脂多糖促進(jìn)人結(jié)膜上皮細(xì)胞IL-6的表達(dá)

叢賈囡,宋占晨,曲 忻*

(1.長(zhǎng)春市中心醫(yī)院 眼科,吉林 長(zhǎng)春130061；2.白城市醫(yī)院 耳鼻咽喉科)

脂多糖促進(jìn)人結(jié)膜上皮細(xì)胞IL-6的表達(dá)

叢賈囡1,宋占晨2,曲 忻1*

(1.長(zhǎng)春市中心醫(yī)院 眼科,吉林 長(zhǎng)春130061；2.白城市醫(yī)院 耳鼻咽喉科)

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分，當(dāng)細(xì)菌死亡溶解釋放出來，可引起微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素釋放及血管內(nèi)凝血等。本研究擬探討脂多糖能否促進(jìn)人結(jié)膜上皮細(xì)胞IL-6的表達(dá)與釋放從而放大結(jié)膜炎性反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 材料和來源

原代培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細(xì)胞均來自于長(zhǎng)春市中心醫(yī)院眼科手術(shù)中獲得的結(jié)膜組織分離培養(yǎng)。

1.2 結(jié)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)處理

獲得原代培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)到3-4代。在24孔板內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞至單層細(xì)胞融合。用PBS緩沖液洗滌細(xì)胞，加入0.25%的胰蛋白酶及0.06%的EDTA液以消化貼壁結(jié)膜細(xì)胞。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞。加入終止液終止消化。調(diào)整結(jié)膜上皮細(xì)胞濃度為5×104/ml[1]。

1.3 LPS對(duì)人結(jié)膜上皮細(xì)胞的刺激

取上述培養(yǎng)好的人結(jié)膜上皮細(xì)胞，加入LPS至濃度為1 μg/ml，10 μg/ml及100 μg/ml，對(duì)照組加入PBS緩沖液。分別于12 h及24 h后，利用分光光度計(jì)檢測(cè)培養(yǎng)液吸光度。然后離心培養(yǎng)液，獲得上清液，用以檢測(cè)IL-6的濃度。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)IL-6的檢測(cè)

采用ELISA方法檢測(cè)上清液中IL-6的水平，方法按試劑盒要求執(zhí)行。試劑盒為武漢博士德公司產(chǎn)品。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用單因素方差分析不同濃度LPS對(duì)IL-6水平的影響。

2 結(jié)果

不同濃度LPS作用12及24小時(shí)后對(duì)人結(jié)膜上皮細(xì)胞分泌IL-6水平的結(jié)果見表1。加入LPS后12及24小時(shí)，對(duì)照組光吸收值無明顯差異(P>0.05)，證明細(xì)胞數(shù)沒有差異。兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)各濃度實(shí)驗(yàn)組IL-6水平明顯高于對(duì)照組,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

急性結(jié)膜炎臨床表現(xiàn)為突發(fā)結(jié)膜充血，燒灼感、癢、分泌物多，要確定結(jié)膜炎的病源需作分泌物涂片進(jìn)行細(xì)菌和細(xì)胞學(xué)檢查。LPS是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的重要成分。其被證實(shí)參與對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞在內(nèi)多種細(xì)胞的促炎作用，提高作用細(xì)胞分泌一氧化氮及IL-6等炎癥因子的表達(dá)[2]。還有研究發(fā)現(xiàn)，積雪草酸能夠抑制人結(jié)膜上皮細(xì)胞在炎癥信號(hào)刺激下出現(xiàn)一系列細(xì)胞因子的變化[3],包括NF-kappaB及p-ERK等細(xì)胞信號(hào)途徑會(huì)被激活，這均可能參與到IL-6的表達(dá)調(diào)節(jié)過程[4]。本研究結(jié)果表明，12及24小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)各濃度實(shí)驗(yàn)組IL-6水平明顯高于對(duì)照組，且與LPS濃度及作用時(shí)間具有相關(guān)性。提示脂多糖能夠誘導(dǎo)的人結(jié)膜上皮細(xì)胞炎癥因子IL-6的分泌,其對(duì)結(jié)膜上皮細(xì)胞有直接促炎作用。

[1]鄭健樑，盧 蓉，張 潔， 等.人結(jié)膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及液氮凍存[J].眼科學(xué)報(bào),2000,16(2):135.

[2]趙建云，鄧展進(jìn)，劉瑞珍.HU308對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌NO及IL-6的影響[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2014,4(5):36.

[3]Hua XM,Ze BC,Wang B,et al.The anti-inflammatory effects of asiatic acid in lipopolysaccharide-stimulated human corneal epithelial cells[J].Int J Ophthalmol,2017,10(2):179.

[4]Park JY,Chung TW,Jeong YJ,et al.Ascofuranone inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response via NF-kappaB and AP-1,p-ERK,TNF-α,IL-6 and IL-1β in RAW 264.7 macrophages[J].PLoS One,2017 ,12(2):e0171322.

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1403-01

2016-04-14)