胃黏膜組織中腫瘤壞死因子α及iNOS表達水平與胃炎發(fā)病的關系研究

鮑文漪

(天津市第一中心醫(yī)院消化科，天津 300192)

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胃黏膜組織中腫瘤壞死因子α及iNOS表達水平與胃炎發(fā)病的關系研究

鮑文漪

(天津市第一中心醫(yī)院消化科，天津 300192)

目的 研究胃炎發(fā)病與腫瘤壞死因子α(TNF-α)及誘導型一氧化氮合酶(iNOS)表達水平的相關性研究。方法 選取114例慢性胃炎患者為研究對象，根據胃鏡與組織學檢查結果進行分析，包括Hp陽性54例，Hp陰性60例，以放射免疫法檢測TNF-α，免疫組織化學法檢測iNOS表達水平，以分析上述兩項指標與胃炎發(fā)病的相關性,并研究胃黏膜炎癥程度在兩組中的分布。結果 Hp陽性組TNF-α為(1.41±0.33)ng/mg VS(0.64±0.22)ng/mg，顯著高于對照組(P<0.05)；觀察組iNOS(69.34±6.10)% VS(21.94±3.87)%顯著高于對照組(P<0.05)。Hp陽性組輕、中、重度占66.67%，顯著高于Hp陰性組的11.67%(P<0.05)。結論 胃黏膜組織TNF-α及iNOS水平上升與胃炎發(fā)生發(fā)展有關。

胃黏膜組織； 腫瘤壞死因子α； iNOS； 胃炎

慢性胃炎多由幽門螺桿菌(Hp)感染引發(fā)，發(fā)達國家為30%～50%，發(fā)展中國家高達80%以上[1,2]。Hp為慢性胃炎的關鍵誘因，其與慢性胃炎活動有密切聯(lián)系，同時細胞毒素、黏附分子、細胞因子/炎癥遞質均參與Hp感染的炎癥反應，細胞因子對中性粒細胞有趨化、激活作用，可導致機體出現(xiàn)非特異性炎癥反應，進而導致胃黏膜受損。同時腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)還被發(fā)現(xiàn)參與了慢性胃炎的病理過程，而Hp感染時可刺激一氧化氮合成酶(iNOS)產生大量的一氧化氮(NO)同為病發(fā)的重要機制。本文探討TNF-α、iNOS水平與Hp胃炎相關性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2011年2月至2014年1月114例慢性胃炎患者為研究對象，均符合2012年中國慢性胃炎共識意見中診斷標準，根據胃鏡與組織學檢查結果分為Hp陽性組(54例)與Hp陰性組(60例)，Hp陽性組男25例，女29例，年齡22～67歲，平均(41.32±7.45)歲；Hp陰性組男28例，女32例，年齡21～66歲，平均(40.90±7.35)歲，兩組的年齡、性別等基線資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 病理組織學檢測 完成石蠟包埋、切片、HE染色，于顯微鏡下對胃黏膜病理學組織學改變進行觀察，組織切片HE染色完成后盲選一名不了解患者情況、研究目的的醫(yī)生進行病理組織學診斷。

1.2.2 TNF-α表達水平檢測 收集患者清晨空腹血，離心，4 ℃ 3 000 r/min，離心 15 min，提取上清，稀釋度3倍，嚴格按TNF-α試劑盒要求，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定 TNF-α。

1.2.3 iNOS表達水平檢測 以免疫組織化學法檢測進行測定，先切片常規(guī)脫蠟至水，尿素消化30 min，10 mL/L過氧化氫封閉內源酶0.5 h，正常羊血清在37 ℃下放置0.5 h，后滴加一抗4 ℃放至隔天，將生物素羊抗兔IgG(1∶100)37 ℃ 40 min，滴入ABC復合物(1∶100)37 ℃ 40 min，DAB顯色后蘇木精襯染，脫水透明封片，分為PBS置換一抗(陰性對照組)與明確5-HT染色陽性小鼠小腸切片(陽性對照組)。光鏡輔助下400視野觀察每片中相對染色強、陽性細胞多的部位，得出陽性細胞所占比重，將400視野內陽性細胞占有面積比例進行綜合。最終免疫組化結果判定為染色陽性信號處于細胞值，且顏色為棕黃到黃色。

1.3 觀察指標 (1)對比Hp陽性組與Hp陰性組TNF-α和iNOS水平；(2)慢性胃炎嚴重程度，根據胃黏膜的炎癥細胞密度，將患者分為3個等級，輕度：炎癥細胞輕度浸潤，占胃黏膜全層1/3；中度：炎癥細胞浸潤處于1/3～2/3之間；重度：炎癥細胞浸潤面積基本達全黏膜層，同時伴胃小凹、黏膜上皮壞死等。

2 結 果

2.1 Hp陽性組與Hp陰性組TNF-α和iNOS比較 Hp陽性組TNF-α水平及iNOS表達均高于Hp陰性組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 Hp陽性組與Hp陰性組TNF-α和iNOS比較

2.2 兩組慢性胃炎嚴重程度對比 Hp陽性組重度胃炎占66.67%，顯著高于Hp陰性組的11.67%比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=36.6，P<0.01)。

3 討 論

Hp為革蘭陰性細菌，對單核細胞有刺激作用，外膜成分中含有脂多糖，可使單核細胞、巨噬細胞分泌促炎癥遞質分泌，同時鞭毛蛋白也發(fā)揮協(xié)同作用。另外Hp在為乳液與胃黏膜上皮的中性微氧環(huán)境中定殖，可立即釋放出VacA、CagA等毒素，最終可加重炎癥反應。

TNF-α為單核細胞、巨噬細胞受到致炎因子影響后所釋放的細胞因子，為促炎癥蛋白，可使中性粒細胞出現(xiàn)移動，具體機制為調控內皮細胞上黏附分子和中性粒細胞表達，還可誘導中性粒細胞黏附、白細胞穿出血管壁，導致胃黏膜內細胞損傷，進而減少血流量。胃黏膜血流是胃黏膜整體防御機制的重點，因此出血可直接導致胃黏膜損傷。同時TNF-α能夠作用于靶細胞膜的磷脂代謝，進而導致氧自由基出現(xiàn)，引發(fā)溶酶體破裂，使組織出現(xiàn)損傷和死亡。

NO主要由iNOS催化形成，iNOS活性變化可使NO生成量與正常的生物效應受到影響。其具有廣泛生物效應，具有正反兩面性，一方面有生理功能，同時又是炎癥遞質。正常生理狀態(tài)下，胃黏膜血管內皮細胞與神經元產生的NO含量較低，主要作用為調節(jié)閉黏液與胃黏膜微循環(huán)與黏液的分泌，是胃黏膜的重要保護物質。在炎癥的病理狀態(tài)下，NO過量產生會導致羥自由基和過氧硝基陰離子的毒性上升，或可引發(fā)正常基因突變。有研究顯示Hp感染可提高NO水平，而炎癥細胞分泌以及大量細胞因子的釋放可提高iNOS表達[10]。本次研究結果顯示Hp陽性組TNF-α及iNOS顯著高于對照組(P<0.05)。Hp陽性組重度胃炎占66.67%，顯著高于Hp陰性，可說明TNF-α與iNOS表達水平上升與胃炎發(fā)生發(fā)展密切相關，應引起臨床關注。

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