肝膽胰惡性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及臨床意義

華付 楊大剛 孫誠誼

(貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550004)

肝膽胰惡性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及臨床意義

華付 楊大剛△孫誠誼

(貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550004)

肝膽胰； 惡性腫瘤； 外周血； T淋巴細(xì)胞亞群

機(jī)體的免疫情況與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切的聯(lián)系。當(dāng)宿主的免疫功能低下或受到抑制時(shí)，腫瘤發(fā)生率高；且腫瘤一旦發(fā)生又可通過其產(chǎn)生的免疫抑制因子進(jìn)一步抑制機(jī)體的防御功能。在抗腫瘤免疫中，細(xì)胞免疫尤其是T淋巴細(xì)胞的作用更為重要。T淋巴細(xì)胞參與機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，其亞群的數(shù)量是反應(yīng)機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)。本文應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測肝膽胰惡性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量，以了解這部分患者的免疫功能情況。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

所選對象均為2011年4-10月在我科住院的患者。腫瘤組31例，男17例，女14例，年齡34～74歲，平均(59.6±11.3)歲。其中肝癌8例、膽管癌9例、膽囊癌2例、壺腹周圍癌5例，胰頭癌7例。病理診斷10例，臨床診斷21例。所有病例均未應(yīng)用化療、放療和其他對免疫功能有影響的藥物。非腫瘤組為35例，男20例，女15例，年齡25～78歲，平均(53.1±15.9)歲。其中膽囊結(jié)石25例，膽囊息肉1例，膽總管結(jié)石6例，膽總管下端狹窄1例，脾血管瘤1例，肝血管瘤1例。所有病例均排除腫瘤相關(guān)疾病及對免疫功能有影響的藥物使用史。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑 BD公司FACSCanto流式細(xì)胞儀(美國BD公司)；絕對計(jì)數(shù)管(BD True count Tubes)；BD Tritest CD3/4/8抗人熒光試劑；溶血素(BD Simultest IMK-Lymphocyte Lysing Soloution)。

1.2.2 方法 研究對象入院后抽取空腹肘靜脈血2 mL于EDTA-K2(乙二胺四乙酸二鉀)抗凝管中，向True count管中分別加入20 μL抗體和50 μL的抗凝全血，混勻后于室溫暗處孵育15 min。加入FACS(1×)溶血素2 mL，充分混勻后于室溫暗處孵育10 min。1 000r/min離心5 min，棄上清，加2 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)洗1次。1 000r/min再次離心5 min，棄上清，加0.5 mL PBS充分混勻，24 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。應(yīng)用CaliBRITE標(biāo)準(zhǔn)微球、FACSCanto軟件調(diào)節(jié)PMT電壓、熒光補(bǔ)償及靈敏度，應(yīng)用FACS Diva分析軟件對處理好的標(biāo)本進(jìn)行CD3+，CD4+，CD8+絕對計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

腫瘤組和非腫瘤組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。腫瘤組T細(xì)胞亞群與非腫瘤組比較，腫瘤患者CD3+、CD4+絕對計(jì)數(shù)降低，CD8+絕對計(jì)數(shù)升高，CD4+/CD8+比值降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 惡性腫瘤組患者T細(xì)胞亞群與非腫瘤組比較/(個(gè)/μL)

3 討 論

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。正常的免疫系統(tǒng)在機(jī)體抗腫瘤的免疫監(jiān)視功能中起重要作用。T細(xì)胞及其亞群是機(jī)體的主要效應(yīng)細(xì)胞，在維持機(jī)體免疫平衡中起著重要作用。當(dāng)它們在數(shù)量和功能上發(fā)生改變時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂而出現(xiàn)一些病理現(xiàn)象[1-2]。FCM根據(jù)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的不同可檢測各細(xì)胞亞群的數(shù)量和比例，包括T淋巴細(xì)胞(CD3+)、B淋巴細(xì)胞(CD19+)、NK細(xì)胞(CD16+CD56+)，其中T淋巴細(xì)胞可進(jìn)一步測定輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞(CD3+CD4+)、抑制/細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CD3+CD8+)[3]。不同的T細(xì)胞亞群有不同的免疫功能，CD3+抗原分子通常分布在成熟T細(xì)胞表面，故CD3+T細(xì)胞數(shù)量可代表機(jī)體總T細(xì)胞數(shù)量，反應(yīng)機(jī)體總的細(xì)胞免疫狀態(tài)。而CD4+T細(xì)胞通常代表T輔助細(xì)胞，CD4+細(xì)胞對抗體的生成、巨噬細(xì)胞及細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的活化有輔助和放大效應(yīng)，在免疫應(yīng)答中處于中心地位，可識(shí)別腫瘤細(xì)胞分泌的可溶性抗原，參與B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和細(xì)胞毒T細(xì)胞的激活，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤作用。CD8+T細(xì)胞通常代表T抑制細(xì)胞，抑制機(jī)體免疫應(yīng)答。CD4+/CD8+的比值反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)是否穩(wěn)定，比值降低代表細(xì)胞免疫功能降低[4-6]。本研究結(jié)果顯示：惡性腫瘤患者的CD4+細(xì)胞明顯降低，反應(yīng)患者T細(xì)胞的輔助功能下調(diào)，在產(chǎn)生抗體、殺傷癌細(xì)胞等方面的能力都明顯下降。惡性腫瘤患者CD4+細(xì)胞降低，CD8+細(xì)胞增高，CD4+/CD8+的比值低于非腫瘤患者。提示肝膽胰惡性腫瘤患者存在細(xì)胞免疫功能低下。有研究[7]顯示CD4+/CD8+比值隨著腫瘤分期的提高而明顯降低，提示腫瘤患者T細(xì)胞亞群功能的損害與臨床分期有明顯關(guān)系。由此可見通過觀察CD4+/CD8+比值可以對腫瘤患者預(yù)后有初步的判斷。

通過本研究可發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者存在T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫改變和紊亂，因此檢測患者外周血T細(xì)胞亞群的變化可直接反應(yīng)機(jī)體的免疫功能狀態(tài)。而檢測腫瘤患者T細(xì)胞亞群水平對評(píng)估他們的細(xì)胞免疫功能及為臨床進(jìn)一步對惡性腫瘤治療效果的評(píng)價(jià)提供臨床參考依據(jù)，也為腫瘤的免疫增強(qiáng)治療提供了理論依據(jù)。

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1000-744X(2016)04-0384-02

2015-06-16)

△通信作者,E-mail:gygd_yangdg@sina.com