中藥材黃芩對幽門螺桿菌體外抗菌活性的作用分析

趙軍

中藥材黃芩對幽門螺桿菌體外抗菌活性的作用分析

趙軍

目的分析中藥材黃芩對幽門螺桿菌(Hp)體外抗菌活性的作用, 為治療Hp感染胃病患者提供科學(xué)的參考數(shù)據(jù)。方法采用熱回流方法從黃芩粗粉中提取黃芩乙醇提取物以及黃芩苷, 經(jīng)過高效液相色譜(HPLC)鑒定黃芩苷的濃度, 再采用試管二倍稀釋法選擇合適的培養(yǎng)基, 通過體外藥敏試驗(yàn)分析黃芩苷與黃芩乙醇提取物對 Hp的體外抗菌活性作用機(jī)制。結(jié)果從120 g黃芩粉中所攝取的6.02 g黃芩苷經(jīng)過HPLC鑒定后其純度達(dá)到95.88%, 通過試管二倍稀釋法藥敏試驗(yàn)測定黃芩乙醇提取物對10株Hp的最低抑菌濃度(MIC)90、MIC50值分別為2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為1.31 mg/ml、1.05 mg/ml, 黃芩苷與黃芩乙醇提取物均具有良好的體外抗Hp活性, 黃芩苷對Hp的MIC90、MIC50值優(yōu)于黃芩乙醇提取物。結(jié)論中藥材黃芩對 Hp體外抗菌活性的作用比較顯著, 具有重要的實(shí)驗(yàn)研究價(jià)值, 值得推廣研究。

黃芩；幽門螺桿菌；體外抗菌活性；作用

黃芩屬于草本植物, 將黃芩的根入藥處理能夠具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的黃酮類化合物中, 含量最高且作用最為明顯的是黃芩苷。本研究將根據(jù)相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn), 分析黃芩乙醇提取物以及黃芩苷對 Hp體外抗菌活性的作用機(jī)制, 為治療Hp感染胃病患者提供科學(xué)的參考數(shù)據(jù)?，F(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1. 1 試劑與藥材試劑：95%乙醇、硫酸、氫氧化鈉等；藥材：黃芩；HPLC材料：黃芩苷對照品；實(shí)驗(yàn)菌株：選取一些胃黏膜組織, 將10株Hp臨床Ⅰ～Ⅳ型胃黏膜組織均勻的涂在SKINOW培養(yǎng)基上, 與此同時放置在36.8℃的環(huán)境中, 適量加入催化劑, 孵育1 d后, 觀察菌落形態(tài)以及生化反應(yīng), 且快速進(jìn)行實(shí)驗(yàn), 最終鑒定為Hp。

1. 2 方法

1. 2. 1 制備黃芩乙醇提取物稱取25 g黃芩, 干燥粉碎之后收集于標(biāo)本瓶中, 加入已經(jīng)配置好的70%乙醇中, 以浸沒黃芩為宜；用70%乙醇熱回流提取≥2次, 合并提取液, 減壓回收乙醇至無醇味提取物, 濃度為0.45 g/ml。

1. 2. 2 制備黃芩苷稱取120 g黃芩粗粉, 以10倍水煎煮2次, 25 min/次, 合并煎煮2次后的液體, 加入濃鹽酸, 在80℃溫度下靜置1 d, 將沉淀液放入燒杯中, 加120 ml水進(jìn)行攪拌, 使得黃芩苷全部溶解, 加入90%乙醇, 攪拌后加熱濾液至48℃, 以濃酸進(jìn)行調(diào)配, 抽濾沉淀物, 50℃真空干燥,最終制得黃芩苷。

1. 2. 3 黃芩苷的含量、純度測定稱取0.88 mg黃芩苷置于12 ml容量瓶中, 加入適量甲醇搖勻, 對照品溶解且稀釋至0.21 mg/ml儲備液中；配制對照品溶液。稱取0.88 mg黃芩苷置于12 ml容量瓶中, 加入適量甲醇搖勻, 對照品溶解且稀釋至0.21 mg/ml儲備液中；測定樣品含量。取供試品溶液,量取15 μl進(jìn)入到HPLC中, 記錄HPLC色譜峰面積；與此同時稱取15 μl樣品進(jìn)入到HPLC中, 按照外標(biāo)法計(jì)算峰面積,得出黃芩苷含量, 與對照品相比較則為黃芩苷純度。

1. 2. 4 體外藥敏試驗(yàn)Hp臨床菌株的分離培養(yǎng)和鑒定。通過抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 使用簡單的煎煮法提取藥物進(jìn)行相關(guān)抑菌試驗(yàn)?zāi)軌蛴^察到黃芩和黃芩苷對Hp的體外抗菌活性。藥敏試驗(yàn)：采用試管二倍稀釋法, 取12支無菌試管, 每一支試管中均加入0.88 ml布氏肉湯, 第1支試管中加入制備藥液0.95 ml, 倍比稀釋至第10支試管中, 第11支試管與第12支試管不添加任何藥液, 作為對照試驗(yàn)。12支試管分別加入已經(jīng)制備好的Hp菌液中, 大約有1020個細(xì)菌, 在38℃微氧環(huán)境為6%～9% CO2、6%～8% O2、33.4% H2下進(jìn)行培養(yǎng), 在2 d后觀察其培養(yǎng)結(jié)果。

1. 3 觀察指標(biāo)分析黃芩乙醇提取物與黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值, 將檢測所得MIC值從低到高進(jìn)行累計(jì)分布率計(jì)算, 累計(jì)分布率≥50%時的最低MIC值為MIC50,≥90%時最低MIC值為MIC90。

2 結(jié)果

從120 g黃芩粉中所攝取的6.02 g黃芩苷經(jīng)過HPLC鑒定后其純度達(dá)到95.88%, 通過試管二倍稀釋法藥敏試驗(yàn)測定黃芩乙醇提取物對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為1.31 mg/ml、1.05 mg/ml, 黃芩苷與黃芩乙醇提取物均具有良好的體外抗Hp活性, 黃芩苷對Hp的MIC90、MIC50值優(yōu)于黃芩乙醇提取物。

3 討論

Hp是一種螺桿狀細(xì)菌, 目前最為推崇的一種治療方法是三聯(lián)療法, Hp根除率達(dá)到89.9%以上［1］。Hp是一種特殊的胃黏膜表面細(xì)菌, 采用西藥治療費(fèi)用過高, 藥物的副作用較大, 因此給患者帶來了最巨大的經(jīng)濟(jì)壓力和精神壓力。

黃芩的主要成分有黃芩素、漢黃芩素以及黃芩苷等, 主治溫?zé)岵?、上呼吸道感染以及肺熱咳嗽、胎動不安等疾?其臨床抗菌性好, 且不產(chǎn)生抗藥性。本文的相關(guān)實(shí)驗(yàn)中, 從120 g黃芩粉中所攝取的6.02 g黃芩苷經(jīng)過HPLC鑒定后其純度達(dá)到95.88%, 通過試管二倍稀釋法藥敏試驗(yàn)測定黃芩乙醇提取物對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為2.61 mg/ml、3.25 mg/ml, 黃芩苷對10株 Hp的MIC90、MIC50值分別為1.31 mg/ml、1.05 mg/ml。由此可見, 由黃芩配伍的中藥復(fù)方具有較強(qiáng)的抗Hp作用。

富含黃芩成分的滅幽湯治療Hp胃病患者能夠具有顯著效果［8］, 能夠在一定程度上幫助修復(fù)胃黏膜。富含黃芩的三黃瀉心湯和黃芩苷不受到Hp的生長曲線影響［2］, 可有效抑制胃腺癌細(xì)胞中的白細(xì)胞介素-6(IL-6)的表達(dá)［3］。黃芩聯(lián)合埃索美拉唑治療Hp感染胃病患者能夠顯著優(yōu)于三聯(lián)治療法［4,5］, 在一定程度上提高Hp感染胃病患者的免疫力, 毒副作用小, 因此黃芩具有代替抗生素的功能與價(jià)值。

綜上所述, 中藥材黃芩對 Hp體外抗菌活性的作用比較顯著, 具有重要的實(shí)驗(yàn)研究價(jià)值, 值得推廣研究。

［1］ 彭學(xué). 幽門螺旋桿菌感染及非甾體抗炎藥對消化性潰瘍出血的影響研究. 實(shí)用心腦肺血管病雜志, 2011, 19(2):220-221.

［2］ 王莉萍. 埃索美拉唑三聯(lián)療法對Hp陽性消化性潰瘍患者的治療效果. 求醫(yī)問藥(學(xué)術(shù)版), 2012, 10(6):112-113, 471.

［3］ 陳維存. 消化性潰瘍復(fù)發(fā)因素的探討與綜合防治. 中國農(nóng)村衛(wèi)生事業(yè)管理, 2011, 31(8):866-867.

［4］ 華利霞, 山努佳. 辛開苦降法治療慢性胃炎的Meta分析. 中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育, 2015, 18(19):189-191.

［5］ 韋永光. 黃芪建中湯治療幽門螺旋桿菌陽性胃潰瘍37例臨床觀察. 中國民族民間醫(yī)藥, 2015, 18(11):99, 101.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.08.098

2017-02-14］

110000 沈陽市第九人民醫(yī)院藥劑科