花臉香蘑培養及藥理作用研究進展

唐 萌，張麗麗，楊海茹，黃燕怡，蔡佳璇，王蘭英（吉林大學珠海學院，廣東 珠海 519000）

花臉香蘑培養及藥理作用研究進展

唐 萌，張麗麗，楊海茹，黃燕怡，蔡佳璇，王蘭英*
（吉林大學珠海學院，廣東 珠海 519000）

近年來，國內外學者對藥（食）用真菌進行了大量研究，花臉香蘑作為優質藥用及食用種類，具有抗氧化、抗腫瘤和抗菌活性等藥用價值，具備極大的開發潛力。從培養方法、成分組成以及藥理活性等3個方面對花臉香蘑的研究現狀進行概括，為進一步深入研究花臉香蘑提供參考。

花臉香蘑；人工馴化；藥理功能

花臉香蘑（Lepista sordida），屬于口蘑科（Tricholomataceae） 香菇屬（Lepista），又名丁香蘑、花臉蘑。花臉香蘑菌蓋寬3 cm～12 cm，初始為半球狀，而后漸漸平展。菌肉薄，易碎，淡紫色。菌柄長3 cm～7 cm，粗1 cm左右，纖維質，內實[1]。其分布廣泛，味鮮氣香，受降雨量影響，年產量差異大，是1種價格較高，開發潛力巨大的優質食用及藥用種類。

1 培養方法

目前研究的花臉香蘑菌種一般經過野外采集后組織分離得到。花臉香蘑的鑒定一般采取形態學鑒定和ITS序列鑒定。花臉香蘑的孢子橢圓近卵型，孢子印為粉色[1]，其培養方式目前主要分為固體培養和液體發酵兩個方面。

1.1 固體培養

1．1．1 平板培養

利用組織分離法，采用PDA固體培養基培養，獲得花臉香蘑純化的菌絲體。培養條件一般為25℃，避光培養10 d左右，然后進行斜面保藏。

1．1．2 固體發酵

張振宇[2]等嘗試采用中藥渣固體培養花臉香蘑。以干燥的中藥渣89%（主要成分為大棗、甘草、生姜、芍藥、桂皮、麻黃、葛根、川芎、辛夷）、麩皮10%、蔗糖1%，黑暗培養60 d后，通過MTT法測定樣品處理后NK細胞對YAC-1細胞的殺傷活性影響，結果顯示，花臉香蘑菌絲體不同濃度提取物對小鼠NK細胞影響有明顯差異，并且呈依賴性關系，其醇沉物在0．1 mg·mL-1時，達到最大刺激活性132．60%。

1．1．3 人工栽培

目前，花臉香蘑的人工栽培技術已初步成熟，對其栽培技術的研究主要從培養基的選擇、溫度、濕度、光照、pH、通氣、播種量和覆土方式等方面展開。常見的栽培模式有發酵料畦式栽培、箱式栽培、熟料袋栽等。花臉香蘑為中高溫型穩溫結實性菌類，在日夜溫差大的情況下，不利于子實體生長發育，一般在22℃～25℃培養。在培養基選擇方面，國內學者進行了大量研究。棉籽殼、稻草、牛糞、雞糞、麥麩等農副下腳料均可用于菌株栽培[1-18]。

1．1．4 培養基選擇

（1）母種培養基

花臉香蘑的母種培養選擇PDA固體培養基或者綜合馬鈴薯固體培養基均可。

綜合馬鈴薯培養基：馬鈴薯20%、葡萄糖20 g、硫酸鎂1．5 g、磷酸二氫鉀3 g、瓊脂15 g、VB10．01 g，水1 000 mL，pH自然[3]。

（2）原種和栽培種培養基

花臉香蘑原種和栽培種的選擇因地域和人為因素而不同，表1為田果廷[3]、黃水珍[4]篩選的幾種原種和栽培種通用培養基。

表1 幾種花臉香蘑通用培養基Tab．1 Several common culture medium of Lepista sordida

（3）培養料選擇

對于花臉香蘑培養料選擇多種多樣，其原料主要是棉籽殼、牛糞等農副下腳料。表2[3，5]為幾種不同培養料配方及其生物學效率的比較。

表2 不同培養料配方比較Tab．2 Comparisons of different culture compost

從表2可以看出，配方10的生物學效率最高，與配方8相比高出近40%，說明雞糞等農家肥料營養豐富，對花臉香蘑的生長極為有利。

早在20世紀90年代初，趙文華[6]、饒軍[1，7，8]等對花臉香蘑的生物學特性和栽培方法進行了探索，接下來的10多年間國內學者又對不同碳源、氮源培養條件下的花臉香蘑生長狀況，栽培模式對花臉香蘑生長影響等進行了研究，并就栽培過程中一些操作要點進行了總結[9-12]。

大量試驗表明，培養料的發酵時間約為25 d～30 d，含水量保持在65%～70%，pH為7～8。在發菌階段，當料溫下降到30℃進行播種。菌絲生長階段溫度要求為22℃～28℃，空氣相對溫度為85%～90%。菌絲發菌階段應保溫、保濕、遮光，并保持遮蓋物的濕潤。出菇期菌絲約30 d左右成熟，長滿覆土層，由營養生長逐漸向生殖生長形成菇蕾。現蕾期應以20℃～25℃為宜，相對濕度保持在90%～98%，為使子實體色澤亮麗應適當調節光照[1-18]。

丁智權[10]等進行了栽培料用量、播種量和播種方式、覆土和覆土方式對花臉香蘑產量的影響實驗，實驗結果顯示，單位面積上栽培料增加，產量也隨之增加；2層播種的播種方式生物學效率較高；以發酵土、黃泥土、水稻土和腐葉土為實驗材料，結果顯示發酵土培養的花臉香蘑產量最高，生物學效率也最高，但其制作工藝較復雜，腐葉土方便易取，更適合推廣。花臉香蘑在播種量為2袋·m-2與1．5袋·m-2時生物學效率差別不大，均高于1袋·m-2。而栽培料用量15 kg·m-2、2層播種方式時生物學效率最高。

李碧瓊[11]等采用3種不同的栽培方式對花臉香蘑進行培育，并對3種栽培方式進行了比較。模式1（袋栽法）：按培養基配方配料，栽培袋裝料，滅菌，接種，培養。模式2（發酵料床栽法）：按培養基配方配料，建堆發酵，播種，培養。模式3（生料床栽法）：配料后，提前1 d用4%石灰水泡稻草6 h，對棉籽殼、牛糞等預濕。第2天按比例加入碳酸鈣拌勻，播種，培養。待菌絲布滿培養料時，進行覆土出菇管理。實驗結果顯示，通過對栽培進程中的幼蕾總數、有效子實體數和產量進行比較，模式3為3種模式中最為理想的模式。

1.2 液體培養

花臉香蘑液體發酵技術相對成熟，發酵條件優化的研究較多，但均屬于搖瓶發酵實驗，深層發酵條件的研究尚屬空白。關于花臉香蘑液體發酵方面的研究均集中于對發酵條件優化的探索，且多以菌絲體干重為評價標準，研究碳源、氮源、碳氮比、培養時間、pH等因素對花臉香蘑液體發酵菌絲體生長情況的影響。

王劍鋒[19]等報道了液體發酵培養基的組成：葡萄糖1．7%、米糠2．56%、氯化銨0．003%、豆餅粉0．007%、KH2PO40．024%、MgSO4·7H2O 0．002%、米糠水解液0．6%（以米糠干重計）、初始pH6．0。在28℃、120 r·min-1、裝量為50 mL/250mL的培養條件下搖瓶發酵7 d，干重可以達到（26．6±3．6） g·L-1。孟玲[20]等以發酵液粗多糖提取率為標準，確定了菌絲體發酵的最佳碳源、氮源、無機鹽、維生素、pH、碳氮比，確定最佳發酵條件為蔗糖20 g、蛋白胨4 g、硫酸鎂0．5 g、磷酸二氫鉀2 g、H2O 1 L，最佳碳氮比為30:1，pH5～10。鄧功成[21]等通過單因素實驗研究了菌絲體發酵中碳源、氮源、pH、時間對菌絲干重的影響，確定了花臉香蘑菌絲體液體最佳發酵條件為玉米粉3%、酵母膏0．2%，pH6．0，培養時間8 d。

2 成分分析

花臉香蘑是一種味道鮮美，營養價值較高的食用菌，已有文獻報道表明其營養成分豐富多樣。其中花臉香蘑子實體營養成分為粗蛋白43%、粗纖維7．6%、脂肪2%[22]。

2.1 多糖類

胡先運[23]等以人工栽培花臉香蘑子實體為材料，采用HPLC法，對海藻糖的提取條件進行了優化，結果表明海藻糖含量為8．34%。孟玲[24]等的研究結果顯示，花臉香蘑可能含有的單糖有露糖、鹽酸氨基葡萄糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、巖藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等。Miao[25]等用二乙氨乙基纖維素陰離子交換法（DEAE cellulose-52）和高度偶聯瓊脂糖凝膠6FF滲透色譜（Sepharose 6 Fast Flow gelpermeation chormatography），從花臉香蘑子實體中分離出 4種水溶性多糖 LSPa1、LSPb1、LSPb2、LSPc1，4種多糖的分子量分別為 156 kDa、134 kDa、96 kDa、57 kDa。分析結果顯示，a1的組成為葡萄糖、甘露糖和半乳糖，其摩爾比為3．2:1．3:0．6。b1、b2和c1由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖和花生四烯酸組成，其占比例分別為2．6∶2．1∶0．9∶0．6∶0．3、1．2∶1．0∶2．3∶0．6∶0．5、0．2∶0．3∶2．3∶0．3∶2．0。

2.2 氨基酸和微量元素

花臉香蘑所含氨基酸種類多樣，18種氨基酸總質量分數為24．37%，谷氨酸含量較高，味道鮮美[26]。羅心毅[27]等用等離子質譜、石墨爐原子吸收光譜、熒光分光光度法等方法對人工代料栽培的花臉香蘑進行元素測定，在測定的18種元素中，硒、鍺鋅等具有抗自由基、抗衰老、抗癌功用的微量元素含量都較高，同時，對有害金屬元素鉛、鎘、汞的富集，較已報道的歐洲25種野生蘑菇低約20倍～100倍[28]。

2.3 二萜類

1996年，德國學者Xenia Mazur[29]用花臉香蘑發酵分離出2種二萜骨架化合物并進行了結構鑒定和生物活性研究，發現這兩種化合物具有促細胞分化和抗菌作用。

3 藥理活性

在花臉香蘑的藥理活性研究中，對于花臉香蘑抗氧化、抗腫瘤、保肝以及調節免疫等方面的功能均有研究，但作用機理仍有待于進一步深入研究。

3.1 抗菌作用

張京良[30]報道了花臉香蘑的抑菌活性，發現花臉香蘑的胞外多糖和胞內多糖均無抗菌活性，但其小分子物質對防治植物致病菌黃瓜枯萎菌和辣椒炭疽菌效果明顯，花臉香蘑小分子物質具有廣泛的抗菌活性，在植物防病和抗病方面有很大的應用前景。

3.2 保肝作用

用CCl4或D-氨基半乳糖建立急性小鼠肝損傷模型，對5組實驗小鼠進行實驗處理后，測定花臉香蘑多糖對小鼠體內超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量影響。結果顯示花臉香蘑可顯著降低丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉移酶（AST）活性，提高血清白蛋白（ALB）、GSH含量和SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量，表明其有一定的保肝作用[31-32]。

3.3 抗腫瘤作用

陳湘蓮等[33]用乙酸乙酯、石油醚、乙醇提取了花臉香蘑次級代謝產物，采用MTT法測定了其抑制人宮頸癌細胞Hela的活性，各相提取物對Hela的抑制成明顯的劑量-效應關系，乙酸乙酯相提取物的抑制活性最強。MIAO等[34]從花臉香蘑子實體中提出的多糖命名為LSPc1，并進行了人喉癌細胞Hep-2的體外抗腫瘤實驗，發現LSPc1可以抑制G2/M期的細胞增殖，處理過的細胞中可觀察到細胞凋亡的典型的形態學和生化特征。此外LSPc1可導致線粒體膜電位的丟失，增加促凋亡蛋白Bax（Bcl-2 Assaciated X protein）的比例，引起細胞色素的釋放，增加半胱天冬酶-3（caspase-3） 和半胱天冬酶-9（caspase-9）等這些引起細胞凋亡因子的活性，從而達到抑制Hep-2細胞的目的。

3.4 植物生長調節作用

Choi等[35]從花臉香蘑中分離得到1種植物生長調節劑咪唑-4-甲酰胺（imidazole-4-carboxamide，I CA），發現ICA可抑制草皮草和水稻幼苗生長，在1項溫室試驗中，ICA使稻粒產量提高26%。

3.5 水稻細條病抑制作用

劉艷如等[36]報道了花臉香蘑對水稻細條病具有抑制作用，且不同培養方式對其抑制活性有重要影響，其中液體搖瓶培養的發酵液中含有抗菌組分。隨后，劉艷如又對發酵時間對其抑制作用的影響進行了研究，結果顯示，花臉香蘑的抑制活性與發酵時間有關，約在發酵12 d后，其乙酸乙酯相活性最高[37]。

3.6 免疫調節作用

秦丹等[38]對花臉香蘑提取物的免疫調節作用進行了研究，花臉香蘑粗多糖提取物可以提高雛雞的脾臟、法氏囊以及胰腺指數。Luo等[39]從花臉香蘑子實體分離出1種水溶性多糖LSP，經高效凝膠滲透色譜分析結果顯示，其摩爾質量約為4×104Da。初步試驗結果表明，LSP對小鼠巨噬細胞有顯著的活化作用，能促使一氧化氮（NO）與腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）的產生。

3.7 抗氧化作用

Zhong等[40]用菌絲體經濃縮醇沉后獲得的胞內多糖進行體外以及體內的抗氧化實驗。在體外抗氧化實驗中，提取的胞內多糖對超氧陰離子、DPPH和羥基都有顯著的清除作用。而在體內抗氧化實驗中，將不同濃度的胞內多糖對由D-半乳糖誘導的衰老小鼠模型進行為期6周的口服給藥，結果表明，花臉香蘑的菌絲體胞內多糖能顯著抑制MDA的形成，同時能增加小鼠大腦和血漿中的SOD、GSH-Px活性，且呈劑量依賴性。

4 結語

隨著人們對于花臉香蘑研究的發展，仍然有許多問題亟需解決。如花臉香蘑深層發酵的條件控制鮮有報道，其深層發酵條件有待進一步探索；對于花臉香蘑活性物質的研究逐年增多，但多集中于多糖類，其活性小分子成分仍不明確，藥理活性研究仍不夠系統，且作用機制仍不明確；人工栽培仍處于小規模探索階段，無法商品化，這些都是需要進一步解決的問題。

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Research Progress on Culture and Pharmacological Activities of Lepista sordida

TANG Meng,ZhANG Li-li,YANG Hai-ru,HUANG Yan-yi,CAI Jia-xuan,WANG Lan-ying
（
Zhuhai College of Jilin University,Zhuhai 519000,China）

Lepista sordida（Schum．:Fr．）Sing．,a basidiomycetous fungus of the family Tricholomataceae,was a kind of delicious edible agaric species mushroom．Recently,it had absorbed a lot of attentions．It exhibited several activities such as immunomodulation,antitumour,antibacterial activity et al．This review provided a comprehensive summary of the most recent developments in various aspects（i．e．,cultivating mycelia and fruiting body,components and pharmacological activities）．The contents and data would serve as useful references for further investigation,production and application of Lepista sordida in functional foods and therapeutic agents．

Lepista sordida;artificial domestication;pharmacological functions

S646.9

A

1003-8310（2017）01-0005-05

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．01．002

唐萌 （1992-），女，在讀碩士研究生，研究方向：花臉香蘑抗氧化及抗菌活性研究。E-mail:417621956＠qq．com

*通信作者：王蘭英（1982-），女，博士，講師，主要從事藥（食）用菌活性物質開發。E-mail:wanglanying922＠163．com

2016-11-22