9，13]。盡管HapⅠ穩(wěn)定性不高，離開(kāi)非洲使人們陸續(xù)暴露于新的病原體環(huán)境中，感染會(huì)促進(jìn)HapⅠ的傳播[7，9，13]。

2 APOBEC3H的結(jié)構(gòu)特征

APOBEC3蛋白都有1個(gè)或2個(gè)具有保守基序HX1EX23- 24CX2- 4C[10，13](X為任意氨基酸)的胞嘧啶脫氨酶域(cytidine deaminase domain，CDD)。CDD與Zn離子合作，His和Cys與一個(gè)Zn離子結(jié)合，而Glu被認(rèn)為在催化作用中起到了啟動(dòng)子觸發(fā)器的作用[10，13]。根據(jù)二者之間氨基酸的結(jié)合特異性將APOBEC3分為3類：Z1(APOBEC3A、APOBEC3B與APOBEC3G的C末端CDD)、Z2(APOBEC3C、APOBEC3B和APOBEC3G的N末端CDD，APOBEC3D和APOBEC3F的C末端CDD與N末端CDD)和Z3(APOBEC3H)。APOBEC3蛋白以單體、二聚體和寡聚復(fù)合物的形式出現(xiàn)[6，13]。APOBEC3H是APOBEC3家族唯一一個(gè)有Z3型Zn離子結(jié)合域的蛋白[6，13- 14]。

APOBEC3H的Z3域與其他APOBEC3蛋白的Z1域和Z2域的序列對(duì)比顯示有28%～43%的相似性，與APOBEC3C的Z2域及APOBEC3F的C末端CDD有更高的序列相似性，與APOBEC3D的N末端CDD相似性較低[5]。事實(shí)上，APOBEC3H的特征更類似于雙域蛋白APOBEC3G和APOBEC3F的N末端CDD[5，14]。APOBEC3G和APOBEC3F的N末端CDD在包裝進(jìn)入病毒粒子過(guò)程中結(jié)合病毒RNA而起重要作用，但是卻沒(méi)有酶活性。由于APOBEC3H只有一個(gè)域，所以它能與RNA結(jié)合，也能與底物結(jié)合，具有酶活性[5]。

APOBEC3H似乎同時(shí)利用脫氨酶依賴和非依賴性機(jī)制來(lái)靶向逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程并限制HIV- 1復(fù)制[5]。胞嘧啶脫氨酶可抵抗HIV- 1是因?yàn)樗鼈兙哂惺蛊浒b進(jìn)入HIV- 1而產(chǎn)生抗病毒功能的特殊的RNA結(jié)合活性。Wang等[3]發(fā)現(xiàn)APOBEC3H病毒粒子的包裝不依賴胞嘧啶脫氨酶域，而是依賴于一個(gè)基序YYFW。YYFW基序用一種RNA依賴的方式結(jié)合HIV- 1的核衣殼，而一個(gè)Y112A的突變完全破壞病毒粒子的進(jìn)入。

APOBEC3H獨(dú)特的YY(F/Y)W基序結(jié)合7SLRNA可使其有效地進(jìn)入HIV- 1病毒粒子，APOBEC3H HapⅡ也具有強(qiáng)大的抗病毒功能是因?yàn)榭梢员挥行У匕b進(jìn)入病毒粒子，可結(jié)合的宿主小RNAs有7SL和Y RNAs[4]。YY(F/Y)W基序的關(guān)鍵氨基酸W115A突變，導(dǎo)致APOBEC3表達(dá)水平降低并削弱了對(duì)7SLRNAs的親和力，減弱了病毒粒子的包裝而降低了抗病毒功能。APOBEC3H HapⅠ對(duì)宿主小RNAs的結(jié)合力較低，所以降低了病毒粒子進(jìn)入的速率，導(dǎo)致抗病毒功能大大下降[4]。

APOBEC3H HapⅢ和HapⅣ的SNP ΔN15喪失了與RNAs結(jié)合的功能，APOBEC3H HapⅡ Δ15N也不能包裝進(jìn)入HIV- 1的病毒粒子或表現(xiàn)抗病毒功能。APOBEC3H單倍型具有不同的細(xì)胞定位，這與它們不同的RNA結(jié)合力有關(guān)[7，15]。因此，與Pol- Ⅲ RNA例如7SLRNA的結(jié)合是人類APOBEC3胞嘧啶脫氨酶強(qiáng)大抗病毒功能的一個(gè)保守的結(jié)構(gòu)。

3 APOBEC3H的抗病毒機(jī)制

不同的APOBEC3H單倍型具有不同的抗病毒功能，而具有強(qiáng)大抗病毒功能的APOBEC3H單倍型主要分布在細(xì)胞質(zhì)中[7]。Naruse等[16]報(bào)道具有功能多樣性的AOBEC3H的兩個(gè)單倍型N15△和G105R，與HIV- 1感染的容易程度有關(guān)。N15△或G105R突變會(huì)完全破壞APOBEC3H的表達(dá)，因此，只有HapⅡ、HapⅤ和HapⅦ可穩(wěn)定表達(dá)并抑制HIV- 1復(fù)制，因?yàn)樗鼈儧](méi)有出現(xiàn)N15△或G105R突變。APOBEC3H與APOBEC3G具有相同的抗病毒機(jī)制。APOBEC3H可通過(guò)酶依賴的及非酶依賴的途徑來(lái)抑制病毒感染，酶依賴的途徑為主要途徑[17]。APOBEC3H蛋白可利用其胞嘧啶脫氨酶活性，在病毒反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中使新生的病毒cDNA鏈上dC脫氨基變成dU，導(dǎo)致正鏈DNA上出現(xiàn)G→A的突變，使得復(fù)制終止[2- 6，7，9- 18]。

HIV- 1基因組編碼的附屬蛋白Vif可以與Cullin5、ElonginB、ElonginC及RBX1等形成E3連接酶復(fù)合物，作為定位靶APOBEC3的底物識(shí)別亞基，啟動(dòng)病毒生產(chǎn)細(xì)胞內(nèi)的泛素- 蛋白酶體依賴的降解[19- 20]。Zhao等[21]發(fā)現(xiàn)Vif上有功能的關(guān)鍵域?qū)loB/C、Cul5和CBFβ之間的聯(lián)系有重要作用，是HIV- 1 Vif介導(dǎo)的G2/M細(xì)胞周期停滯和APOBEC3H降解所必須的，使APOBEC3H失活的HIV- 1Vif突變體不能引起G2/M細(xì)胞周期停滯。

當(dāng)Vif在功能強(qiáng)大時(shí)，HIV- 1可對(duì)抗穩(wěn)定的APOBEC3H蛋白和所有的內(nèi)生APOBEC3蛋白并能大量復(fù)制。APOBEC3H的蛋白水平由于感染而增長(zhǎng)了10多倍[12]。對(duì)比APOBEC3H與APOBEC3G的氨基酸序列發(fā)現(xiàn)，APOBEC3G的Vif應(yīng)答基序DPDY在APOBEC3H并不保守，APOBEC3H內(nèi)替換這一基序并沒(méi)有降低其對(duì)HIV- 1Vif的抵抗性[5]。因此，穩(wěn)定表達(dá)的APOBEC3H單倍型在人群中的分布可能比之前認(rèn)為的更廣泛。這也說(shuō)明APOBEC3H在抑制反轉(zhuǎn)座子和HIV- 1的感染中有重要作用。

Feng等[11]闡述了HapⅡ和HapⅤ搜索ssDNA底物尋找含胞嘧啶脫氨酶基序的機(jī)制，HapⅡ能利用滑行、跳躍和節(jié)間轉(zhuǎn)移動(dòng)作在酶- 底物相遇后連續(xù)使多個(gè)胞嘧啶脫氨基。相反，HapⅤ表現(xiàn)出減弱的滑行和節(jié)間轉(zhuǎn)移功能，卻能沿著ssDNA跳躍。HapⅤ減弱的持續(xù)性并不能導(dǎo)致單周期感染性實(shí)驗(yàn)中抑制HIV- 1復(fù)制的有效性降低，說(shuō)明跳躍和節(jié)間轉(zhuǎn)移對(duì)突變有效性是多余的。優(yōu)化ssDNA的持續(xù)性需要β2折疊形成APOBEC3H的二聚體。這些發(fā)現(xiàn)支持跳躍能補(bǔ)償節(jié)間跳躍缺陷的模型，也說(shuō)明HapⅡ和HapⅤ利用不同的機(jī)制誘發(fā)HIV- 1突變。

4 結(jié) 語(yǔ)

總之，APOBEC3H是APOBEC3家族唯一一個(gè)Z3蛋白，利用獨(dú)特的YY(F/Y)W基序結(jié)合7SLRNA可使其有效地進(jìn)入HIV- 1病毒粒子，從而抑制HIV- 1的復(fù)制。APOBEC3H有N15△、R18L、G105R、K121D和E178D 5個(gè)單點(diǎn)氨基酸多態(tài)性，形成了具有不同抗病毒功能的APOBEC3H單倍型，已經(jīng)在不同人群發(fā)現(xiàn)了7種，只有HapⅡ、HapⅤ、HapⅦ可穩(wěn)定表達(dá)并可抑制Vif缺陷的HIV- 1。另外，APOBEC3H還可以抑制HTLV、HBV、HCV等病毒的感染。Zhu等[22]發(fā)現(xiàn)位于APOBEC3H外顯子2的rs139293 T等位基因可能會(huì)顯著降低肺癌的發(fā)病率。這說(shuō)明APOBEC3H的基因突變與人體某些癌癥有關(guān)。因此，研究作為人體固有免疫成員的APOBEC3H，了解APOBEC3H的結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)，可為人類尋找治療艾滋病、癌癥等的方法帶來(lái)希望，也為治療這些疾病提出一條新的思路。

[1] 利維.艾滋病病毒與艾滋病的發(fā)病機(jī)制[M].3版.邵一鳴，譯.北京:科學(xué)出版社，2010:1- 27．

[2] DANG Y，SIEW L M，WANG X，et al.Human cytidine deaminase APOBEC3H restricts HIV- 1 replication[J].J Biol Chem，2008，283(17):11606- 11614．

[3] WANG X，ABUDU A，SON S，et al.Analysis of human APOBEC3H haplotypes and anti- human immunodeficiency virus type 1 activity[J].J Virol，2011，85(7):3142- 3152．

[4] ZHEN A，DU J，ZHOU X，et al.Reduced APOBEC3H variant anti- viral activities are associated with altered RNA binding activities[J].PLoS One，2012，7(7):e38771．

[5] MITRA M，SINGER D，MANO Y，et al.Sequence and structural determinants of human APOBEC3H deaminase and anti- HIV- 1 activities[J/OL].Retrovirology，2015，12:3[2015- 1- 22].http://retrovirology.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12977- 014- 0130- 8.

[6] IZUMI T，SHIRAKAWA K，TAKAORI- KONDO A.Cytidine deaminases as a weapon against retroviruses and a new target for antiviral therapy[J].Mini Rev Med Chem,2008，8(3):231- 238．

[7] VIEIRA V C，SOARES M A.The role of cytidine deaminases on innate immune responses against human viral infections[J].Biomed Res Int，2013，2013:e683095．

[8] SHEEHY A M，GADDIS N C，CHOI J D，et al.Isolation of a human gene that inhabites HIV- 1 infecton and is suppressed by the viral Vif protein[J].Nature，2002，418(6898):646- 650．

[9] LI M M，EMERMAN M.Polymorphism in human APOBEC3H affects a phenotype dominant for subcellular localization and antiviral activity[J].J Virol，2011，85(16):8197- 8207．

[10] HARARI A，OOMS M，MULDER L C，et al.Polymorphisms and splice variants influence the antiretroviral activity of human APOBEC3H[J].J Virol，2009，83(1):295- 303．

[11] FENG Y，LOVE R P，ARA A，et al.Natural polymorphisms and oligomerization of human APOBEC3H contribute to single- stranded DNA scanning ability[J].J Biol Chem,2015，290(45):27188- 27203．

[12] REFSLAND E W，HULTQUIST J F，LUENGAS E M，et al.Natural polymorphisms in human APOBEC3H and HIV- 1 Vif combine in primary T lymphocytes to affect viral G- to- A mutation levels and infectivity[J].PLoS Genet,2014，10(11):e1004761．

[13] GOILA- GAUR R，STREBEL K.HIV- 1 Vif,APOBEC,and Intrinsic Immunity[J/OL].Retrovirology，2008，5:51[2008- 06- 24].http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2443170.

[14] VASUDEVAN A A，SMITS S H,H?PPNER A,et al.Structure features of antiviral DNA cytidine deaminases[J].Biol Chem,2013,394(11):1357- 1370.

[15] OOMS M，MAJDAK S，SEIBERT C W，et al.The localization of APOBEC3H variants in HIV- 1 virions determines their antiviral activity[J].J Virol，2010，84(16):7961- 7969．

[16] NARUSE T K，SAKURAI D，OHTANI H，et al.APOBEC3H polymorphisms and susceptibility to HIV- 1 infection in an Indian population[J].J Hum Genet，2016，61(3):263- 265．

[17] LI M M，WU L I，EMERMAN M.The range of human APOBEC3H sensitivity to lentiviral vif proteins[J].J Virol，2010，84(1):88- 95．

[18] CAGLIANI R，RIVA S，F(xiàn)UMAGALLI M，et al.A Positively selected APOBEC3H haplotype is associated with natural resistance to HIV- 1 infection[J].Evolution，2011，65(11):3311- 3322．

[19] GOURRAUD P A，KARAOUNI A，WOO J M，et al.APOBEC3H haplotype and HIV- 1 proviral vif DNA sequence diversity in early untreated infection[J].Hum Immunol，2011，72(3):207- 212．

[20] LARUE R S，LENGYEL J，JNSSON S R，et al.Lentiviral vif degrades the APOBEC3Z3/APOBEC3H protein of its mammalian host and is capable of cross- species activity[J].J Virol，2010，84(16):8193- 8201．

[21] ZHAO K，DU J，RUI Y，et al.Evolutionarily conserved pressure for the existence of distinct G2/M cell cycle arrest and A3H inactivation functions in HIV- 1 Vif[J].Cell Cycle,2015，14(6):838- 847．

[22] ZHU M，WANG Y，WANG C，et al.The eQTL- missense polymorphisms of APOBEC3H are associated with lung cancer risk in a Han Chinese population[J/OL].Sci Rep，2015，5:14969[2015- 10- 13]．http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26459911.

2016- 04- 21

2016- 07- 06

吳小霞(1979-)，女，山東泰安人，副教授，生物物理碩士。E- mail:redrain2003@sohu.com

吳小霞.人類抗病毒因子APOBEC3H的研究進(jìn)展[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2016，35(6)：1013- 1016.

Q75

A

1671- 6264(2016)06- 1013- 04

10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.06．039