正交試驗優化益骨顆粒的提取工藝Δ

彭紅英，江 濤，楊濱賓，陳雪華，陳曉堅，劉敏珊(廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司研究所，廣州510130)

正交試驗優化益骨顆粒的提取工藝Δ

彭紅英＊，江 濤#，楊濱賓，陳雪華，陳曉堅，劉敏珊(廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司研究所，廣州510130)

目的:優化益骨顆粒的提取工藝。方法:采用L9(34)正交試驗，以淫羊藿苷、龍膽苦苷、馬錢苷酸轉移率和出膏率的綜合評分為評價指標，以乙醇體積分數、溶劑用量、提取次數、提取時間為考察因素，優化益骨顆粒的提取工藝并進行工藝驗證。結果:優化的提取工藝為藥材加10倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h。驗證試驗結果表明，淫羊藿苷、龍膽苦苷、馬錢苷酸的平均轉移率分別為81.28%、48.71%、59.82%(RSD分別為1.54%、2.37%、2.52%，n=3)，平均出膏率為31.48%(RSD=1.97%，n=3)。結論:優化的益骨顆粒提取工藝穩定可行、重復性好，可為后續的生產工藝研究提供依據。

益骨顆粒;正交試驗;提取工藝;淫羊藿苷;龍膽苦苷;馬錢苷酸

益骨顆粒處方源于暨南大學附屬第一醫院治療骨質疏松癥的院內制劑益骨膠囊，全方由淫羊藿、秦艽、杜仲等藥材組成，具有補骨生髓、活血止痛的功效，臨床上用于肝腎不足、瘀血阻絡所致骨質疏松癥，癥見腰膝酸軟、疼痛。益骨膠囊作為醫院制劑在臨床用于防治骨質疏松癥已近20年，對210例絕經后骨質疏松癥患者進行的為期6個月的前瞻性、隨機雙盲、安慰劑對照和陽性藥對照的臨床研究顯示，益骨膠囊治療組總有效率為95.5%，未見可能相關的毒副反應發生[1-2]。由于原制劑益骨膠囊采用傳統的藥材水提工藝，導致臨床服用量大、制劑易吸潮、產品質量穩定性差，制約了該產品進一步的臨床推廣和應用。鑒于此，需對原制劑的提取工藝和劑型進行改進，將膠囊改為顆粒。因此，本文以相關活性成分淫羊藿苷、龍膽苦苷及馬錢苷酸的轉移率及出膏率為綜合考察指標，采用正交試驗法優化益骨顆粒的提取工藝，為今后該藥的生產工藝研究提供試驗依據。

1 材料

1.1 儀器

1260型高效液相色譜儀，包括G1311C型四元泵、G1322A型在線真空脫氣機、G1329B型自動進樣器、G1316A型柱溫箱、G1315D型二極管陣列檢測器(DAD)、ChemStation型色譜工作站(美國Agilent公司); KQ-600DE型數控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);XA105型電子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

你說的沒錯，學校是歸聯合校管理，可咱們學校在沙河村的一畝三分地上，他是坐家虎啊。他說了，要是學校不聽他的，他就要停水斷電，門前挖溝，還要收回學校的房子。楊校長眼里滿是傷感和無奈。你也知道，以他的脾氣，是說得出做得到的。

1.2 藥材、藥品與試劑

2.1.5 專屬性試驗 分別精密吸取上述混合對照品溶液、供試品溶液(60%乙醇提取樣品)和陰性對照溶液各10μL，按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果顯示，在供試品溶液與混合對照品溶液色譜相應的位置上有相同的吸收峰，且陰性對照溶液無干擾，提示該測定條件具有較好的專屬性，結果詳見圖1。

2 方法與結果

2.1 淫羊藿苷、龍膽苦苷和馬錢苷酸的含量測定

2.1.3 供試品溶液的制備 取各提取工藝制備的益骨顆粒干膏粉約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇20m L，密塞，稱定質量，超聲處理(功率360W，頻率40 kHz)30min，放冷，再稱定質量，用60%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.1.1 色譜條件色譜柱:Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6mm，5μm);流動相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(0～5 m in，9%～11%A;5～20 m in，11%～25%A;20～25m in，25%～30%A;25～35m in，30%A);流速:1.0 m L/m in;檢測波長:254 nm;柱溫: 25℃;進樣量:10μL。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 以60%甲醇為溶劑制備淫羊藿苷質量濃度為102.4μg/m L、龍膽苦苷質量濃度為502.4μg/m L、馬錢苷酸質量濃度為101.5μg/m L的混合對照品溶液。

會上，吉林省土壤肥料總站研究員黃健作“吉林黑土地保護與利用”的報告。報告全面分析了當前吉林省內黑土地面臨的形勢和主要問題，闡述了吉林省黑土地保護的重要意義及采取的主要措施，對促進吉林省綠色農業發展有著積極作用。吉林省第十三屆人民代表大會常務委員會第二次會議通過了《吉林省黑土地保護條例》，并于2018年7月1日起正式施行。《條例》明確了黑土地保護范圍，包括耕地、林地、草地、園地和濕地等所有黑土地資源，對所有從事任何相關黑土地的各種行為及各部門職責均作出了明確規定，確保黑土地數量不減少，質量不降低，填補了我